The aim of the present study was to develop strains of actinomycetes producing low molecular weight cathepsin B inhibitor. Among 700 isolates from soil samples, a strain of Streptomyces sp. SMF30 producing cathepsin B inhibitor showing specificity and heat stability was selected by an economical and effective screening method. 50 units characteristics for major cluster analysis and 34 units characteristics for minor cluster were tested and the data were analyzed numerically using the TAXON program. The Isolate SMF30 was identified as a strain of Streptomyces aburabiensis
본 실험에서는 숲속 토양으로부터 산성조건에서 생장이가능한 내산성 균주를 분리 동정하였다. 분리된 균주는 형태적 관찰과 박층 크로마토그래피에 의한 세포벽 분석과 ISP 분류 기준에 따른 생리적 실험을 통하여 동정하였으며, 이 균주의 포자는 형태가 간상형이고 표면구조는 매끈한 형태였다. 포자의 배열형태는 compact spiral 구조였으며 이 균주는 명확한 포자낭벽을 갖고 있지 않았고, 세포벽 분석결과에 따르면 Streptomyces 속에 속하는 것으로 밝혀졌다. 또한 중성조건에서 생장이 우수하나 산성조건에서도 생장이 가능한 내산성 균주로써, Nonomura의 분류 기준에 의하면 Streptomyces mirabilis인 것으로 동정되었다.
Streptomyces sp. P3 균주는 대한민국 강원도 평창의 더뎅이병 이병괴경으로부터 2017년 분리되었다. 이 논문에서는 9,851,971 bp (71.2% G + C 함량)로 구성된 P3 균주의 전체염기서열을 보고한다. 지놈은 8,548개의 코딩서열, 18개의 rRNA 그리고 66개의 tRNA 유전자를 포함하고 있다. 특히 P3 균주는 감자표면과 무종자를 이용한 병원성 검정에서 병원성을 나타내지는 않았지만, 감자 더뎅이병 유발 Streptomyces들이 보유한 병원성 유전자 중 tomA 유전자만이 존재하였다. 따라서 본 논문에 제공되는 전체염기서열은 감자 더뎅이병원세균들의 병원성 획득을 위한 진화단계에서의 이해를 높이기 위한 중요한 단서가 될 것이다.
항진균 활성 관련 단백질을 찾기 위해 미역류로부터 Streptomyces sp. SAR01을 분리하고, FAME (fatty acid methyl ester)분석으로 동정하였다. 감마선(sup $({60}^Co)$)조사를 이용하여 항진균 활성 결핍 돌연변이체(SAR535)를 유도한 후, 이차원전기영동으로 단백질을 분석한 결과 SAR01에만 존재하는 6종의 단백질을 확인할 수 있었다. 이중 10 kDa chaperonin cpn10 (GroES)과 96%의 상동성을 가진 10 kDa의 단백질을 클로닝하였으며, E. coli Ml5에서 과대 발현됨을 확인하였다. 또한 SAR535에 형질전환시킨 결과 SAR01과 유사한 항진균 활성이 나타났다. 이것으로 볼 때 groES는 Streptomyces sp. SAR01의 항진균 활성에 관련된 것으로 사료된다.
본 연구는 Streptomyces sp. BH-405의 배양액으로부터 유기용매로 추출하여 지질과 산화에 대한 항산화 효과를 실험하였다. Streptomyces sp. BH-405의 배양액을 ethylether로 추출한 후 silica gel column(100$\times$10 cm) chromatography로 분획한 획분을 POV로 측정한 결과 fraction 3에서 향산화 활성이 가장 높았다. 항산화 활성이 높은 fraction 3 획분을 다시 preparative TLC와 column chromatography로 더욱 정제하여 band 2를 얻었다. Band 2의 항산화 효과를 알아보기 위해 기존의 항산화제와 비교한 결과 이-$\alpha$-tocopherol, BHA보다 산화억제 효과가 높았으며 DPPH에 의한 수소 공여능은 실험결과가 우수하였다. 한편 band 2는 쥐 간의 microsome에 있어서 유리기의 소거기능이 있었고 NADPH 및 Fenton 시액에 위한 효소적 과산화 지질의 생성을 억제하였다. 그리고 mitochondria와 리놀산의 과산화 유도계에서도 지질의 과산화 과정에 생성하는 유리기의 형성을 차단하였다. 결론적으로 Streptomyces sp. BH-405의 배양액에서 얻은 획분인 band 2는 산화를 억제하는 활성이 있었다.
