본 연구에서 우리는 광양만의 해수와 표층 퇴적물에서 TBTCl 내성세균의 개체수를 조사하였다. 광양만에서 TBTCl 내성세균의 개체수는 해수에서 $2.5{\times}10^3-3.8{\times}10^3$ cfu/mL 범위였으며, 표층 퇴적물에서 TBTCl 내성세균의 개체수는 $3.2{\times}10^5-9.1{\times}10^5$ cfu/g 범위였다. 광양만에서 TBTCl 내성세균의 종조성은 Vibrio spp. (19.2%)가 가장 높은 우점종으로 나타났고, Bacillus spp. (16.2%), Aeromonas spp. (15.2%), Pseudomonas spp. (13.1%), Klebsiella spp. (11.1%), Alteromonas spp. (9.1%), Pantoea spp. (6.1%), Proteus spp. (3.0%), Listeria spp. (2.0%), unidentified (5.0%)의 순으로 우점하였다. 또한 11개의 대표적인 TBTCl 내성균주는 여러 중금속들(Cd, Cu, Hg 및 Zn)에도 내성을 나타내었다. 이들 중에서 가장 강한 TBTCl 내성을 보이는 T7 균주를 선별하여, API 20NE등을 이용하여 본 균주의 형태학적, 생리학적 및 생화학적 특성들을 조사하였다. T7 균주는 16S rRNA gene 염기서열 분석에 의해 Pantoea 속으로 동정되어 Pantoea sp. T7으로 명명되었다. 또한 본 균주는 $500{\mu}M$의 TBTCl 농도에서도 60시간 배양 후에 정상 균주 성장의 50.7%까지 증식하였다. Pantoea sp. T7의 생물학적 TBTCl 분해활성은 GC-FPD 분석에 의해 측정되었는데, $100{\mu}M$의 TBTCl 농도에서 배양 40시간 후에 TBTCl 제거 효율은 62.7%로 나타났다.
TBTCl(0.1, 0.32, 1, 3.2, 10, 25, 32, 50, 75 및 100 $\mug/l$)을 구피에게 144시간 동안 노출시켜 TBTCl의 구피 생체 내 축적정도 및 구피의 번식과 행동에 미치는 영향에 대해서 조사하였다. 0.1 $\mug/l$ 이상의 모든 TBTCl 실험군에서 $\SigmaBTs\; (TBT:\SigmaBTs)$가 67% 이상으로 매우 높았고, 고농도 실험군일수록 이 비율이 높아져, 고농도의 TBTCl에 노출될수록 구피의 대사능력이 저해됨을 알 수 있었다. 또한 TBTCl은 구피의 번식력을 약화시키고 행동이상을 유발함이 밝혀졌다. 즉, 0.1$\mug/l$의 실험군부터 수컷의 구애행동과 수출관 내 정포의 수가 감소되었고, 0.32∼10 $\mug/l$의 실험군에서는 정소 내 전체 생식세포낭에 대한 정포낭의 수도 점차 감소하여 TBTCl이 정자변태 과정에 영향을 미치는 내분비계 장애물질로서 작용하고 있음이 시사되었다. 더욱이 25 $\mug/l$이상의 고농도군에서는 단기간 내에 치사율이 증가하고, 생식세포가 괴사되고, 정소의 지지세포와 수출관 내의 상피세포가 상해되고, 유영행동 이상이 급증하고, 섭식이 중단되는 등 급성독성이 관찰되어, TBTCl이 구피의 번식 뿐 아니라 생존을 저해하고 있음이 시사되었다.
This study was conducted to find out biological response of bivalves exposed to tributyltin chloride(TBTCl). The results of the study confirmed that TBTCl induce the reduction of oxygen consumption rateand histopathological feature in the gill structure of equilateral venus, Gomphina veneriformis. The experi-mental groups consisted of a control and 3 TBTCl exposure groups (0.4, 0.6 and 0.8 yg TBTCl L') and theexperimental period was 36 weeks. For histological analysis, gill tissues were fixed in Bouin's fluid andthen stained H-E stain, AB-PAS (PH 2.5) reaction and Masson's trichrome stain after having serially sec-tioned the tissue by paraffin method at thickness of 4-6 (an. The oxygen consumption rate was not signifi-cantly different between the control and exposure groups at 4 weeks, but in all exposure groups at 28 weeks,it was significantly different to the control. Gill of G. veneriformis had demibranch that attached two sheetsof lamellae and a lamella was composed of numerous filaments, numbering 25 on average. The frontal fila-ment zone had three types of cilia; frontal, latero-frontal and lateral depending on locations while the lateralcilia were the longest and largest in number. The mucous cells observed in filaments were more abundant in(542c) in AB-PAS (PH 2.5) reaction. Gill exposed to TBTCl was extended hemolymph sinus and increased hemocytes at 4 weeks, and then it showed increases of mucous cells and partially disappearance of frontalcilia. In the group of 0.8 yg TBTCl L' at 12 weeks, hypertrophy of frontal and latero-frontal epithelia wasobserved. Also it observed m decrease of mucous cell containing weekly acid mucosubstance and appearedpartially destruction muscle fiber bundle, In the groups of 0.4 and 0.6 ug TBTCl L' at 36 weeks, it appearedpartially modification of epithelia and in 0.8 us TBTCl L' group, observed filaments that come out chiti-nous rod from disappearance of frontal and latero-frontal epithelia.
