• 제목/요약/키워드: Silver staining

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DNA Comet Assay를 이용한 방사선 조사 쇠고기와 돼지고기의 검지 기술 (Detection of Irradiated Beef and Pork by DNA Comet Assay)

  • 박준영;오경남;김경은;양재승
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제29권6호
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    • pp.1025-1029
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    • 2000
  • 방사선 조사된 쇠고기와 돼지고기의 방사선 조사 여부를 판별하는데 DNA comet assay의 활용 가능성을 검토하였다. 쇠고기와 돼지고기는 Co-60 동위 원소를 조사원으로 하여 0.1, 0.3, 0.5, 0.7, 1.0 kGy의 총흡수선량( $\pm$ 5.0%)이 되도록 조사하여, 냉동상태로 보관하였다. 시료로부터 분리 된 세포는 agarose gel과 혼합하여 슬라이드에 깔아주고, lysis 및 전기영동을 하였다. 방사선 조사된 시료의 경우 세포로부터 끌려나오는 DNA절편들은 양극을 방향으로 tail이 형성되었고, 비조사 시료의 경우 tail이 없거나, 일부에서만 작은 tail이 관찰되었다. 방사선 조사유무는 0.1 kGy부터 현미경상으로 검지가 가능하였고, 선량간 차이의 유의성 여부는 통계분석을 통하여 검지가 가능하여, 쇠고기와 돼지고기의 신속한 검지 방법으로 DNA comet assay를 활용할 수 있을 것이다.

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누에와 흰불나방 핵다각체병바이러스의 생화학적 특성 (Biochemical Characteristics of the Nuclear Polyhedrosis Viruses of the Fall Webworm, Hyphantria cunea, and the Silkworm, Bombyx mori)

  • 김현욱;박범석;진병래;임대준;강석권
    • 한국응용곤충학회지
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    • 제28권3호
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    • pp.105-112
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    • 1989
  • 누에(Bombyx mori)와 흰불나방(Hyphantria cunea)으로 부터 분리된 핵다각체병바이러스(nuclear polyhedrosis virus: NPV)를 동정하기 위하여 전자현미경 관찰한 결과, BmNPV 다각체의 크기는 $3 \mu\textrm{m}$ 정도의 18면체로 외형이 균일하였으나, HcNPV는 1.5-$2 \mu\textrm{m}$ 정도이며 부정형이었다. Alkaline protease를 부활화시킨 후 SDS-PAGE한 다각체 단백질의 分子물은 BmNPV가 30 KD, HcNPV는 31 KD인 major band와 이들의 중합체(polymer)로 생각되는 57 KD, 112 KD의 minor band들이 관찰되었다. 또한 virion 단백질을 SDS-PAGE한 후 은염색한 결과, BmNPV는 분자량 9.6~112 KD인 47개의 band, HcNPV 경우는 분자량 9.4~l11 KD인 48개는 band가 관찰되었다. BmNPV와 HcNPV DNA의 제한효소 처이에 의한 전기영동 패턴을 관찰했으며, 각각의 genome 크기는 BmNPV가 약 116.4 Kb, HcNPV의 약 114.6 Kb였다.

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한국산 산민달팽이 ( Incilaria fruhstorferi ) 후촉각의 형테 및 조직화학적인 연구 (A Morphological and Histochemical Study on the Posterior Tentacle Antenna of the Korean Slug , Incilaria fruhstorferi)

  • 김영언;장남섭
    • 한국패류학회지
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    • 제12권1호
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    • pp.1-17
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    • 1996
  • Morphological and histochemical characteristics of the cells in posterior tentacle antenna of Korean slug, Incilaria fruhstorferi were observed with light microscope. The epithelium of the posterior tentacle antenna was composed of supporting cells, sensory neurons and type-a clear cell. The columnar supporting epithelium was widely distributed in the posterior tentacle antenna, and the upper end of the cell was covered with acidic mucopolysaccharide. Nerve endings of the sensory neuron were distributed between type-a clear cells. It was usually located in tentacular knob, and the number of them gradually decrdased as close as tentacular stalk. Several cilia were observed on the nerve ending. Type-a clear cells were very brightly stained with all staining used, and the neutral mucous guanules distributed in the cytoplasm. Collar cells, type-b clear cell and various types of secrdtory cells distributed in the connective tissue. The collar cells were clustering in connective tissue, and the cytoplasm were filled with neutral mucous guanules. The cells and granules were stained with dark brown by silver nitrate stain. Type-b clear cells were irregular in shape and their cytoplasms were brightly stained wth many stains used. Ten types of secretory cells evenly distributed in the connective tissue and muscle layers of the posterior tentacle antenna. The five types of the secretory cells(A, B, E, J and L)seemed to secrete acidic mucopolysaccharide, and the other five type of the cell(C, D, F, H, and L)seemed to secrete neutral mucopolysaccharide. Muscular tissue composed of well-developed thick longitudinal muscle layers and thin circular muscle layers. Type-L secretory cells clustered only in muscular layers and they contained acidic mucopolysaccharides.

