• Journal of Animal Science and Technology
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• 제54권2호
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• pp.95-101
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• 2012

본 연구는 희소 한우인 제주흑우의 정액 동결을 위하여 동결보호제로서 glycerol과 amide 계열의 동결보호제인 5%의 DMA, DMF 그리고 7%의 MF를 이용하여 동결 융해 후 정자의 운동성, 생존율, 정자막 온전성 및 정자의 첨체 양상의 변화 조사를 위하여 수행하였다. 제주흑우의 정액을 동결 한 결과 glycerol과 DMF를 사용하였을 때 운동성은 $64.00{\pm}9.62$와 $59.00{\pm}5.48$로 DMA와 MF에 비해 유의적으로 높았으며(p<0.05), 생존율 역시 glycero과 DMF 처리구에서 $58.25{\pm}6.63$과 $53.05{\pm}3.77$로 유의적으로 높게 나타났다(p<0.05). 그러나 glycerol과 DMF 처리구 간의 유의적 차이는 나타나지 않았다. 정자막 온전성 검사(HOST)에 있어서도 역시 glycerol과 DMF 처리에서 정자 미부의 팽창 비율 역시 $45.12{\pm}25.08$과 $44.95{\pm}8.58$로 유의적으로 높았다(p<0.05). 정자의 첨체막 양상 변화에 있어 F pattern의 비율이 MF 처리시 다른 처리구에 비하여 유의적으로 낮았으며(p<0.05), B pattern의 비율은 DMA, DMF 및 MF의 사용시 glycerol에 비하여 유의적으로 증가하였다(p<0.05). AR pattern의 비율에 있어서는 DMF를 제외한 amide의 사용은 F pattern의 감소와 조기 첨체반응에 의한 유의적인 AR pattern의 증가를 볼 수 있었다(p<0.0.5). 그러나 DMF의 사용은 glycerol 보다 AR pattern의 비율이 유의적으로 낮았다(p<0.05). 동결 융해 후 시간에 따른 정자의 생존율과 정자미부 팽창 비율에 있어서 융해 초기에는 glycerol에서 DMF 보다 높은 생존율과 정자 미부 팽창율을 나타냈으나, 1시간 이후부터는 DMF에서 glycerol 보다 높은 생존율과 정자 미부 팽창율을 나타내었다. 이러한 결과는 희소 가축의 생식세포 보존 및 유전자원 확립을 위한 중요한 자료가 될 것이며, 제주흑우 및 희소 가축의 안정적이고 효율적인 동결 정액 제조 연구에 있어 중요한 정보를 제공할 것으로 평가된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제24권3호
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• pp.207-212
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• 2009

The aim of present experiment was to examine commercial synthetic extender(AndroMed) for semen cryopreservation of Korean Black Bull. Semen was collected from a Korean Black Bull using an artificial vagina and transported to the laboratory. The semen was diluted 1:1 by AndroMed. The pellect was diluted to final sperm concentration of $5{\times}10^5/ml$ by doubling in every 10 minutes at $4^{\circ}C$ cold chamber. The semen was equilibrated for 1 hr at cold chamber and packed to 0.5 ml straw. The semen straws were located above 5 cm of liquid nitrogen for 5 minutes, above 5 cm for 10 minutes and above 10 cm for 10 min. And then the frozen straw was plunged to $LN_2$. The presented straws were examined the viability and motility after thawed at $37^{\circ}C$ water bath. Hanwoo semen was used as KPN (Korea Proven Bull Number) in this experiment. The survival rates was significantly higher in fresh semen than frozen semen ($80{\pm}14%\;and\;43{\pm}11%$). However, the motility rates was similar (80.7% and 66.4%). The survival and motility rates were higher in 5cm, 10 min treatment group than the other two groups in straw-located height and duration above $LN_2$ ($50{\pm}14%$ and 70.7% vs, 33.18% and $65{\pm}7%$ vs, 30.14% and 65.7%, respectively). The development rates to cleavage was higher in Black Cow than Hanwoo semen (62.2%, 64.4%), However, The development rates to blastocyst was higher in Hanwoo than Black cow semen (25.9%, 23.0%). In conclusion. The present results that acceptable fertilization and cryopreservation could be obtained by in vitro fertilization with frozen-thawed semen using a synthetic semen extender (AndroMed).