TBTCl과 bisphenol A (BPA)가 등줄쥐의 번식에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여, 등줄쥐를 비번식기에 포획하여 번식기 직전에TBTCl과 BPA를 근육 주사한 후, 4개월 간 사육하였다. 그 결과, 암 수 모두 체중 증가량에 차이가 없었고, 수컷 체내의 각 화합물의 체내 잔류량, 성체와 새끼(F1) 수컷에 대한 생식소중량지수(GSI) 및 정소와 부정소의 광학 및 전자현미경 조직상이 대조군과 별다른 차이점을 보이지 않았다. 그러나 TBTCl 투여군에서는 출생한 태아의 사망 빈도가 높고, BPA 투여군에서는 유산율이 대조군에 비해서 높았다. 이로부터, 비번 식기의 성체 등줄쥐에게 TBTCl과 BPA를 단기간 투여했을 때, 이들 물질은 체내에 장기간 잔류하지 않으며, 성체 및 다음 세대 수컷의 생식기관에 영향을 미치지 않지만, 수태된 태아의 발생을 저해하는 물질임이 밝혀졌다.
우리나라 전 연안의 조간대에 분포하고 있는 총알고둥을 대상으로 생존, 성장, 호흡, 배설에 미치는 유기주석, 수은 및 카드뮴의 만성저해성 연구를 통하여, 오염으로 인한 독성과 그에 따른 내성등을 생물학적 방법을 이용하여 조사하였다. 수온 $23^{\circ}C$에서 80일 동안 TBTCl, Hg 및 Cd의 각 실험농도에 폭로시킨 총알고둥의 생존율은 TBTCl, 0.9$\mu$g/$\ell$에서 $80\%$, Hg, 200$\mu$g/$\ell$에서 $25\%$, 그리고 Cd, 100$\mu$g/$\ell$에서는 $45\%$였다. 각 실험농도에 폭로된 총알고둥의 일일 평균 성장률은 대조구에서 0.023mm/day였으며, TBTCl의 경우는 0.1 $\mu$g/$\ell$에서 0.019mm/day로 $17.39\%$, 0.9 $\mu$g/$\ell$에서는 0.014 mm/day로 $39.13\%$ 감소하였으며, Hg의 경우는 50 $\mu$g/$\ell$에서 0.015 mm/day로 $34.78\%$, 200 $\mu$g/$\ell$에서는 0.008mm/day으로 $65.22\%$ 감소하였다. 그리고 Cd의 경우는 5$\mu$g/$\ell$에서 0.017 mm/day로 $26.09\%$, 100 $\mu$g/$\ell$에서는 0.008 mm/day으로 $65.22\%$ 감소하였다. TBTCl, Hg 그리고 Cd의 각 저해농도에 폭로시킨 총알고둥의 호흡 및 질소 배설률은 폭로시간의 경과에 따라 대체로 폭로전반에는 감소하다가 다시 증가하는 경향을 보였다. 각 오염원에 따른 조직학적 변화양상은 TBTCl에서 아가미, Hg에서는 소화관 그리고 Cd의 경우에는 발 근육층부분에서 가장 크게 나타났다.
