임상검체에서 분리되는 병원균을 주기적으로 분석하고 이에 대한 항균제 감수성의 변화 양상을 파악하는 것은 임상에서의 적절한 항균제의 선택이나 내성균의 감독과 조절을 위해 필수 적이라 할 수 있다. 저자들은 충북대학병원에 1996년 1년간 내원 환자의 미생물 배양 검사에서 분리, 동정된 1,689균주중 Gram양성인 542균주의 분리 빈도 및 주요 균종에 대하여 항생제 감수성 양상을 조사하였다. Gram 양성 균종은 S. aureus, S. pneumoniae, S. epidermidis, S. hemolyticus, coagulase negative Staphylococcus (CNS), Enterococcus faecalis 순으로 분리되었다. 한편, 항생제 감수성 시험 결과 S. aureus의 항생제 감수성은 penicillin과 gentamicin에 대한 저항성이 현저히 높았으며, teicoplanin 과 vancomycin (MIC$_{50}$$\mu\textrm{g}$/ml)에 감수성이 높은 것으로 나타났다. CNS의 경우도 S. aureus와 대동소이 한 결과를 보였으나, S. epidermidis의 경우에는 ciprofloxacin과 clindamycin에 감수성 이 높은 것으로 나타났다. Enterococcus spp.는 vancomycin, penicillin, tetracycline 등에 저항성이 매우 높았으며, 검사한 모든 항생제에 대하여 대부분의 감수성이 zig-zag pattern을 보였다.
Objectives: The usage of medicinal plants as natural antimicrobial agents has grown in many fields including dental medicine. The aim of this in vitro study was three-fold: (i) to determine the chemical compositions of the Ferula gummosa essential oil (FGEO), (ii) to compare the antimicrobial efficacy of the oil with sodium hypochlorite (NaOCl) and chlorhexidine (CHX), (iii) to assess the toxic behavior of FGEO in different concentrations compared to 5% NaOCl and 0.2% CHX. Materials and Methods: Gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) was used to determine the chemical compositions of the oil. The disk diffusion method and a broth micro-dilution susceptibility assay were exploited to assess the antimicrobial efficacy against Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mitis, and Candida albicans. The cytocompatibility of the FGEO was assessed on L929 fibroblasts, and compared to that of NaOCl and CHX. Results: Twenty-seven constituents were recognized in FGEO. The major component of the oil was ${\beta}$-pinene (51.83%). All three irrigants significantly inhibited the growth of all examined microorganisms compared to the negative control group. FGEO at $50{\mu}g/mL$ was effective in lower concentration against Enterococcus faecalis than 5% NaOCl and 0.2% CHX, and was also more potent than 0.2% CHX against Candida albicans and Staphylococcus aureus. FGEO was a cytocompatible solution, and had significantly lower toxicity compared to 5% NaOCl and 0.2% CHX. Conclusions: FGEO showed a promising biological potency as a root canal disinfectant. More investigations are required on the effectiveness of this oil on intracanal bacterial biofilms.
Sepsis is an acute inflammatory response that leads to life-threatening complications if not quickly and adequately treated. Cytolysin, hemolysin, and pneumolysin are toxins produced by gram-positive bacteria and are responsible for resistance to antimicrobial drugs, cause virulence and lead to sepsis. This work assessed the effects of aloe-emodin (AE) and photodynamic therapy (PDT) on sepsis-associated gram-positive bacterial toxins. Standard and antibiotic-resistant Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, and Streptococcus pneumonia bacterial strains were cultured in the dark with varying AE concentrations and later irradiated with 72 J/cm-2 light. Colony and biofilm formation was determined. CCK-8, Griess reagent reaction, and ELISA assays were done on bacteria-infected RAW264.7 cells to determine the cell viability, NO, and IL-1β and IL-6 pro-inflammatory cytokines responses, respectively. Hemolysis and western blot assays were done to determine the effect of treatment on hemolysis activity and sepsis-associated toxins expressions. AE-mediated PDT reduced bacterial survival in a dose-dependent manner with 32 ㎍/ml of AE almost eliminating their survival. Cell proliferation, NO, IL-1β, and IL-6 cytokines production were also significantly downregulated. Further, the hemolytic activities and expressions of cytolysin, hemolysin, and pneumolysin were significantly reduced following AE-mediated PDT. In conclusion, combined use of AE and light (435 ± 10 nm) inactivates MRSA, S. aureus (ATCC 29213), S. pneumoniae (ATCC 49619), MDR-S. pneumoniae, E. faecalis (ATCC 29212), and VRE (ATCC 51299) in an AE-dose dependent manner. AE and light are also effective in reducing biofilm formations, suppressing pro-inflammatory cytokines, hemolytic activities, and inhibiting the expressions of toxins that cause sepsis.