• 한국산학기술학회논문지
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• 제21권4호
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• pp.490-496
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• 2020

가축유전자원으로서 동결정액을 생산하는 가장 쉬운 방법은 스티로폼박스를 이용한 간이동결법으로 알려져 있다. 본 연구에서는 스티로폼 동결박스를 제작하여 가축의 동결정액 생산에 활용하는 방법을 검토하였으며 칡소 동결정액 생산을 최적화 할 수 있는 방법을 제시하고자 박스의 크기, 액체질소와 노출된 정액 스트로와 거리, 노출시간 및 생산량을 검토하였다. 2가지 동결박스를 비교하여 자료를 확보하였으며 내부 크기는 세로×가로×높이가 23.5×30.5×22.5 cm와 25.5×46.5×26.5 cm로 측정되었다. 액체질소를 5cm 높이로 채우고 액체질소 위 2, 5 및 8cm 높이에서 동결하여 융해 후 생존성을 조사하였다. 칡소 정액을 동결할 경우, 액체질소와의 노출시간은 모두 10분이 적절하였으며 25.5×46.5×26.5 cm 크기의 상자가 높은 생존율을 보여주었다(60.4±5.3% 대 67.2±3.1%). 동결 상자의 최적화 공간은 정자 동결에 가장 중요한 요소로 판단되며 1회 동결 시 최대 생산 가능한 칡소 동결정액은 60개 이상으로 증가시킬 수 있었다. 이러한 정보를 활용하면, 축종에 따라 동결 정액 생산량 결정하고 목적에 맞는 용기를 활용하여 효율적인 동결정액 생산이 가능할 것으로 판단된다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제37권3호
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• pp.155-159
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• 2013

본 연구는 제주흑우의 정액의 동결과 보존기술 개발을 위해 AndroMed와 Trialdyl를 사용하여 보다 우수한 희석제와 우수 종모우 선정을 위해 실시되었다. 종모우 1번부터 4번까지 개체 정자의 성상비교에서 수정능 획득과 첨체반응의 비율은 36.8%, 26.8%, 37.8% 그리고 38%의 결과를 나타내었다. 2번 개체 정자에서 수정능 획득과 첨체반응의 비율이 유의적으로(p<0.05) 낮은 결과를 보였다. 제주흑우 정액을 동결하기 전 정자의 생존율은 약 $93.27{\pm}1.62$, 동결 융해 후 생존율은 $73.34{\pm}3.27%$로 나타나 동결전 정액의 생존율이 유의적으로(p<0.05) 높은 결과를 나타내었으나, 사멸 정자의 비율은 약 $7.35{\pm}2.63%$와 $13.71{\pm}2.85%$의 결과를 나타내었다. 그리고 $Triladyl^{(R)}$ 동해 방지제를 사용하였을 때, 정자의 운동성은 $72.86{\pm}2.83%$, $AndorMed^{(R)}$를 사용하였을 때 운동성은 $81.47{\pm}2.48%$로 $AndorMed^{(R)}$ 동해방지제를 사용하였을 때 운동성이 다소 높은 경향을 보였으나, 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 마찬가지로 정자의 사멸율에서도 $Triladyl^{(R)}$ 동해 방지제는 $18.41{\pm}3.42%$, $AndorMed^{(R)}$ 동해방지제는 $17.26{\pm}4.25%$의 결과를 보여 AndroMed를 사용한 동해방지제가 정자의 생존율을 향상시키는 것으로 나타났다. 결론적으로 제주흑우 정액의 동결 보존을 위해 보다 향상된 동결보호제 선정과 동결보존 기술 개발이 필요할 것으로 사료된다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제36권4호
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• pp.301-310
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• 2009

목 적: 폐쇄성과 비폐쇄성 무정자증 환자에서 신선고환조직 정자와 융해고환조직 정자를 이용한 배발달과 임신결과를 비교 분석하였다. 연구방법: 폐쇄성과 비폐쇄성 무정자증 환자에서 총 222 주기의 TESE-ICSI를 시행하였다. 정자는 신선 또는 융해 고환조직으로부터 회수하였다. 수정은 ICSI 후 16~18시간째 확인하였으며, 배발달률과 임신율을 분석하였다. 결 과: 폐쇄성 무정자증군과 비폐쇄성 무정자증군에서 수정률은 유의하게 차이가 났으나 (75.2% 대 56.7%, p<0.05), 배발달률에서는 차이가 나지 않았다 (96.9% 대 98.0%). 마찬가지로 임상적 임신율 (33.9% 대 36.0%)과 분만율 (28.1% 대 28.0%)에서도 차이가 나지 않았다. 신선고환조직 정자의 경우, 수정률은 폐쇄성 무정자증군과 비폐쇄성 무정자증군에서 유의하게 차이가 났으나 (76.4% 대 52.9%, p<0.05), 배발달률, 임상적 임신율, 분만율에서는 차이가 나지 않았다. 융해고환조직 정자의 경우에서도 수정률은 폐쇄성 무정자증군과 비폐쇄성 무정자증군에서 유의하게 차이가 났으나 (74.7% 대 65.6%, p<0.05), 배발달률, 임상적 임신율, 분만율에서는 차이가 나지 않았다. 결 론: 폐쇄성과 비폐쇄성 무정자증 환자에서 신선고환조직 정자와 융해고환조직 정자를 이용하였을 경우 수정률에서는 차이가 있으나, 배발달과 임상적 임신 결과에는 차이를 보이지 않았다. 그러므로, 폐쇄성 또는 비폐쇄성 여부와는 관계없이 무정자증 환자에서 신선고환조직 정자 그리고 융해고환조직 정자를 이용하여 ICSI를 시행하면 적절한 임신 성적을 거둘 수 있다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제35권2호
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• pp.131-141
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• 2008