This study was conducted to find out biological responses of bivalves exposed to organotin compound.The results of the study confirmed that tribultyltin chloride (TBTCl) induce reduction of survival rate andburrowing activity, and histopathological feature in the foot structure of the equilateral venus, Gomphinaveneriformis. The experimental period was 36 weeks. The experimental groups consisted of a control and 3TBTCl exposure groups (0.4, 0.6, 0.8 ym TBTCl L'). The survival rate and burrowing activity were record-ed daily. For histological analysis, foot tissues were fixed in Bouin' s fluid and then stained H-E stain, AB-PAS (PH 2.5) reaction and Masson's trichrome stain after having serially sectioned the tissue by paraffinmethod at thickness of 4-6 ym. The survival rate was not significantly different between the control andexposure groups for 20 weeks, but in 0.8 Um TBTCl L', it was on the decreased ever since the exposure. Theburrowing activity was not significantly different in the exposure group compared to the control up to 12weeks, but in 0.6 and 0.8 ym TBTCl L', it measured the lowest level after 20 weeks. The foot is composedof the epidermal layer, connective tissue, and muscular layer. The epidermal layer is composed of simplecolumnar, cuboidal epithelia and mucous cells. The cilia were well developed on the apical surface ofepithelium, Circular, longitudinal and transverse muscle bundle were well developed in the muscular layer.The majority mucous cells showed blue color (542c) when it subjected to AB-PAS (PH 2.5) reaction. Nohistopathological alterations in the foot were observed up to 12 weeks. After 20 weeks of exposure to 0.8 (anTBTCl L'', the foot samples of exposed G. veneriformis showed disappearance of cilia and striated borderpartially and extension of hemolymph sinus. The mucous cell increased in the marginal of foot. At 28-weekof exposure to 0.4 ym TBTCl L', it observed weekly acid (564c), neutral (264c) and mixed mucous cell. At36-week of exposure to 0.6 ym TBTCl L', it showed fragmentation of the muscle and collagen fiber bundle,and also diappearance of cilia on epithelia and edema of epithelium in 0.8 ym TBTCl L''.
TBTCl에 36주 동안 노출된 대복, Gomphina veneriformis 의 미세구조적인 변화를 전자현미경으로 관찰하였다. 대복의 외투막은 가장자리에 4개의 주름을 가지며, 내부와 외부상피층이 단층의 원주형 상피세포, 섬모세포, 분비세포로 구성되어 있었다. 이들 상피층은 혈림프동이 존재하는 결합조직층을 둘러싸고 있었다. 대복의 외투막은 TBTCl 노출 12주째 내부상피층에 존재하는 섬모의 수가 감소하였으며, 혈림프동의 확장과 함께 격막의 파괴가 관찰되었다. 노출 20주째 세포질내의 공포형성, 핵응축과 같은 변화가 관찰되었고, 결합조직층에서는 근섬유다발의 분절이 부분적으로 관찰되었다. 노출 28주째 상피층의 부분적인 붕괴, 섬모의 변화 및 섬모세포에 존재하는 미세구조가 괴사되었다. 결합조직층에 존재하는 다수의 근형질막은 팽창되었으며, 막의 내부에는 근섬유들이 대부분 파괴되어 막 주변에 근섬유 잔여물들이 관찰되었다. 노출 36주째에는 섬모들은 모두 탈락되고, 핵 응축되고, 이형소체의 증가가 나타나는 퇴행성 상피세포가 나타났다. 외부상피층의 상피세포들이 괴상되어 핵이 파괴되고, 세포질 내에는 다수의 용해소체들이 가득 차 있었으며, 미세융모들은 대부분 소실되었다. 따라서 만성적인 TBTCl 노출은 대복의 외투막은 각장성장 및 생리적인 기능의 장애를 유발하는 것으로 생각된다.
TBTCl에 36주 동안 노출된 대복, Gomphina veneriformis 소화선의 미세구조적 변화와 지방갈색소의 축적을 관찰한 결과 외막상피층의 경우 점액세포 감소, 섬모 탈락 및 선조연의 부분적인 소실이 관찰되었다. 소화선세관에서는 저농도의 개체들에서 소화선세관 내강에 소화효소의 양이 증가하였지만 농도 의존적으로 소화선세관의 세포들이 입방형 또는 편평형으로 변하여 세포층의 두께가 얇아지며, 부분적으로 파괴가 관찰되었다. 이러한 광학현미경적 증상들을 자현미경으로 관찰한 결과 내장낭 외막 상피세포와 소화선세관을 둘러싸고 있는 근섬유사이에는 다수의 글리코겐 과립들이 관찰되었고, 호염기성 세포들에서는 조면소포체의 파괴와 세포의 괴사로 인하여 핵의 응축 및 핵막의 파괴가 관찰되었다. 이러한 소화선세관 세포들의 변화로 세포층은 고농도로 대조구와 유의적인 차이를 보이며, 두께가 감소하였다 (P < 0.05). Long Ziehl Neelsen 염 결과, 소화선세관의 세포에서 자주색으로 관찰되는 지방갈색소는 대조구와 유의적인 차이를 보이며 증가하였지만 (P < 0.05), 노출이 진행될수록 소화선세관 세포들이 파괴됨에 따라 그 축적도 감소하였다. 따라서 본 연구 결과 TBT는 대복 소화선세관 세포들의 미세구조를 파괴함에 따라서 이들 세포들이 가지는 소화기능을 억제하는 것으로 생각되어지며, 농도 의존적으로 지방갈색소의 축적이 높아지기 때문에 지방 갈색소는 TBT의 오염정도를 파악하기 위한 biomarker로서 충분히 이용 가능한 것으로 생각된다.