무에서 젖산균의 증식촉진물질을 분리하여 이 물질의 물리화학적 성질과 함께 젖산균의 증식에 미치는 촉진 작용을 연구하였다. 무의 젖산균 증식촉진물질은 메탄올에 침전되며 메탄올을 증발시켰을 때는 회색을 띠는 흰색가루상의 물질로서 수용액에서 적갈색을 띠었고 회분의 함량은 약 44%이었다. 이 촉진물질은 단백질분해 효소나 펙틴분해효소로 처리하였을 때 활성의 변화가 없었다. 회화하여도 활성의 변화가 없었던 것으로 보아 무기질이 활성성분으로 중요하였다. 촉진물질은 0.02% ($Mn\;2{\times}10^{-5}\;M$에 해당됨)의 농도에서 EDTA(1 mM)에 의한 젖산균 증식저해를 정상적으로 회복시켰다. 그러나 이 활성물질의 본질은 아식 규명되지 않았으나 황의 함유량이 특히 높게 분석되었다. 젖산균 증식촉진물질 0.5%를 peptone-yeast extract-glucose(PYG) 액체배지에 첨가하여 Lactobacillus plantarum. L. fermentum, L. leichmanii, L. sake, L. brevis, L. acidophilus, L. casei, Pediococcus pentosaceus, Leuconostoc mesenteroides, Streptococcus faecalis, S. lactis, S. cremoris, S. thermophilus를 배양하였을 때, PYG에 촉진물질의 첨가없이 배양하였을 때에 비해 각각 19, 1833, 133, 444, 840, 32, 14, 18, 6, 17, 4, 5 및 4배의 증식촉진효과가 있었다. 따라서 무와 같은 채소류에는 젖산균의 증식을 촉진하여 젖산발효를 잘 일어나게 하는 물질이 함유되어 있음이 확인되었다.
최근 다양한 분야에서 생물학적 제제개발에 관한 연구가 활발한다. 본 연구에서는 생물학적 제제개발을 위한 일련의 연구로 Pseudomonas aeruginosa KLP-2가 생산하는 항균성 물질을 동정하고, 생리화학적 특성을 확인하였다. 본 항균성 물질을 전제하여 FAB-MS로 확인한 결과 pyocyanine으로 동정되었으며, 진청색의 needles 성상을 나타내었고 chloroform, methanol, ethyl acetate와 같은 용매에 높은 용해도를 나타내었다. Pyocyanine의 UV spectrum은 methanol에서 최대 흡광치(318 nm)를 보였고, FAB-MS로 확인한 결과 m/z 211에서 protonated molecular ion(M+H)$^{+}$ 이 관찰되었으며, 분자식은 $C_{13}$H$_{10}$ N$_{2}$O로 확인되었다. Pyocyanine 은 Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Rodococcus equi, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, E. coli. Kegionella peneumophila, Shigella flexneri, Shigela boydii, Shigella sonnei, NAG Vibro cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Vibro vulnificus, Yersinia enterocolitica 및 Saccharomyces cerevisiae 등의 다양한 세균에 대하여 항균활성을 보여 비교적 넓은 항균범위를 나타내었으며, 특히 Legionella pneumophila에 대하여 0.5$\mu$g의 pyocyanine을 함유한 disk가 48mm의 억제환을 타나내어 가장 높은 항균활성을 보였다.
