• 제목/요약/키워드: Single Cell Gel Electrophoresis (Comet assay)

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Genotoxicity Study of Sophoricoside, a Constituent of Sophora japonica, in Bacterial and Mammalian Cell System

  • Kim, Youn-Jung;Park, Hyo-Joung;Kim, Young-Soo;Kim, Mi-Kyung;Lee, Seung-Ho;Jung, Sang-Hun;Ryu, Jae-Chun
    • 한국환경성돌연변이발암원학회지
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    • 제21권2호
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    • pp.99-105
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    • 2001
  • Sophoricoside was isolated as the inhibitor of IL-5 bioactivity from Sophora japonica (Leguminosae). It has been reported to has an anti-inflammatory effect on rat paw edema model. To develope as an anti-allergic drug, genotoxicity of sophoricoside was investigated in bacterial and mammalian cell system such as Ames bacterial reversion test, chromosomal aberration assay and single cell gel electrophoresis (Comet) assay. As results, in the range of 1,250~40 $\mu\textrm{g}$/plate sophoricoside concentrations was not shown significant mutagenic effects in Salmonella typhimurium TA 98, TA 100, TA 1535 and TA 1537 strains in Ames test. The 80% cell growth inhibition concentration (IC/SUB 80/) of sophoricoside was determined as above 5,000 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ in Chinese hamster lung (CHL) fibroblast cell and L5178Y mouse lymphoma cell line for the chromosomal aberration and comet assay, respectively. Sophoricoside was not induced chromosomal aberration in CHL fibroblast cell at concentrations of 700, 350 and 175 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ or 600, 300 and 150 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ in the absence or presence of S-9 metabolic activation system, respectively. Also, in the comet assay, the induction of DNA damage was not observed in L5178Y mouse lymphoma cell line both in the absence or presence of S-9 metabolic activation system. From these results, no genotoxic effects of sophoricoside were observed in bacterial and mammalian cell systems used in these experiments.

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방사선 장해에 대한 백작약의 방호효과 (Protective Effects of Paeonia japonica against Radiation-induced Damage)

  • 오헌;박혜란;정일윤;김성호;조성기
    • Journal of Radiation Protection and Research
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    • 제27권3호
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    • pp.181-188
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    • 2002
  • 방사선 생체 손상에 대한 방호 효과를 나타내는 천연물을 검색하기 위한 일환으로 한의학에서 보혈양혈 탕제에 널리 사용되는 백작약 (Paeonia japonica)을 열수총추출물, 에탄올분획, 조다당분획으로 나누어 방사선에 의한 산화적 손상 경감 효과를 검정하였다. 사람 림프구에서 단세포전기영동 (single cell gel electrophoresis; comet assay)을 수행하여 DNA 손상 경감정도를 관찰하였으며, 마우스에 백작약 추출물을 투여한 다음 8 Gy의 감마선을 조사한 후 간에서 지질과산화 정도를 살펴보았다. 에탄올분획 처리군에서 높은 DNA 손상 경감효과를 확인할 수 있었으며, 지질과산화 억제작용 및 라디칼 소거효과 또한 에탄올분획이 높은 효과를 나타내어 에탄올분획이 방사선 방호에 주된 역할을 하는 것으로 사료된다. 이상의 결과로 보아 백작약은 방사선의 산화절 손상에 대하여 효과적으로 세포 DNA를 방호하고, 생체막의 주성분인 지질의 과산화를 억제하는 것으로 관찰되어 특히, 독성이 거의 없는 천연물이라는 관점에서 방사선 방호제로 적용이 가능할 것으로 사료된다.

Genotoxicity Study on Khal, a Halocidin Derivative, in Bacterial and Mammalian Cells