This study involves a relationship between butyltins concentrations and histopathological changes of the digestive gland in the equilateral venus, Gomphina veneriformis exposed to TBTCl of 0.4, 0.6 and 0.8 ${\mu}g/L$ for 36 weeks. In the sediment, total butyltin (${\sum}BT$) concentration was detected ND~7.54 (0.4 ${\mu}g/L$), ND~9.76 (0.6 ${\mu}g/L$), 1.22~13.13 ${\mu}g/L$ (0.8 ${\mu}g/L$), respectively. Especially, TBT level in 0.8 ${\mu}g/L$ group was the highest for 36 weeks. In the soft tissue, total butyltin (${\sum}BT$) concentration of the exposure group was 10.14~12.75 (control), 479.29~1,286.56 (0.4 ${\mu}g/L$), 563.32~2,154.82 (0.6 ${\mu}g/L$) and 1,317.70~2,132.60 ${\mu}g/L$ (0.8 ${\mu}g/L$), respectively. Ratio of TBT to ${\sum}BT$ of the tissue of 0.8 ${\mu}g/L$ kept the lowest level for 36 weeks. The ${\sum}BT$ concentrations of sediment were correlated with ${\sum}BT$ concentrations in the tissue. In the exposure groups, necrosis and atrophy of columnar epithelial cell and collapse of epithelial layer in the digestive tubule. And there was a reduction in stain affinity of basophilic cell. Such histological degenerations was more severe in digestive tubule of 0.8 ${\mu}g/L$ group.
TBTCl에 36주 동안 노출된 대복(Gomphina veneriformis)의 성장과 외투막의 조직학적 변화를 관찰하였다. 대복의 성장은 모든 실험구의 개체들이 12주 이후부터 대조구에 비해 유의적인 차이를 보이며 감소하였다(p < 0.05). 대복의 외투막은 가장자리에 4 개의 주름 (내부 안쪽, 외부 안쪽, 가운데, 바깥쪽)을 가지며, 단층의 원주형 상피층이 결합조직층을 둘러싸고 있는 구조였다. 대복의 외투막은 TBTCl 노출 12주 이후부터 혈림프동이 확장과 근섬유 다발의 분절이 관찰되었다. 노출 20주에는 내부상피층에 존재하는 점액세포들이 대조구보다 유의적인 차이를 보이며 감소하였지만(p < 0.05), 외투막 가장자리에 존재하는 주름들에서는 노출 12주까지 감소하였던 점액세포가 증가하면서 AB-PAS (pH 2.5) 반응시 보라색 (2587c)으로 관찰되는 점액물질이 관찰되었다. 이후 노출 28주에는 가운데 주름 부위의 안쪽 분지에서 상피세포의 변형이 관찰되었고, 외부 상피층에서는 상피세포의 부분적인 파괴가 관찰되었다. 실험 종료시기인 36주에는 바깥쪽 주름 부위에 호산성 과립들이 관찰되었으며, 가운데 주름부위의 바깥 분지에서 상피세포의 변형과 파괴로 인한 상피층의 붕괴가 관찰되었다. 또한 외부 상피층의 상피세포들은 입방형 또는 편평형으로의 변화와 함께 부분적인 상피층의 붕괴가 나타났고, 그로 인하여 상피층의 두께가 감소하였다. 따라서 섬모의 탈락과 점액세포의 감소 그리고 상피층의 파괴는 외투강 정화 기능의 장애로 인한 먹이 섭식의 장애를 유발할 것으로 생각되며, 특히 외투막 가장자리에 존재하는 주름들의 구조적인 변화는 각피층 형성을 억제하여 패각 성장 장애의 직접적인 원인으로 생각되어진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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