목 적: 무정자증 불임부부에서 신선 (fresh) 고환정자 (testicular spermatozoa)와 냉동보존-융해(cryopreserved-thawed) 고환정자를 사용한 난자세포질내 정자주입술 (intracytoplasmic sperm injection, ICSI)의 결과를 비교하고자 하였다. 연구방법: 신선 고환정자 및 냉동보존-융해 고환정자를 사용하여 ICSI 시술을 시행하기로 계획된 총 109주기 (66명)를 대상으로 하였고 신선 고환정자를 사용하기로 계획한 군 (신선 고환정자군, fresh group)에는 92주기 (61명)이 포함되었고 냉동보존-융해 고환정자를 사용하기로 계획한 군 (냉동보존-융해 고환정자군, cryopreserved-thawed group)에는 17주기 (13명)가 포함되었다. 양 군간에 수정률, 착상률, 임신률, 유산률 등 ICSI 시술의 결과들을 비교하였고 통계학적 분석은 Mann-Whitney U 검정 및 Fisher의 정확한 검정을 적절하게 사용하였다. 결 과: 신선 고환정자를 사용하여 ICSI 시술을 시행하기로 계획된 총 92주기 중 9주기에서 고환정자를 추출할 수 없어 시술 주기가 취소되었다. 냉동보존-융해 고환정자군과 비교하여 신선 고환정자군에서 수정률이 높은 경향을 보였고 ($58.0{\pm}27.8%$ vs. $45.9{\pm}25.0%$, p=0.076) 양질의 배아 수는 통계적으로 유의하게 높았다 ($0.9{\pm}1.2$ vs. $0.2{\pm}0.5$, p=0.002). 그러나 임상적 임신율, 착상률, 유산율은 양 군간에 통계적으로 유의한 차이가 없었다. 결 론: ICSI 시술을 위하여 냉동보존-융해 고환정자를 사용하는 경우 수정률 및 배아의 질이 감소하지만 임신율, 착상률, 유산율에는 영향을 미치지 않는 것으로 사료된다. 또한, ICSI 시술이전에 고환정자를 확보하고 냉동보존-융해 고환정자를 사용한다면 난자채취 당일 정자를 확보하지 못하여 주기를 취소하는 경우나 여성배우자의 불필요한 과배란유도를 줄일 수 있으며 반복적인 고환정자추출술로 인한 고환기능의 손상을 줄일 수 있는 유용한 방법으로 사료된다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제25권2호
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• pp.89-92
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• 2010

We report herein the successful results of estrus induction, sperm cryopreservation and kids born by transcervical insemination of frozen-thawed semen in a Saanen goat. Flugestone acetate (FGA: 60 mg) was inserted into vagina for 15 days. The goat was intramuscularly injected with 400 IU PMSG and 200 IU hCG ($PG600^{(R)}$: Intervet, Korea) a day before withdrawal of the FGA sponge. Follicles and corpora lutea were identified on both ovaries by laparoscopy. Artificial insemination was performed 46 hours after removal of FGA sponge. The concentration of frozen-thawed semen was $3.975{\times}10^8/ml$ and 0.5 ml of frozen-thawed semen was transcervically inseminated into uterine body under anesthesia. Three kids, all females, were born 144 days after artificial insemination. This is the first report producing kids by transcervical insemination of frozen-thawed semen in a Saanen goat of which the estrus was induced by FGA sponges, PMSG and hCG during non-breeding season in Korea.

• 한국동물생명공학회지
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• 제38권2호
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• pp.47-53
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• 2023

Despite numerous advances in in-vitro embryo production (IVP), many documented factors have been shown to influence the development of mammalian preimplantation embryos and the success of IVP. In this sense, elevated levels of reactive oxygen species (ROS) correlate with poor outcomes in assisted reproductive technologies (ART) due to oxidative stress (OS), which results from an imbalance between ROS production and neutralization. Indeed, excessive production of ROS compromises the structural and functional integrity of gametes and embryos both in vivo and in vitro. In particular, OS damages proteins, lipids, and DNA and accelerates cell apoptosis. Several in-vivo and in-vitro studies report an improvement in qualityrelevant parameters after the use of various antioxidants. In this review, we focus on OS and the source of free radicals and their effects on oocytes, sperm, and the embryo during IVP. In addition, antioxidants and their important role in IVP, supplementation during oocyte in vitro maturation (IVM), in vitro culture (IVC), and semen extenders were discussed. Nevertheless, various methods for determining the level of ROS in germ cells have been briefly described. Still, it is crucial to develop standardized antioxidant supplement systems to improve overall IVP success. Further studies should explore the safety, efficacy, mechanism of action, and combination of different antioxidants to improve IVP outcomes.

