The present study observed the ultrastructure of testis of bluespotted mud hopper(Boleophthalmus pectinirostris), and sperrnatogenesis was discussed also. The testis was surrounded by a thin adventitia, inside which spermatocyst composed the parenchyma of testis. Each lobule was enwrapped by many spermatocysts, which were filled with different kinds of spermatogenic cell clusters at the same developmental stage. In the lobule lumen there are large numbers of spermatozoa The thin adventitia(outer wall) of testis was composed of outer epithelium, and the underlying layers, such as collagen fiber layer, and myoid tissue. The myoid tissue elongated into the inside of testis, became the main componentof interstitium between spermatocyst where sperrnatogenesis occurred. In addition interstitial cells containing dense homogeneous nucleus and abundant mitochondria were observed. Spermatogonia contained round nucleus with diffuse chromatin and nucleolus, and dense nuclear bodies surround by mitochondria in cytoplasm. The synaptonemal . complex was observed in primary spermatocytes clearly. Early spermatid presented larger round nucleus composed of granular chromatin, which was located in the center of cytoplasm. The nucleus of mid-spermatid composed of finely granular chromatin lied on one side of spermatid, and abundant mitochondria had migrated another side. A nuclear fossa appeared in the site near mitochondria in late-spermatid, and the centriole was formed in nuclear fossa.
In this study, we found that sperm ball of Urechis unicinctus consisted of a somatic cell and spermatogenic cells. After separation from the sperm ball, individual spermatid floated freely in the coelomic fluid and differentiated into a mature sperm. Because of many nuclear vacuoles, spermatid nucleus was observed to be heterogeneous. Later, the spermatid nucleus condensed into the homogeneous round nucleus of the mature sperm. Perinuclear microtubules could be seen but did not seem to be organized into manchette microtubules. To understand the nature of nuclear condensation during spermiogenesis, the sperm and spermatids (spermiogenic cells) were treated with FITC-phalloidin, or anti-actin-FITC, or labeled with antiactin immunogold particles (AAIP; 10 nm) followed by transmission electron microscopy or confocal laser scanning microscopy. The anti-actin-FITC and FITC-phalloidin reactions occurred distinctly in the nuclei of both spermiogenic cells. FITC-phalloidin reacted more intensely with acrosomes. The AAIP were incorporated mainly into nuclei of both cells sometimes showing local distribution in the nucleus. Nuclear vacuoles of spermatids disappeared progressively with condensation of the nucleus, as the number of incorporated $AAIP/{\mu}m^2$ increased. These results suggest that nuclear actin microfilaments might be closely related to nuclear condensation.
The three-dimensional structure of the Sertoli cell in the Korean native bull was investigated by scanning electron microscopy. Morphologically, four types of Sertoli cell processes were evident: 1) sheet-like processes, 2) sleeve-like processes, 3) bough-like processes and 4) finger-like processes. The sheet-like processes rested upon more than half of the surface of each spermatogonia, spermatocyte and spermatid. Sleeve-like processes, bough-like processes and finger-like processes are observed in the middle and apical portion of seminiferous tubule. All Sertoli cell processes are originated from Sertoli cell column. Just before spermiation, the apical sheet-like processes are shifted from their position at the spermatid head, and bough-like processes covered the disengaged residual body, after which the residual body was no longer evident in the tubule. Though the mechanism for this elimination is not known, the process suggests a reciprocity between the Sertoli and germ cells.
The purpose of this study was to investigate the effect of cyclophosphamide on the mouse seminiferous tubules by transmission electron microscopy at different groups: a control group, a group treated one time a week, and a group treated two times a week. Cyclophosphamide was injected in the intraperitoneal at a dosage of level 200mg/kg. The results obtained were as follows. 1. In the group of one time a week, pyknotic body and large vesicles were observed in cytoplasm of spermatogonium of seminiferous tubules, and in the intercellular space between spermatocytes, respectively. 2. In the group of two times a week, nucleus envelope in the spermatid was disrupted partially, observed vesicles in the nucleoplasm of spermatid, and separated or disrupted inner and outer membranes of mitochondria in the Sertoli cells.
Comparative study on the spermatogenesis of two kinds of Korean planarias, Dugesia japonica and Phagocata vivida, were studied with light and electron microscope. Observation results were as follows. Except following details, fine structure and morphogenesis of the spermatogonia, primary spermatocyte, secondary spermatocyt spermatid and spermatozoon were consistant between the two species. The nucleus of primary spermatocyte of Dugesia japonica was surrounded with 36-38 microtubules, while that of Phagocata vivida with 40-42 microtubules. The C-shaped lamellar Golgi complex appeared in the spermatid cytoplasm of the former, while Straight-shaped lamellar Golgi complex in that of the latter. The four white spots were observed only in the nucleoplasm of matured spermatozoon in the latter, not in the former.
