Trichoderma harzianum ZF-2 producing laccase was isolated from decaying samples from Shandong, China, and showed dye decolorization activities. The objective of this study was to optimize its culture conditions using a statistical analysis of its laccase production. The interactions between different fermentation parameters for laccase production were characterized using a Plackett-Burman design and the response surface methodology. The different media components were initially optimized using the conventional one-factor-at-a-time method and an orthogonal test design, and a Plackett-Burman experiment was then performed to evaluate the effects on laccase production. Wheat straw powder, soybean meal, and $CuSO_4$ were all found to have a significant influence on laccase production, and the optimal concentrations of these three factors were then sequentially investigated using the response surface methodology with a central composite design. The resulting optimal medium components for laccase production were determined as follows: wheat straw powder 7.63 g/l, soybean meal 23.07 g/l, $(NH_4)_2SO_4$ 1 g/l, $CuSO_4$ 0.51 g/l, Tween-20 1 g/l, $MgSO_4$ 1 g/l, and $KH_2PO_4$ 0.6 g/l. Using this optimized fermentation method, the yield of laccase was increased 59.68 times to 67.258 U/ml compared with the laccase production with an unoptimized medium. This is the first report on the statistical optimization of laccase production by Trichoderma harzianum ZF-2.
느타리버섯의 생산성 향상을 위하여 액체종균 배양액의 조건을 설정하고자 하였다. Potato dextrose 배양액에서 균체 생장을 위한 최적 pH는 6이었다. 대두박 0.3%와 설탕 및 포도당 함량을 달리한 15가지의 배양액('A'~'O')은 $22^{\circ}C$ 및 pH 6의 조건에서 14일동안 배양되었을 때 설탕과 포도당이 각각 함유된 배양액에서 흡광도는 증가되었다. 특히 5~20%의 포도당만 함유된 배양액('C', 'D', E' 및 'F')은 배양기간의 경과에 따라 흡광도가 증가되는 경향이었다. 배양액의 건조 균체량은 20%이하의 설탕이나 포도당이 단독으로 함유된 배양액에서 감소되었으나, 30%의 설탕('A') 또는 포도당 ('B')이 각각 함유된 배양액에서 건조 균체량은 증가되었다. 1100 mL의 톱밥배지 병재배 시 액체종균의 최적 접종량은 15~20 mL이었다. 고체종균 및 액체종균으로 느타리버섯을 재배하여 조직감을 비교한 결과 고체종균에 비해 액체종균으로 재배된 버섯에서 우수한 경향이었다.
Objective: The objective of this study was to investigate effects of supplementation of culture media from solid-state fermented Isaria cicadae (I. cicadae) on performance, serum biochemical parameters, serum immune indexes, antioxidant capacity and meat quality of broiler chickens. Methods: A total of 648 Arbor Acres male broiler chickens(1 d; average body weight, 42.93±0.47 g) were randomly assigned to 6 treatments, each with six replicates and 18 broiler chickens per replicate. Broiler chickens were fed phase I (d 1 to 21) and phase II (d 22 to 42) diets. The phase I diets were corn and soybean-meal based diets supplemented with 0%, 2%, 4%, 6%, 8%, or 10% culture media from solid-state fermented I. cicadae respectively. The phase II diets were corn and soybean-meal based diets supplemented with 0%, 1.33%, 2.67%, 4.00%, 5.32%, or 6.67% culture media from solid-state fermented I. cicadae respectively. Results: In phase I, the broiler chickens with the supplementation of culture media had increased body weight gain and feed intake (linear and quadratic, p<0.05) with increasing inclusion of culture media. The levels of serum total antioxidant capacity (T-AOC), glutathione (GSH) and superoxide dismutase (SOD) increased linearly (p<0.05). In phase II, levels of serum T-AOC and interleukin-1β increased linearly (p<0.05), and GSH increased (p<0.05). In the kidney, GSH and glutathione peroxidase (GSH-Px) concentrations increased (linear and quadratic, p<0.05) and SOD concentration increased linearly (p<0.05). Compared to the control, shear force and drip loss of breast muscle decreased (linear and quadratic, p<0.05). Drip loss of leg muscle decreased linearly and quadratically (p<0.05). Conclusion: Dietary supplementation of culture media from solid-state fermented I.cicadae which was enriched in both wheat and residual bioactive components of I. cicadae enhanced the growth performance of broiler chickens. It also improved body anti-oxidative status and contributed to improve broiler meat quality.