생균(Bacillus polyfermenticus, Bacillus mesentericus, Streptococcus faecalis, Bifidobacterium breve)과 소화 요소(protease, lipase)를 함유한 비스루트의 효과를 알아보기 위해 사료 내 1% 첨가하여 나일틸라피아 치어(19.0${\pm}$0.07g)에게 60일간 공급한 다음 성장률, 체조성 및 면역반응의 효과를 조사하였다. 60일간 사육한 결과 비스루트 첨가구와 대조구 사이에 유의적인 성장 차이를 보이지 않았지만(P>0.05), 보체의 용혈 능력은 비스루트 첨가구가 대조구에 비해 용혈능이 높은 것으로 조사되고 라이소자임의 용균 효과는 대조구와 비슷하였다. 식세포의 식작용 능력과 신장 마크로파지의 respiratory burst activity 는 비스루트 첨가구가 대조구에 비해 활성이 매우 높았다. 따라서 비스루트 사료 내 첨가가, 어류의 비특이적 면역 기능중에서 세포성 면역 기능을 활성화하는데 기여하였다. 병원성 세균 Edwardsiella tarda FSW 910410 균주로 공격 실험결과 비스루트 첨가구가 누적폐사율이 59%, 대조구가 80%로 조사되었고, 그 결과 비스루트 첨가구는 병원성 세균에 대한 저항력을 증가시켰다(P<0.05). Hematocrit, hemoglobin, total protein, glucose, GOT, GPT 와 같은 혈액 성분을 분석한 결과 비스루트 첨가구와 대조구 간의 유의차는 없었지만(P>0.05), glucose, GOT, GPT는 비스루트 첨가구가 대조구에 비해 낮게 나타났다. 이상의 결과로 비스루트는 나일틸라피아의 생리 기능에 문제를 야기시키지 않고, 비특이적 면역 기능 중 세포성 면역 기능을 증강시키는 효과가 있으며, 병원성 세균에 대한 저항력의 증강 효과도 높다. 따라서, 비스루트는 나일틸라피아의 사료 첨가물로서의 역할이 충분히 기대된다.
분변오염의 지표가 되는 장구균을 검출하기 위하여 장구균 선택 배지를 개발하였다. 기존에 알려진 여러 장구균 검출배지 중 총 9종류(Enterococci Confirmatory agar, Azide dextrose agar, Bromocresol-purple azide agar, Esculin bile agar, Citrate azide tween carbonate agar, KF Streptococcus agar, BROLACIN agar, Kanamycin esculin azide agar, Membrane filter Enterococcus selective agar)의 배지를 선별하였고, 배지 성분을 적절히 조합하여 새로운 배지 Enterococcus Mixed medium을 개발하였다. 배지의 효과를 검증하기 위하여 장구균 6종류(Enterococcus avium KACC 10788, Enterococcus faecium KACC 11954, Enterococcus saccharolyticus KACC 10783, Enterococcus durans KACC 10787, Enterococcus faecalis KACC 11304, Enterococcus hirae KACC 10779)와 비장구균 3종류(Escherichia coli KACC 10005, Staphylococcus aureus subsp. aureus KACC 10768, Bacillus subtilis KACC 10111)를 사용하였다. 그 결과 새롭게 개발된 장구균 검출배지에서 비장구균의 생장이 억제된 반면에 장구균 6종류는 모두 생장하는 것을 확인하였다. 또 환경시료에서 장구균을 분리할 수 있는지 확인하기 위해 하천과 바다에서 채취해온 시료를 이용하여 실험한 결과 장구균의 생장을 확인하였다. 따라서 이 배지를 이용하면 수질 분변오염의 지표가 되는 장구균을 효과적으로 검출할 수 있음을 확인하였다.