Jeong, Dong Kee;Sharma, Neelesh;Nguyen, Thanh Luan;Kim, Jong Hyun;Oh, Sung Jong
Journal of Embryo Transfer
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v.29
no.4
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pp.351-359
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2014
Phasianus colchicus is not only a beautiful bird but also a great value in science and under the threat of endanger. Hence, the aim of this study was to isolate the pheasant male germ cells (mGCs) and then induce them into elongated sperm-like cells in vitro. The mGCs were purified and enriched by a two-step plating method based on the different adherence velocities of mGCs and somatic cells. The percentage of the c-kit positive cells and c-kit negative cells examined by flow cytometry analysis (FCA) was 92.87% and 2.57%, respectively. Subsequently, the mGCs were induced for 48h in DMEM/F12 medium supplemented factors such as retinol acid, testosterone and bovine FSH, followed by 5 weeks in culture. We found that some elongated sperm-like cells appeared initially in vitro under inducement of stimulated factors. The elongated sperm-like cells showed in the expression of changed morphology and post-transcriptional marker such as spermatid associated (SPERT), spermatid perinuclear RNA binding protein (STRBP), round spermatid basic protein 1 (RSBN1) and SPER1L. Moreover, in DNA content identified assay, induced cells showed that the 1C DNA population markedly increased in differentiated group but it was not change in undifferentiated group. Successful in vitro differentiation of pheasant testicular germline cells into spermatids appears to offer extremely attractive potential for the conservation of endangered birds and treatment of male infertility.
The spermiogenesis of a Korean octopus, Octopus minor, inhabiting western of Korea Sea was observed by electron microscopy . The obtained results are as follows: The spermiogenesis of Octopus miner proceeds through four stages; early- , mid- , and late-spermatid, and mature sperm. An early spermatid is a spherical cell looking light due to the low electron density. The acrosome formed from Golgi complex of the upper nucleus looks dark due to the high electron density. The extra-nuclear rod (enr) stemming from proximal centriole is transformed from round shape into oval shape, elongating to the upper nucleus. In our observation, the axoneme was being formed from distal centriole, and the manchette composed of a number of microtubules is also found around nuclear membrane. In a mid-spermatid, chromatins in the nucleus contract shaping fine threads, and the manchette is also observed around nuclear membrane. Especially, the spherical acrosome is transformed into long oval one which is tinged with a number of horizontal stripes and has the middle electron density. In a late-spermatid, chromatins in the nucleus contract thick and short. Furthermore, the mitochondrial sleeve, in which the axoneme is surrounded with mitochondria, is observed at middle piece. The axoneme has a typical structure of 9+2 and around it, 9 coarse fibers are observed. Also in the acrosome cavity of mature sperm, horizontal striation is found. However, regularly spaced processes are peculiarly observed in there. A sperm is about 390 fm long, whose head is bent a little like a banana while the acrosome region is helical. In the middle piece of sperm, $11\sim12$ mitochondria are surrounding coarse fibers that reach the main piece of tail, while nothing but 9+2 structured axoneme is found in the end piece.
In this study, the production of transgenic embryo was attempted by microinjection or round spermatid cultured with foreign DNA. At first, the expression of haploid spermatids specific gene, mTP1 in mouse and hPrm2 in hamster spermatids were investigated by RT-PCR method in testes of young mice and hamster testis. The specific gene expression first appeared at 18 days post partum (dpp) in mice spermatid and 20 dpp in hamster spermatid. Therefore, the round spermatids isolated from 17 dpp mice and 19 dpp hamster were used for the introduction of foreign EGFP gene into haploid round spermatids. For the introduction of EGFP gene haploid round spermatids suspended in medium including EGFP gene were treated with a different electric field strength at 0.11, 0.18 and 0.44 ㎸/cm. After electrical stimulation, viability of testicular sperm cells and 67.6%, 66.4% and 49.9%, in mice and 62.6%, 57.9% and 27% in hamster, respectively. These values were significantly lower than those of non-treated control groups 80.5% in mouse and 69.1% in hamster After 72 hrs culture, the highest expression rate of EGFP gene, 28.5% in mice and 32.1% in hamster were obtained from tile spermatogenic cells electroporated by the field strength or 0.18 ㎸/cm. Then, the ability of fertilization and embryonic development of haploid spermatids transfected with foreign EGFP gene were estimated by the microinjection of spermatids into hamster oocytes. The Irate pronuclear formation rate (77.5%) was lower than non-treated control (80%), and the cleavage rate of the treated group (58.8%) was lower than control (65%). To prove the foreign EGFP integration in hamster embryos, 2-cell stage hamster embryos were subjected to the observation under the fluorescence microscope, and the PCR analysis. As a result, about 44% of 2-cell embryos were showed the integration of EFGP gene into their genome. Therefore, These results suggest the possibility to produce transgenic hamsters by microinjection of haploid spermatid transfected with foreign DNA.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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