1. Amylase producing bacteria have been isolated from natural sources and was identified out. The above strain is identical to Bacillus subtillis in every details of physiological and morphorogical characteristics by this investigations. 2. Sikworm chrysalis nad chlorella extracts are prove to be further effective for the stimulation of amylase production than any other sources. The former silkworm extract is more stronger in its activity. 3. It is found that effective results had been accepted by a less soybean meal addition per that of wheat bran in the mixture ratio of them, also less addition of corn is needed in the mixture ratio of between corn and whear bran. In the mixing ratio of wheat bran per silkworm or chlorella extracts, the addition of wheat bran is necessary for stimulation of amylase production. 4. Fro the stimulation of amylase production, the effective substances from natural sources and its order of activity in cultral media cultral media is proved as follows, silkworms ext.>chlorella ext.>alcohol>skim-milk and peptone>fermented milk>radish leaf ext.
본 연구에서는 효율적으로 표고 액체종균을 생산하기 위하여, 액체배지에 폭기방법으로 산소를 공급하고, 대두박을 첨가하여 표고균사체 생장량과 잔존 배양액의 유리당함량을 조사하였다. 그 결과 폭기방법은 균질화된 표고균사가 생장하면서 서로 뭉치지 않고 균질하게 증식하고, 대두박 첨가는 대수기 이후에도 지효성 질소영양원이 공급되도록 하는 효과가 있었다. 배양 중 침전 균사체의 중량은 13일째에 가장 많았으며, 배양용기의 배출구에서 이산화탄소 농도는 13일째에 가장 높았다. 상층 수용액에서 환원당은 폭기 12일째에 거의 소비되었다. 그리고 배양균사체에서 총질소(T-N)량은 폭기 배양 13일째에 최고 수준이며, 키틴함량과 5종의 유리당 중에서 수크로즈함량은 폭기 배양 18일째에 가장 높았으나, 에르고스테롤 함량은 폭기 배양 22일째에 가장 높았다. 이와 같은 결과를 종합적으로 판단할 경우 표고액체 종균으로서 사용 적기는 균사활력이 가장 왕성하고 균체량이 많은 배양 18일째로 판단되었다.
본 연구는 선행연구에서 얻은 keratinase 효소의 활성이 높은 균주 Bacillus subtilis SMMJ-2를 UV 조사에 의해 개량하여 mutant No. 2를 얻었으며, keratinase의 생산성 향상을 위한 최적 탄소원, 최적 질소원의 조건 하에서 본 효소를 대량생산하여 정제하고, 야생주와 변이주 간의 효소활성의 변화 및 정제된 효소 간의 효소화학적인 성질을 비교하였다. Mutant No. 2의 keratinase 생산을 위한 최적 탄소원과 질소원은 각각 glucose와 soybean meal로 나타나, 야생주의 경우와는 최적 질소원을 달리했으며, 효소활성에 있어서는 야생주보다 40% 정도 상승하였다. 변이주의 효소가 야생주의 효소보다 높은 배양온도에 대하여 더 안정적인 활성으로 생산되며, 효소 생산을 위한 최적 pH는 7.0으로, 비교적 효소생산이 가능한 pH 영역대은 6~9로 나타났다. Bacillus subtilis SMMJ-2와 mutant No. 2에서 생산된 keratinase는 DEAEsephacel 크로마토그래피법와 겔여과 크로마토그래피법으로 최종 정제되었다. 정제과정 중 DEAE-sephacel 크로마토그래피 상에서 나타나는 2개의 효소피크는 Bacillus subtilis SMMJ-2의 메인 효소피크의 위치와 mutant No. 2에서의 메인 효소피크의 위치가 전환되어 나타났다. SDS-PAGE 상에서의 각각의 효소 분자량은 B. subtilis SMMJ-2의 경우에 28 kDa, mutant No. 2의 경우에 42 kDa 로 추산되었다