가정용 통배추김치와 동치미를 시료로 하여, 김치 발효의 최적기에 관여하는주요 유산균종을 분리, 동정한 후 그들 유산균에 대한 소금과 식품보존료(Sorbic acid, P-hydroxybutly benzoate, p-hydroxypropyl benzoate, Sorbic acid와 P-hydroxybutyl benzoate병용)에 대한 영향을 검토한 결과는 다음과 같다. 1. 배추김치와 동치미에서 분리·동정된 유산균은 Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis, Streptococcus faecalis Pediococcus pentosaceus였다. 2. 유산균 생육과 식염과의 관계는 무염에서 보다는 소금 0.5∼2.0%에서 생장이 더 잘 되었다. 3. 유산균의 산생성능은 Lactobacillus plantarum이 산의 생성을 가장 많이 했다. 소금농도에 따른 유산균의 산생성능은 Leuconostoc mesenteroides는 소금 함량이 낮을수록 산을 많이 생성했고, 그 외 모든 균은 소금 0.5%∼2.0%에서 산의 생성량이 많았다. 4. 유산균에 대한 보존료의 영향을 Sorbic acid 0.05% 및, 1%의 단용과 Sorbic acid 0.05%와 POBB 0.004% 병용이 보존효과가 크게 나타났고, POPB 0.01% 가 가장 효과가 작았다. 소금이 첨가되면 보존효과가 더 좋게 나타났다. Lactobacillus plantarum이 모든 보존료에 대해 가장 영향을 적게 받았고, Leuconostoc mesenteroides가 가장 영향을 많이 받았다. 5. 이상의 결과에서 효과가 큰 보존료 Sorbic acid 0.05%∼l% 및 Sorbic acid 0.05%와 POBB 0.004%의 혼합물을 넣고, 김치를 숙성시키면. 여름철 김치의 산패를 다소 억제시켜서 저장 기간을 지연시킬 수 있으리라 기대된다.
In order to evaluate the in vitro synergic effect of Eunkyo-san, with quinolone antibiotics, rufloxacin (RUFX), the minimal inhibitory concentration (MIC), MIC50 and MIC90 of single use of quinolones and concomitant treatment with Eunkyo-san against 9 strains of aerobic gram positive bacteria. The obtained results were as follows : In the case of aerobic gram positive bacteria, the MIC, MIC50 and MIC90 against Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus smith, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus pyogens, Streptococcus pneumoniae Type Ⅰ, Type Ⅱ and Type Ⅲ was significantly decreased in concomitant treated groups with Eunkyo-san compared to those of single treated groups of RUFX, respectively. However, no significant changes were demonstrated against Bacillus subtilis and Enterococcus faecalis. In conclusion, the in vitro antibacterial activity of RUFX were increased against some strains of aerobic gram positive strains, especially, pneumococcus such as Staphylococcus and Streptococcus by concomitant use of Eunkyo-san.
LIVE/DEAD$^{(R)}$ BacLight$^{TM}$ and alamarBlue$^{(R)}$ are fluorescent materials used for the enumeration of live and dead bacteria. LIVE/DEAD$^{(R)}$ BacLight$^{TM}$ is generally used for confocal microscopy applications to differentiate live from dead bacteria in a biofilm or planktonic state. AlamarBlue$^{(R)}$ has also been used widely to assay live and dead bacteria in a planktonic state. Whilst these materials are successfully utilized in experiments to discriminate live from dead bacteria for several species of bacteria, the application of these techniques to oral bacteria is limited to the use of LIVE/DEAD$^{(R)}$ BacLight$^{TM}$ in biofilm studies. In our present study, we assessed whether these two methods could enumerate live and dead oral bacterial species in a planktonic state. We tested the reagents on Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans and Enterococcus faecalis and found that only LIVE/DEAD$^{(R)}$ BacLight$^{TM}$ could differentiate live from dead cells for all five of these oral strains. AlamarBlue$^{(R)}$ was not effective in this regard for P. gingivalis or A. actinomycetemcomitans. In addition, the differentiation of live and dead bacterial cells by alamarBlue$^{(R)}$ could not be performed for concentrations lower than $2{\times}10^6$ cells/ml. Our data thus indicate that LIVE/DEAD$^{(R)}$ BacLight$^{TM}$ is a more effective reagent for this analysis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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