인삼병원균(人蔘病原菌) 억제토양(抑制土壤)으로부터 110종(種)의 방선균(放線菌)을 분리(分離)하여 인삼근부(人蔘根腐) 병원균(病原菌)인 Fusarium solani와 Cylindrocapon destructans에 길항효과(拮抗?果)를 나타내는 3종(種)의 방선균(放線菌)이 형태적 배양적 생리적인 특정에 의거하여 각각 분류동정(分類同定)되었다. 포자사슬의 모양은 강화 6-2(K 6-2) 가 감긴형태 (Spira)였고, 서울 2-1(S 2-1)은 고리형태(Retinaculum-apertum)였으며, 양주 2-2(Y 2-2)는 꾸불꾸불한 형태(Rectus-flexibi-lis)였다. 포자벽 표면의 모양은 강화 6-2(K 6-2)에 서는 바늘모양의 형태(Spiny)인 반면, 서울 2-lCS 2- 1)과 양주 2-2(Y 2-2)에서는 모두 매끄러운 형태(Smooth)였으며, 기생균사체의 색깔은 모두 회색(灰色)계통이었다. 따라서, 강화 6-2(K 6-2), 서울2-lCS 2- 1), 양주 2-2(Y 2-2)는 Streptomyces variabilis, Stre-ptomyces virginiae, Streptomyces griseolus로 각각 분류동정(分類同定)되었다 .
This study was done to know a kind and change (transition) of enzymes produceed by Streptomyces halstedii ssp. scabies SA1-27 and Streptomyces violaceusinger C1-6 which showed good lignolytic activity and a good decolorization ratio of remazol brilliant blue R(RBBR) dye. These strains were isolated from soil and identified by the author. The basal medium containg 0.2% glucose was used to measure enzyme activity, Lignin peroxidase 1 (Lip 1) was measured by the methods of Choi, and Bourbonnais and Paice. Lignin peroxidase 2 (Lip 2) was measured by the methods of Ishida et al and Ramachandra et al using 2.4-dichlorophenol(2.4 DCP), manganese peroxidase(Mnp), veratryl alcohol oxidase (VAO), and laccase. They were measured by each of the methods of Choi and Paszczynski et al, and Bourbonnais and Paice, and De Jong et al. In the results, the kind of enzymes produced by Streptomyces halstedii ssp. scabies SA1-27 were Lip 1, Lip 2, VAO, and laccase, and their activities indicated the highest value as each 4.95 nmol/mg protein, $8.45({\times}100^{-3})unit$, 10.25 nmol/mg protein, 9.20 nmol/mg protein on the sixth day of the culture and decreased gradually over time. The kind of enzymes produced by Streptomyces violaceusinger C1-6 were Lip 1, Lip 2, Mnp, VAO, and laccase, and their activities indicated the highest value as each 4.90 nmol/mg protein, $13.85({\times}100^{-3})unit$, 3.10 nmol/mg protein, 11.30 nmol/mg protein, 4.45 nmol/mg protein on the sixth day of the culture and decreased gradually over time. Consequently, the author knew the fact that there were few differences in the kind and quantity of enzymes produced by the two Streptomyces strains, but all enzyme activities indicated the highest value on the sixth day of the culture and decreased gradually over time.
Streptomyces exfoliatus의 mutan 분해 능력에 영향을 미치는 인자에 대해 알아 보고자 blue mutan 을 이용한 실험을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Blue mutan이 들어 있는 배지에서 Streptomyces exfoliatus에 의한 투명대를 봄으로써 mutanase 의 분비를 확인할 수 있었다. Blue mutan이 들어 있는 여러 종류의 배지 중에서 minimal essential agar 상에서 Streptomyces exfoliatus가 투명대를 형성하였다. Minimal essential broth의 pH가 7.0일 때 pH가 5.5나 8.5일 때보다 blue mutan이 잘 분해되었으며, 배양 온도가 $37^{\circ}C$ 때 $32^{\circ}C$나 $42^{\circ}C$ 때보다 잘 분해되었다 (P<0.05). Minimal essential broth 에서의 blue mutan의 분해는 $CaCl_2$ 농도가 증가할 수록 (P<0.05), KCl 농도가 10mM일 때 증가하였으나, $MgCl_2$ 농도는 0.1mM에서 6.4mM의 범위에서 비슷하였다. Streptomyces exfoliatus 배양 상청액을 0.5% yeast extract와 10% sucrose를 첨가한 2배의 BHI broth에 가한 경우 교정용 wire상에서의 Streptococcus mutans에 의한 인공치태 형성이 유의성있게 억제되었다(P<0.05). 이상의 결과를 종합하면 Streptomyces exfoliatus에서 생성되는 배양 상청액내의 mutanase 가 인공치태 형성에 억제 작용이 있다는 것을 확인할 수 있었다.
본 실험에서는 GI 활성이 높은 alkalophilic Streptomyces sp.를 사용하여 2% $ extsc{k}$-carrageenan에 균체를 고정화 균체의 효소학적 특성을 살펴보았다. pH stability는 pH가 7.5~8.5에서 GI 활성이 가장 높았으며, reaction temperature는 7$0^{\circ}C$, Co2+는 10-3M, Mg2+는 10-3M일 때 GI 활성이 가장 높은 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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