  • Kim, Youn-Jung;Kim, Mi-Soon;Jeon, Hee-Kyoung;Ryu, Jae-Chun
    • Molecular & Cellular Toxicology
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    • 제2권3호
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    • pp.151-158
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    • 2006
  • Khal was a synthetic congener of halocidin, a heterodimeric peptide consisting of 19 and 15 amino acid residues detected in Halocynthia aurantium. This compound was considered a candidate for the development of a novel peptide antibiotic. The genotoxicity of Khal was subjected to high throughput toxicity screening (HTTS) because they revealed strong antibacterial effects. Mouse lymphoma thymidine kinase ($tk^{+/-}$) gene assay (MOLY), single cell gel electrophoresis (Comet) assay and chromosomal aberration assay in mammalian cells and Ames reverse mutation assay in bacterial system were used as simplified, inexpensive, short-term in vitro screening tests in our laboratory. These compounds are not mutagenic in S. typhimurium TA98 and TA100 strains both in the presence and absence of metabolic activation. Before performing the comet assay, $IC_{20}$ of Khal was determined the concentration of $25.51\;{\mu}/mL\;and\;21.99\;{\mu}g/mL$ with and without S-9, respectively. In the comet assay, Khal was not induced DNA damage in mouse lymphoma cell line. Also, the mutation frequencies in the Khal-treated cultures were similar to the vehicle controls. It is suggests that Khal is non-mutagenic in MOLY assay. And no clastogenicity was observed in Khal-treated Chinese hamster lung cells. The results of this battery of assays indicate that Khal has no genotoxic potential in bacterial or mammalian cell systems. Therefore, we suggest that Khal, as the optimal candidates with both no genotoxic potential and antibacterial effects must be chosen.

PROTECTION OF DNA BY SCUTELLARlA BAICALENSIS IN HL-60 CELLS EXPOSED TO $\gamma$-RAYS; ANALYSED BY MICRONUCLEI FORMATION AND SINGLE CELL GELL ELECTROPHORESIS

  • Heon Oh;Park, Hae-Ran;Ham, Yeon-Ho;Kim, Sung-Ho;Jo, Sung-Kee
    • 한국독성학회:학술대회논문집
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    • 한국독성학회 2001년도 International Symposium on Dietary and Medicinal Antimutgens and Anticarcinogens
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    • pp.107-107
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    • 2001
  • In the present study, the protective effect of Scutellaria baicalensis against DNA damage in HL-60 cells exposed to $^{60}$ Co ${\gamma}$-rays was evaluated using micronuclei formation and alkaline single cell gel electrophoresis (SCGE, comet assay). The frequency of micronuclei was decreased in groups treated with water extract (P<0.01), polysaccaride fraction (P<0.01) and methanol fraction (P<0.01) before/after exposure to 200 cGy of ${\gamma}$-rays.(omitted)

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방사선조사된 채소류 및 곡물류의 DNA Comet Assay 특성 연구 (Study on the Characteristics of DNA Comet Assay for Irradiated Vegetables and Grains)

  • 서정은;오세욱;김윤지;이남혁;홍상필;김영호
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제37권4호
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    • pp.472-476
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    • 2008
  • 국내에서 주로 소비되는 채소류와 곡물류의 방사선조사 여부를 신속하게 검지하기 위하여 DNA comet assay의 활용 가능성을 조사하였다. 식품의 종류에 따라 세포용출시간, 세포현탁액의 정치시간 및 세포용해시간 등의 DNA comet assay 조건을 달리하여야 DNA comet이 관찰되는 것으로 나타났다. 전반적으로 방사선조사선량에 따라 comet assay 값이 증가하였는데 유의적 차이는 식품의 종류에 따라 달리 나타났다. 즉, 파는 2 kGy, 마늘은 3 kGy, 토마토는 1 kGy, 쌀가루는 9 kGy, 그리고 서리태는 3 kGy에서 방사선조사 여부에 대한 검지가 가능한 것으로 나타났다. 식물세포는 동물세포에 비해 외부의 영향에 민감하게 작용하기 때문에 DNA도 쉽게 손상되어 크기뿐만 아니라 핵의 모양도 다양하게 나타나는 것으로 보고된 바와 같이 DNA comet assay를 다양한 식품의 방사선조사 신속검지법으로 활용하기 위해서는 식품의 종류에 따른 표준화된 comet 분석조건 및 통계 분석법에 대한 가이드라인 설정이 필요한 것으로 나타났다.