농업 환경 중에 과잉으로 축적한 질산이온의 제거를 위하여, 질산이온 흡수력이 우수한 Enterobacter amnigenus GG0461 균주를 분리하였다. 이 균주는 Pseudomonas agar F (PAF) 배지에 배양하였을 때, 3,000 ppm (50 mM) 이상의 질산이온 흡수가 가능하므로, 농업용 토양, 축산폐수, 산업폐수를 포함한 오염된 환경의 질산이온 제거를 위한 좋은 후보 균주가 될 수 있다. GG0461 균주의 대량생산을 위한 상업용 배지를 개발하기 위하여 PAF 배지 성분을 상업용 재료로 대체하고, 균주의 성장과 질산이온 흡수 활력을 측정하였다. 탄소원인 글리세롤은 상업용 제품으로 대체하였고, 질소원으로 tryptone과 효모추출물, 대두박, 생선발효액을 배양실험에 사용하였다. 균주의 성장과 질산이온 흡수활력은 2% tryptone을 첨가한 배지에서 가장 우수하였고, 효모추출물, 대두박, 생선발효액의 순으로 효과가 나타났다. Tryptone을 2% 첨가한 배지에서 균주의 질산이온 흡수는 배지의 pH를 낮추었으며, 이것은 질산이온의 흡수가 nitrate/proton antiporter의 활성으로 나타남을 의미한다. 이상의 결과에서 상업용 tryptone을 사용한 배지는 균주의 생리활성에 적합하였으며, peptone을 제외한 PAF 배지의 각 성분은 그것에 해당하는 상업용 재료로 대체할 수 있었다. 결론적으로, GG0461 균주의 배양을 위한 상업용 배지성분 조성은 2% tryptone과 1% glycerol, PAF 배지를 위한 무기이온들로 결정하였다.
Media optimization for the production of thermostable protease specifically hydrolyzing defatted soybean meal (DSM) from Bacillus licheniformis NS70 was performed by two methods, one-at-a-time method and response surface methodology (RSM). The best carbon source and nitrogen source for the protease production were lactose and DSM, respectively. The maximum protease production estimated by RSM was 606 U/L at 1.11% lactose and 0.43% DSM, the value of which was nearly consistent to the experimental value of 599 U/L. Yeast extract suppressed the protease production. The medium pH was slightly increased at the beginning stage of fermentation, and it tended to decrease after 8 hours. The optimal pH for the protease production was 7.2 in the batch fermentation.
표고의 생산성 향상을 위하여 대두박 0.3%와 설탕 및 포도당 함량을 달리한 7가지의 액체종균 배양액("A"~"G")을 제조하였다. 배양액의 pH는 배양 14일 동안 기간이 경과됨에 따라 점차 산성화되는 경향이었으며 당의 배합비에 따른 유의차가 있었으나 대차는 아니었다. 배양 최종일에서 설탕 함량이 가장 많았던 배양액("G")에서 유의적으로 높은 산성도를 보였다. 건조 균체량은 배양 기간이 경과됨에 따라 유의적으로 증가되었으며, 배양 14일 경과 후 설탕과 포도당의 배합비에 따른 유의차는 없었다. 톱밥 봉지배지에 액체종균을 접종하여 배양한 결과 접종량은 45 mL이상, 배양 기간은 15~18일 정도가 적절한 것으로 확인되었다. 톱밥 배지에서 고체 및 액체종균으로 생육된 표고의 생산성은 고체종균보다 액체종균에서 유의적으로 높았다. 액체종균에 의한 버섯은 씹힘성(chewiness)이 더 우수하였으며, 감칠맛을 내는 아미노산의 함량이 더 많았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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