Objective: Nandrolone decanoate (ND) is an anabolic-androgenic steroid frequently used for clinical treatment. However, the inappropriate use of ND results in the reduction of serum testosterone level and sperm production. The suppressive effect of ND on testosterone production has not been investigated in detail. The present study was designed to examine the effect of ND on the expression of steroidogenic enzymes in the rat testis. Methods: Male Sprague Dawley rats at 50 days of age were subcutaneously administrated with either 2 or 10 mg of ND/kg body weight/week for 2 or 12 weeks. The changes of transcript and protein levels of steroidogenic enzymes in the testis were determined by real-time polymerase chain reaction and western blotting analyses, respectively. Moreover, immunohistochemical analysis was employed to determine the changes of immunostaining intensity of these enzymes. The steroidogenic enzymes investigated were steroidogenic acute regulatory protein, cytochrome P450 side chain cleavage enzyme, $17{\alpha}-hydroxylase$, $3{\beta}-hydroxysteroid$ dehydrogenase, and cytochrome P450 aromatase. Results: The treatment of ND resulted in depletion of Leydig cells and sloughing of germ cells in the testis. The ND treatment caused significant expressional decreases of steroidogenic enzymes at transcript and protein levels, and the destructive effects of ND on the testis were more apparent with a higher dose and a longer period of the treatment. Evident reduction of immunostaining intensity present in Leydig cells was clearly detected by the ND treatment. Conclusion: The exposure to ND in young male results not only in histological changes of the testis but also in aberrant gene expression of testicular steroidogenic enzymes, consequently leading into the reduction of testosterone production in the testis and thus likely disruption of spermatogenesis.
Protein carboxyl Ο-methylation is a kind of enzymatic reaction producing carboxyl methylester catalyzed by protein carboxyl Ο-methyltransferases at the carboxyl group of amino acid residues in polypeptide. Since the finding of carboxyl methylesterl many studies have been focused on the under-standing of biological functions in eukaryotes but still not clear except for roles in Ras attachment to membrane and protein repair. In this study, we investigated the protein carboxyl methylation in porcine liver and testis in respect of identification and characterization of carboxyl methylesters and natural proteinous substrates using pH stability of the esters and electrophoresis under acidic and basic conditions. We detected several kinds of methyl esters, 3 kinds each in cytosolic fractions from liver and testis. Under the treatment of strong acid and base, the ratio between base-stable substrates and unstable ones in liver (4 : 6) was different from the ratio obtained in testis (6 : 4). The methyl accepting capacities were affected by enzymatic proteolysis between the range of 55 to 65% in liver and of 35 to 45% in testis. Separation of the methylated proteins by acidic electrophoresis in the presence of urea and SDS revealed distinctively natural substrates of 26, 33 and 80 kD in the cytosol from liver and of 14, 25, 32 and 86 kD from testis. Most of the labelling, however were lost following electrophoresis under moderate alkaline condition, except for molecules of newly detected 7 and 17 kD in livers and 15, 29, 40 and 80 kD in testis. From these results, it was proposed that protein carboxyl Ο-methylation in each organs may be catalyzed by different classes of protein carboxyl Ο-methyltransferases. In addition, it is suggested that the protein carboxyl methylation in liver and testis may have different patterns in respect of natural substrates.
19-norandrostenedione(19-NORA) is known as an intermediate in the metabolic pathway from androstenedione to estrone. Administration of esterified 19-nortestosterone, anabolic steroid, reduces serum gonadotropin and testosterone concentration, and results in reversible azoospermia in men. 19-NORA have been isolated from testis, but its function in testis is not clear yet. Therefore, this study was designed to determine the effect of 19-NORA on steroidogenesis and on spermatogenesis. 19-NORA was administrated by single intratesticular injection to adult male rats weighing 350-400 g in dose of 1 mg/50${\mu}l$. The serum and testis were collected on 1, 3, 7, 12, 48 hr after injection. The histological differences in testis were observed by routine paraffin method. The concentrations of testosterone and estradiol in serum and in left testis were determined by the conventional radioimmunoassays. One hour after 19-NORA treatment, serum concentrations of testosterone and estradiol increased significantly, compared to those of pre-treated(0 hr) group, and reduced gradually to the control level on 7 hour after injection. The concentration of testosterone in left testis increased slightly 1 hour after injection, and estradiol level increased significantly(p<0.05). Also, testosterone and estradiol level of control group revealed no difference with pre-treated (0 hr) group. Gonad index, structure of seminiferous tubules, and the number of step 7 th spermatid were simillar to control group. The present study suggests that the elevation of testosterone level results from increment of estradiol followed by the rapid metabolism of 19-NORA at 7 hour after injection, and then testosterone concentration may be recovered to control level by feedback mechanism of hypothalamus-hypothysis-testis axis.
The epididymal fat is a type of gonadal adipose tissue, which is localized closely to the testis. Even though it has been suggested that the epididymal fat is necessary for maintenance of spermatogenesis in the testis, the influence of epididymal fat on expression of testicular steroidogenic enzymes has not been examined. In the present research, expressional changes of steroidogenic enzymes in the mouse testis after 2 weeks of the surgical partial lipectomy of epididymal fat at different postnatal ages were determined by real-time polymerase chain reaction analysis. The transcript levels of all molecules at 2 months of postnatal age were significantly increased by the lipectomy of epididymal fat. However, the lipectomy at 5 months of postnatal age resulted in decreases of expression levels of all molecules examined in the testis. Except a reduced transcript level of hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 3, there were no significant changes of expression levels of other steroidogenic enzymes by the lipectomy at 8 months of postnatal age. At 12 months of postnatal age, the lipectomy caused a significant increase of transcript level of steroidogenic acute regulatory protein and a significant decrease of transcript level of hydroxy-delta-5-steroid dehydrogenase, 3 beta- and steroid delta-isomerase 1, without any expressional change of cytochrome P450 side chain cleavage, hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 3, and hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 3 in the testis. These findings suggest that the substances derived from epididymal fat could differentially influence on expression of steroidogenic enzymes in the testis during postnatal period.
