Currently 18 monoclonal antibodies were approved by FDA for inj ection into humans for therapeutic or diagnostic purpose. And 146 clinical trials are under way to evaluate the efficacy of monoclonal antibodies as anti-cancer agents, which comprise 9 % of clinical trials in cancer therapy field. When considering a lot of disappointment and worries existed in this field during the past 15 years, this boom could be called as resurrection. Antibodies have several merits over small molecule drug. First of all it is easier and faster in development, as proper immunization of the target proteins usually raises good antibody response. The side effects of antibodies are more likely to be checked out in immunohistomchemical staining of whole human tissues. Antibody has better pharmacokinetics, which means a longer half-life. And it is non-toxic as it is purely a "natural drug. Vast array of methods was developed to get the recombinant antibodies to be used as drug. The mice with human immunoglobulin genes were generated. Fully human antibodies can be developed in fast and easy way from these mice through immunization. These mice could make even human monoclonal antibodies against any human antigen like albumin. The concept of combinatorial library was also actively adopted for this purpose. Specific antibodies can be screened out from phage, mRNA, ribosomal library displaying recombinant antibodies like single chain Fvs or Fabs. Then the coding genes of these specific antibodies are obtained from the selected protein-gene units, and used for industrial scale production. Both $na\ddot{i}ve$ and immunized libraries are proved to be effective for this purpose. In post-map arena, antibodies are receiving another spotlight as molecular probes against numerous targets screened out from functional genomics or proteomics. Actually many of these antibodies used for this purpose are already human ones. Through alliance of these two actively growing research areas, antibody would play a central role in target discovery and drug development.
The single-chain variable fragment (scFv) against lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1 (LOX-1) is a promising molecule for its potential use in the diagnosis and immunotherapy of atherosclerosis. Producing this scFv in several milligram amounts could be the starting point for further engineering and application of the scFv. In this study, the abundant expression of the anti-LOX-1 scFv was attempted using Escherichia coli (E. coli) and Brevibacillus choshinensis (B. choshinensis). The scFv had limited soluble yield in E. coli, but it was efficiently secreted by B. choshinensis. The optimized fermentation was determined using the Plackett-Burman screening design and response surface methodology, under which the yield reached up to 1.5 g/l in a 5-L fermentor. Moreover, the properties of the scFvs obtained from the two expression systems were different. The antigen affinity, transition temperature, and particle diameter size were 1.01E-07 M, $55.2{\pm}0.3^{\circ}C$, and 9.388 nm for the scFv expressed by B. choshinensis, and 4.53E-07 M, $52.5{\pm}0.3^{\circ}C$, and 13.54 nm for the scFv expressed by E. coli. This study established an efficient scale-up production methodology for the anti-LOX-1 scFv, which will boost its use in LOX-1-based therapy.
Although smallpox was eradicated in 1980, it is still considered a potential agent of biowarfare and bioterrorism. Smallpox has the potential for high mortality rates along with a major public health impact, eventually causing public panic and social disruption. Passive administration of neutralizing monoclonal antibodies (mAbs) is an effective intervention for various adverse reactions caused by vaccination and the unpredictable nature of emerging and bioterrorist-related infections. Currently, vaccinia immune globulin (VIG) is manufactured from vaccinia vaccine-boosted plasma; however, this production method is not ideal because of its limited availability, low specific activity, and risk of contamination with blood-borne infectious agents. To overcome the limitations of VIG production from human plasma, we isolated two human single-chain variable fragments (scFvs), (SC34 and SC212), bound to vaccinia virus (VACV), from a scFv phage library constructed from the B cells of VACV vaccine-boosted volunteers. The scFvs were converted to human IgG1 (VC34 and VC212). These two anti-VACV mAbs were produced in Chinese Hamster Ovary (CHO) DG44 cells. The binding affinities of VC34 and VC212 were estimated by competition ELISA to $IC_{50}$ values of $2{\mu}g/ml$ (13.33 nM) and $22{\mu}g/ml$ (146.67 nM), respectively. Only the VC212 mAb was proven to neutralize the VACV, as evidenced by the plaque reduction neutralization test (PRNT) result with a $PRNT_{50}$ of ~0.16 mg/ml (${\sim}1.07{\mu}M$). This VC212 could serve as a valuable starting material for further development of VACV-neutralizing human immunoglobulin for a prophylactic measure against post-vaccination complications and for post-exposure treatment against smallpox.