• 한국수정란이식학회지
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• 제18권2호
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• pp.143-149
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• 2003

한우의 유전자원을 보존하기 위하여 정액동결 시험을 수행하였으며 고급육계통은 육질에 대한 육종가 상위 10% 이내의 자손에서 선발하였고 다 유계통은 어미의 이유시 체중에 대한 육종가 상위 10%이내의 자손에서 선발하였으며 2개 계통에서 종모우 총 13두를 선발하여 공시하였다. 정액채취는 인공질법으로 실시하였고 의빈대에 수소를 계류하고 채정대상우를 승가시켰으며, 3회 가승가후에 채정하였다. 채정후 10분 이내에 실험실로 옮겨와 검사항목을 조사하고 37$^{\circ}C$에서 1차 희석을 하고 5$^{\circ}C$까지 하강한 후 2차 희석을 하였으며, 액체 질소 5cm 위에서 5분간 평형후 침지하여 동결하였다. 이들 종모우 정액의 일반적 성상에 있어서 채정된 정액량은 1차와 2차를 합하였을 때 평균 채정량이 5.7 ml였고 정자농도는 975${\times}$$10^{6}$개였으며 정액의 색상은 유백색이었고 pH는 6.8이었다. 채취시 생존성은 90.2% 그리고 동결 융해후에는 65.7 %가 생존하였으며 총 6,870스트로우의 동결 정액을 생산하여 보존하였다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제36권3호
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• pp.147-154
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• 2012

본 연구에서는 제주흑우의 유전자원 보존과 증식에 있어 성공적인 인공수정을 위한 안정적인 동결정액 제조법을 수립하고 동결 융해 후 정자의 품질을 개선하기 위하여 제주흑우의 동결 정액 제조시 LDL, taurine, hypotaurine 그리고 trehalose를 첨가하여 이들이 동결 융해 후 정자의 성상에 미치는 영향에 대하여 알아보고자 수행하였다. 제주흑우의 정액 동결 시 LDL, LDL-taurine, LDL-hypotaurine 그리고 LDL-trehalose의 첨가는 ($63.40%{\pm}7.39$, $69.70%{\pm}6.12$, $67.25%{\pm}3.21$, $64.55%{\pm}2.43$) 대조구에($56.25%{\pm}6.42$) 비하여 모두 유의적인 생존율의 증가를 나타냈다 (p<0.05). 정자막 온전성 검사를 통한 꼬리막 팽창 정자의 비율은 LDL-taurine을 첨가 실험구에서 $70.55%{\pm}5.16$, LDL-hypotaurine 첨가 실험구에서 $64.45%{\pm}5.85$, LDL-trehalose 실험구에서 $64.50%{\pm}2.78$, LDL 단독 첨가 실험구에서 $61.65%{\pm}5.18$로 대조구 $51.90%{\pm}9.99$보다 모두 유의적으로 높은 결과를 나타냈다 (p<0.05). 동결 융해 후 정자의 첨체막 변화 양상에 있어서는 B pattern의 비율은 대조구와 실험구 모두 유의적 차이가 없었으며, F pattern은 LDL-taurine의 조합만이 대조구와 유의적인 차이를 나타내며 증가하였다 (p<0.05). 그러나 AR pattern의 비율은 LDL-taurine, LDL-trehalose, LDL-hypotaurine 그리고 LDL 처리의 순으로 대조구에 비하여 모두 유의적으로 낮은 수준의 AR pattern의 비율을 나타냈다(p<0.05). 정자의 수정능력 평가에 있어 LDL-taurine, LDL-hypotaurine 그리고 LDL-trehalose 모두 대조구에 대하여 유의적으로 높은 웅성전핵 형성율과 SFI를 나타냈으며 (p<0.05), 특히 LDL-taurine의 첨가는 LDL의 단독 처리에 비하여도 유의적으로 높은 수준의 웅성전핵 형성율과 SFI를 나타냈다 (p<0.05). 또한, decondenced sperm 비율에 있어 LDL, LDL-taurine, LDL-hypotaurine 그리고 LDL-trehalose 실험구 모두 대조구에 비하여 유의적으로 높은 결과를 나타냈다 (p<0.05). 본 연구의 결과는 제주흑우 정액의 동결정액 제조에 있어 안정적인 제조법을 공급할 수 있으며, 동결 융해 후 정자의 기능 개선 방법에 보다 많은 정보를 제공할 수 있을 것으로 사료된다.