CD30 is a member of tumor necrosis factor receptor (TNFR) superfamily and has pleiotropic functions including cell activation, proliferation, differentiation, and death, depending on cell types and stage of differentiation. Although CD30 expression has been described mainly in hematopoietic tissues, several types of nonhematopoietic tumors including embryonic carcinoma and germ-cell tumors express CD30. We examined CD30 distribution in the testis and epididymis from wild type and CD30-deficient mice. In the testis, spermatogonia, spermatocytes and Sertoli cells expressed CD30, but not in spermatids. Spermatogonia and spermatocytes near the basement membrane strongly reacted to anti-CD30. In the epididymis, CD30 expression was exclusively observed in luminal epithelia and some interstitial cells. Taken together, these results show a spatio-temporal regulation of CD30 expression in mouse testis and epididymis and suggest a possible role of CD30 in spermatogonia and spermatocytes.
The testis is composed of four cell types like supporting cells, steroid-producing cells, connective tissue cells and germ cells. Apoptosis is a common phenomenon during spormatogenesis. Apoptosis of germ cells can also be induced by exposure to radiation. Previous studies have shown that most types of germ cells are rather radiosensitive while somatic cells in testis are much more radio-resistant. The somatic cells in testis are divided to mainly Sertoli and Leydig cells. Though somatic cells are more radio-resistant than germ cells, radiation can induce the impairment of their function. This damaged function of somatic cells may accelerates degeneration of germ cell indirectly. Tn the present study, we have examined the apoptotic effect of mouse testis and irradiation effect of steroidogenesis of Leydig cells after irradiation.
Plasma melatonin in the seasonal light-period is circadian rhythmically secreted. Maximal secretion showed at 14 o'clock in summer- and winter-like period, but minimal secretion showed at 5 o'clock in summer-like period and at 8 in winter-like period. These times of minimal secretions were at the beginning of light period. Plasma melatonin in the light period is secreted 62.5% more than in the dark period in summer-like period and 45.9% more in winter-like period. Total plasma melatonin in winter-like period is secreted 56.5% more than in summer-like period. The weights of testis(-20.8%) and body(-7.1%) were reduced in the winter-like period. By the increase of plasma melatonin in mice, body- and testis-weights are decreased, on the contrary by the decrease of plasma melatonin in mice, body and testis weights are increased. In view of the results so far achieved melatonin changes on the body weight and reproductive organ in mice. It is presumed that melatonin effects on the metabolism and sex hormone.
The objective of the present study was to investigate the survival effect after transplantation of pig spermatogonia cells into mouse testis. Donor cells were collected from porcine testis and the isolated spermatogonial stem cells were labeled with a fluorescent marker before transplantation and transplanted into testes of busulfan-treated recipient mice. Testes were examined for the presence and localization of labeled donor cells immediately after transplantation or every week for 4 wk. Transplanted germ cells were present in the seminiferous epithelium at 4 weeks after the transplantation, but any differentiating porcine-derived cells were not detected in mouse testis. These results indicate that porcine-derived spermatogonial stem cells can be survived in the recipient, but suggest that porcine-derived male stem cells can not proceed to further differentiating step without helping of immunosuppressor agents.
Plasma melatonin in the seasonal light-period is circadian rhythmically secreted. Maximal secretion showed at 14 o'clock in summer- and winter-like period, but minimal secretion showed at 5 o'clock in summer-like period and at 8 in winter-like period. These times of minimal secretions were at the beginning of light period. Plasma melatonin in the light period is secreted 62.5% more than in the dark period in summer- like period and 45.9% more in winter- like period. Total plasma melatonin in winter-like period is secreted 56.5% more than in summer-like period. The weights of testis (-20.8%) and body (-7.1%) were reduced in the winter-like period. By the increase of plasma melatonin in mice, body - and testis -weights are decreased, on the contrary by the decrease of plasma melatonin in mice, body and testis weights are increased. In view of the results so far achieved melatonin changes on the body weight and reproductive organ in mice. It is presumed that melatonin effects on the metabolism and sex hormone.
Responsiveness of the testis to pregnant mare's serum gonadotropin (PMSG) was studied in immature Nili-Ravi buffalo bulls. Four month old bull calves weighing between 66 to 100 kg raised under uniform condition, were treated with 1000 IU PMSG or vehicle, daily, for six days. PMSG induced an increase in the size of the testis, enlargement of the seminiferous tubules and activation of the spermatogonia. The number of differentiated Leydig cells in the testis of gonadotropin treated animals increased considerably over that of the control testes. A significant increase in plasma testosterone concentrations was observed 24 h following the first injection of PMSG and the levels continued to increase until day 6. In vehicle treated animals plasma testosterone levels remained more or less at pretreatment values. The data suggest that buffalo bull testis is functionally responsive to gonadotropin at an early stage of prepubertal development.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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