목적: 작은 크기의 재조합 단일사슬 항체는 빠른 혈중 제거율과 종양의 항체 집적율이 증가되는 등의 장점을 가지고 있다. 반면에 항체의 작은 크기는 방사성 또는 형광물질의 표지를 위한 킬레이터 결합에 중요한 아미노산 그룹의 감소를 의미하기도 한다. 본 연구에서는 단일사슬 lym-1 염기서열 C-말단에 lysine 아미노산 태그를 삽입하여 형광 물질의 직접표지 및 그 표지수율 증가를 확인하고자 하였다. 대상 및 방법: 대장균 pET-22b (+) 벡터에 재조합 된 lysine 삽입 단일사슬 lym-1유전자는 대장균 BL21 (DE3)에 형질전환하여 발현하였다. 생산된 lysine lym-1 항체는 Ni-NTA 컬럽과 분자량 컬럼을 사용해 정제하였고. 단백질 전기 영동과 western blot을 통해 확인하였다. lysine lym-1 항체에 방사성 동위원소인 I-124, I-125, I-131 과 Tc-99m를 표지하여 그 수율을 확인하였으며 유세포계측기를 사용해 형광물질인 FITC가 직접표지된 라이신 lym-1 항체의 면역반응성을 사람의 버킷 림프종 세포주인 Raji 세포주에서 면역반응성을 확인하였다. 결과 Lysine도입 단일사슬 lym-1 항체는 두 과정의 정제를 통하여 획득하였으며 그 크기는 약 48 KDa이었고, 방사성동위원소인 I-124, I-125, I-131과 Tc-99m의 표지수율은 각각 >99%, >99%, >95%, >99%로 확인되었다. 유세포계측을 통한 lysine 도입 단일사슬 lym-1항체의 면역반응성은 기존의 단일사슬 lym-1항체와 유사함을 확인하였다. 결론: 재조합 lym-1 항체에 형광 물질을 직접 표지하기 위한 lysine 아미노산의 도입은 항체의 면역반응성 감소를 최소화 시키면서 직접표지 수율을 증가시킬 수 있는 유용한 방법임을 확인하였다.
Background: To develop a novel treatment strategy for hepatitis B virus infection, a major cause of liver chirosis and cancer, we aimed to make human monoclonal antibodies inhibiting RNase H activity of P protein playing in important role in HBV replication. In this regard, phage display technology was employed and demonstrated as an efficient cloning method for human monoclonal antibody. So this study analysed the usability of human monoclonal antibody as protein based gene therapy. Methods: RNase H of HBV was expressed as fusion protein with maltose binding protein and purified with amylose resin column. Single chain Fv (scFv) phage antibody library was constructed by PCR cloning using total RNAs of PBMC from 50 healthy volunteers. Binders to RNase H were selected with BIAcore 2000 from the constructed library, and purified as soluble antibody fragment. The affinity and sequences of selected antibody fragments were analyzed with BIAcore and ABI automatic sequencer, respectively. And finally RNase H activity inhibiting assay was carried out. Results: Recombinant RNase H expressed in E. coli exhibited an proper enzyme activity. Naive library of $4.46{\times}10^9cfu$ was screened by BIAcore 2000. Two clones, RN41 and RN56, showed affinity of $4.5{\times}10^{-7}M$ and $1.9{\times}10^{-7}M$, respectively. But RNase H inhibiting activity of RN41 was higher than that of RN56. Conclusion: We cloned human monoclonal antibodies inhibiting RNase H activity of P protein of HBV. These antibodies can be expected to be a good candidate for protein-based antiviral therapy by preventing a replication of HBV if they can be expressed intracellularly in HBV-infected hepatocytes.
Park, Tae-Jung;Park, Jong-Pil;Lee, Seok-Jae;Hong, Hyo-Jeong;Lee, Sang-Yup
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
/
제11권2호
/
pp.173-177
/
2006
In this study, a novel strategy was developed for the highly selective immobilization of proteins, using the polyhydroxyalkanoate (PHA) depolymerase substrate binding domain (SBD) as an active binding domain. In order to determine the appropriacy of this method for immunodiagnostic assays, the single-chain antibody (ScFv) against the hepatitis B virus (HBV) preS2 surface protein and the severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS-CoV) envelope protein (SCVe) were fused to the SBD, then directly immobilized on PH A-coated slides via microspotting. The fluorescence-labeled HBV antigen and the antibody against SCVe were then utilized to examine specific interactions on the PHA-coated surfaces. Fluorescence signals were detected only at the spotted positions, thereby indicating a high degree of affinity and selectivity for their corresponding antigens/antibodies. Furthermore, we detected small amounts of ScFv-SBD (2.7 ng/mL) and SCVe-SBD fusion proteins (0.6ng/mL). Therefore, this microarray platform technology, using PHA and SBD, appears generally appropriate for immunodiagnosis, with no special requirements with regard to synthetic or chemical modification of the biomolecules or the solid surface.