Comet assay를 이용한 Ferric Sulfate의 유전자 독성에 대한 연구 (EVALUATION OF THE GENOTOXICITY OF FERRIC SULFATE BY COMET ASSAY)

  • 강호승;김신;정태성;박혜련
    • 대한소아치과학회지
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    • 제27권1호
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    • pp.77-84
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    • 2000
  • 치수절단술은 유치의 치수치료 방법 중 사용빈도가 높은 시술 중 하나로 치수절단 술식에 사용되는 약제는 치수나 주위조직에 무해하여야 하며, 감염이나 내흡수 등의 부작용이 없어야 한다. 본 연구는 임상에서 유치의 지혈적 치수절단 술식의 약제로 사용되는 ferric sulfate의 유전자 독성을 평가할 목적으로 human gingival fibroblast에 ferric sulfate를 다양한 농도와 접촉시간을 설정한 후 comet assay를 이용하여 유전자 독성을 평가하여 보았다. 그 결과는 다음과 같다. 1. 농도에 따른 세포의 유전자 손상정도의 변화는 ferric sulfate의 농도에 비례하여 유전자 손상이 증가하는 양상을 나타내었다. 2. 농도에 따른 세포의 유전자 손상정도는 0.1mM 이상의 농도에서 대조군과 유의한 차이를 나타내었다(p<0.05). 3. 시간경과에 따른 세포의 유전자 독성의 변화는 대조군과 유의한 차이를 보이지 않았다(p>0.05).

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Comet Assay를 이용한 케일, 명일엽, 당근, 돌미나리 녹즙의 Chinese Hamster Lung 세포 DNA 손상 보호 효과 (Protective Effect of Yellow-Green Vegetable Juices on DNA Damage in Chinese Hamster Lung Cell Using Comet Assay)

  • 전은재;김정신;박유경;김태석;강명희
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제36권1호
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    • pp.24-31
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    • 2003
  • The present study was attempted to investigate the antioxidant capacity of popular yellow-green vegetable juices (kale, Angelica keishei, carrot, small water dropwort) and to investigate the effect of vegetable juices on protecting oxidative damage to DNA in cultured Chinese hamster lung (CHL) cells. Antioxidant capacity was analyzed by TRAP assay (Total radical-trapping antioxidant potential). Cellular DNA dmamage was measured by SCGE (single-cell gel electrophoresis, also known as comet assay. Cells incubated in medium with PBS (negative control) or with various concentration of the freeze dried green juices (25, 50, 100, 250 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$) resuspended in PBS were treated with $H_2O_2$ (200 ${\mu}{\textrm}{m}$) as an oxidative stimulus for 5 min at 4$^{\circ}C$. The physiological function of each vegetable juice on oxidative DNA damage was analyzed and expressed as tail moment (tail length X percentage migrated DNA in tail) . Kale juice had the highest TRAP value suggesting that kale has the highest antioxidant capacity followed by Angelica keishei, small water dropwort and carrot. Cells treated with $H_2O_2$ had extensive DNA damage compared with cells treated with PBS or pre-treated with vegetable juice extracts. All green juices inhibited $H_2O_2$-induced DNA damage with kale being the most effective juice among the tested juices. These results indicate that green juice supplementation to CHL cells followed by oxidative stimulus inhibited damage to cellular DNA, supporting a protective effect against oxidative damage induced by reactive oxygen species. (Korean J Nutrition 36(1) : 24-31, 2003)

Protective Effect of Green Tea Extract and EGCG on Ethanol-induced Cytotoxicity and DNA Damage in NIH/3T3 and HepG2 Cells

  • Kim, Nam Yee;Kim, Hyun Pyo;Heo, Moon Young
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제31권1호
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    • pp.1-7
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    • 2016
  • 본 연구의 목적은 NIH3T3와 HepG2 세포에서 에탄올 유도 세포독성 및 유전독성에 대하여 녹차엑기스(GTE)와 epigallocatechin-3-gallate (EGCG)의 보호작용을 평가하는데 있다. 세포생존율은 MTT assay를 실시하였으며 DNA 손상도는 Comet assay로 실시한 결과 에탄올은 농도의존적인 세포독성과 유전독성을 나타내었다. 한편 GTE와 EGCG는 에탄올 유도 세포독성 및 DNA 손상에 대하여 유의성 있는 억제효과를 나타내었으며 DPPH시험과 LDL oxidation 및 8OH-2'dG 생성시험에서 항산화효과를 나타내었다. 한편 녹차성분 함유 시판 리큐르주도 순수 에탄올에 비하여 세포독성억제 및 DNA 손상억제효과를 나타내었다. 이상의 시험결과 GTE와 함유 EGCG는 항산화성 유전독성억제기전을 통한 에탄올독성저감 물질로 판단된다.