Neonatal Fc receptor (FcRn) gene encodes a receptor that binds the Fc region of monomeric immunoglobulin G (IgG) and is responsible for IgG transport and stabilization. In this report, the 8,900 bp porcine FcRn genomic DNA structure was identified and putative FcRn protein included 356 amino acids. Alignment and phylogenetic analysis of the porcine FcRn amino acid sequences with their homologies of other species showed high identity. Tissues expression of FcRn mRNA was detected by real time quantitative polymerase chain reaction (Q-PCR), the results revealed FcRn expressed widely in ten analyzed tissues. One single nucleotide polymorphism (SNP) (HQ026019:g.8526 C>T) in exon6 region of porcine FcRn gene was demonstrated by DNA sequencing analysis. A further analysis of SNP genotypes associated with serum Classical Swine Fever Virus antibody (anti-CSFV) concentration was performed in three pig populations including Large White, Landrace and Songliao Black pig (a Chinese indigenous breed). Our results of statistical analysis showed that the SNP had a highly significant association with the level of anti-CSFV antibody (At d 20; At d 35) in serum (p = 0.008; p = 0.0001). Investigation of expression and polymorphisms of the porcine FcRn gene will help us in further understanding the molecular basis of the antibody regulation pathway in the porcine immune response. All these results indicate that FcRn gene might be regarded as a molecular marker for genetic selection of anti-CSFV antibody level in pig disease resistance breeding programmes.
고양이 백혈병 바이러스에서 reverse transcriptase를 분리하여 생화학적 및 면역학적 연구를 하였다. 분자량은 72,000이고, DNA polymerase와 RNase H의 활성은 0.05-1 mM $M_n^2+$와 50-80 mM KCl에서 가장 좋았다. DNA polymerase와 RNase H는 같은 단백질 분자에 있으며, chymotrypsin 처리로서 RNase H를 쪼개낼 수 있으며, 이 RNase H도 reverse transcriptase의 항체에 의해서 활성이 거의 억제 된다. Reverse transcriptase의 항체 결합위치와 활성을 내는 위치는 다른 것 같다.
Dong-Ha, Lee;Eun-bee, Lee;Jong-pil, Seo;Eun-Ju, Ko
Journal of Animal Science and Technology
/
제64권3호
/
pp.588-598
/
2022
Despite vaccination, equine influenza virus (EIV) and equine herpesvirus (EHV) infections still cause highly contagious respiratory diseases in horses. Recently, concurrent vaccination with EIV and EHV was suggested as a new approach; however, there have been no reports of concurrent vaccination with recombinant canarypox EIV and inactivated EHV vaccines. In this study, we aimed to compare the EIV-specific immune responses induced by concurrent administrations of a recombinant canarypox EIV vaccine and an inactivated bivalent EHV vaccine with those induced by a single recombinant canarypox EIV vaccine in experimental horse and mouse models. Serum and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were collected from immunized animals after vaccination. EIV-specific serum antibody levels, serum hemagglutinin inhibition (HI) titers, and interferon-gamma (IFN-γ) levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay, HI assay, and quantitative polymerase chain reaction, respectively. Concurrent EIV and EHV vaccine administration significantly increased IFN-γ production, without compromising humoral responses. Our data demonstrate that concurrent vaccination with EIV and EHV vaccines can enhance EIV-specific cellular responses in horses.
Rabid raccoon dogs (Nyctereutes procyonoides koreensis) have been responsible for animal rabies in South Korea since the 1990s. A recombinant rabies vaccine strain, designated as ERAGS, was constructed for use as a bait vaccine. Therefore, new means of differentiating ERAGS from other rabies virus (RABV) strains will be required in biological manufacturing and diagnostic service centers. In this study, we designed two specific primer sets for differentiation between ERAGS and other RABVs based on mutation in the RABV glycoprotein gene. Polymerase chain reaction analysis of the glycoprotein gene revealed two DNA bands of 383 bp and 583 bp in the ERAGS strain but a single DNA band of 383 bp in the field strains. The detection limits of multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) were 80 and 8 FAID50/reaction for the ERAGS and Evelyn-Rokitnicki-Abelseth strains, respectively. No cross-reactions were detected in the non-RABV reference viruses, including canine distemper virus, parvovirus, canine adenovirus type 1 and 2, and parainfluenza virus. The results of multiplex RT-PCR were 100% consistent with those of the fluorescent antibody test. Therefore, one-step multiplex RT-PCR is likely useful for differentiation between RABVs with and those without mutation at position 333 of the RABV glycoprotein gene.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.