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출토 인골의 유전자분석-나주 복암리 3호분 옹관 인골을 중심으로 (The genetic analysis on ancient human bone in jar coffin excavated from Naju Bokam-ni 3rd tumulus)

  • 이규식;정용재;한성희;이명희;한면수;최동호
    • 보존과학연구
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    • 통권20호
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    • pp.5-20
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    • 1999
  • We have analyzed the allele and genotype frequencies from 10 fractions of ancient human skeleton in 3 pieces of Jar coffin excavated from Naju Bokamni3rd tumulus by PCR amplification, high resolution polyacrylamide gelelectorphoresis and silver staining. We could isolate human genomic DNA from 3 bone fractions but the rest of them could not be used as materials due to being decayed. We could detect sex determination as male and 3 genotypes of STR system, HUMTHO1, HUMTPOX and HUMC5F1PO from the bone fraction of left side in Jar coffin 3 and see the slightly reaction suggesting the sex as male from the bone fraction of the left side in Jar coffin 2 and female from the right side in Jar coffin 3.We have also analyzed the genotype frequencies of mitochondria from the bone fractions of the left side and the right side in jar coffin 3, respectively. From the result of indetifiying at nucletide position between 16018 and 16378of the base of hyper variable region(HV1) in the control region, We can presume that the both bones have the same maternal inheritance.

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위절제술을 받은 위암 환자의 Helicobacter pylori 감염률 측정에 관한 연구 (Detection of Helicobacter pylori Infection Rate in Resected Gastric Cancer Patients)

  • 김성;노재형;김성;김용일;김진복
    • Journal of Gastric Cancer
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    • 제3권2호
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    • pp.97-103
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    • 2003
  • Purpose: This study aims to determine the infection rate of Helicobacter pylori (H. pylori) in gastric cancer patients who received gastrectomies, and to compare the rates of H.pylori infection detected by serological test and that of histopathological test, and to evaluate its clinical meaning. Materials and Methods: Fifty two patients were selected from those who underwent gastrectomies at the Department of Surgery, Samsung Medical Center, from March 1997 to May 1997. The control group consisted of healthy 103 persons visited the center for health promotion in Samsung Medical Center. In both groups, we quantitatively checked serum level of IgG anti H. pylori antibody titer by ELISA using GAP IgG test kit (BioRad, USA) for the serological test, and we microscopically examined the surgical specimen stained by Warthin-Starry silver staining method for the histopathological test. Results: The seropositive rate of H. pylori in the patients' group was $71.2\%$ (37/52), and the control group was $65.0\%$ (67/103). The difference between two groups was statistically significant. However the histopathological study showed that the overall detection rate of H. pylori was $61.5\%$ (32/52) in the patients' group and $61.2\%$ (63/103) in the control group; nd this difference was not statistically significant Conclusion: We could confirm that H.pylori infection rate in the gastric cancer resected patients was statistically higher than in the normal healthy persons even in small population. And the detection method for the H. pylori infection by serological test was presumed to be better than that of histopathological test using surgical specimen. Further study for the larger population by well-organized multicenters will be needed.

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돼지 난포 발달 시 과립막 세포에서 발현되는 단백질의 변화 (Changing Proteins in Granulosa Cells during Follicular Development in Pig)

  • 채인순;장동민;정희태;양부근;박춘근
    • Reproductive and Developmental Biology
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    • 제33권3호
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    • pp.183-187
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    • 2009
  • This study analyzed change of proteins in granulosa cells during the porcine follicuar development by proteomics techniques. Granulosa cells of the follicles, of which the diameter is $2{\sim}4\;mm$ and $6{\sim}10\;mm$, were collected from ovary of slaughtered pig that each follicle of diameter $1{\sim}4\;mm$ and $6{\sim}10\;mm$. We extracted glanulosa cell proteins by M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. Proteins were refined by clean-up kit and quantified by Bradford method until total protein was $200{\mu}l$. Immobilized pH gradient(IPG) strip used 18 cm, $3{\sim}10\;NL$. SDS-PAGE used 10% acrylamide gel. After silver staining, Melanie 7 and naked eye test were used for spot analyzation. Increasing proteins in glanulosa cell of $6{\sim}10\;mm$ follicle were 7 spots. This spots were analyzed by MALDI-TOF MS and searched on NCBInr. In results, 7 spots were similar to zinc/ling finger protein 3 precursor (RING finger protein 203), angiomotin, heat shock 60 kDa protein 1 (chaperonin) isoform 1 (HSP60), similar to transducin-like enhancer protein 1 (TLE 1), SH3 and PX domains 2A (SH3PXD2A). Those proteins were related with transfer between cells. Increase of proteins has an effect on follicular development.

Proteomic Analysis of Colonic Mucosal Tissue from Tuberculous and Ulcerative Colitis Patients

  • Kwon, Seong-Chun;Won, Kyung-Jong;Jung, Seoung-Hyo;Lee, Kang-Pa;Lee, Dong-Youb;Park, Eun-Seok;Kim, Bok-Yung;Cheon, Gab-Jin;Han, Koon-Hee
    • The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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    • 제16권3호
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    • pp.193-198
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    • 2012
  • Changes in the expression profiles of specific proteins leads to serious human diseases, including colitis. The proteomic changes related to colitis and the differential expression between tuberculous (TC) and ulcerative colitis (UC) in colon tissue from colitis patients has not been defined. We therefore performed a proteomic analysis of human TC and UC mucosal tissue. Total protein was obtained from the colon mucosal tissue of normal, TC, and UC patients, and resolved by 2-dimensional electrophoresis (2-DE). The results were analyzed with PDQuest using silver staining. We used matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight/time-of-flight spectrometry (MALDI TOF/TOF) to identify proteins differentially expressed in TC and UC. Of the over 1,000 proteins isolated, three in TC tissue and two in UC tissue displayed altered expression when compared to normal tissue. Moreover, two proteins were differentially expressed in a comparative analysis between TC and UC. These were identified as mutant ${\beta}$-actin, ${\alpha}$-enolase and Charcot-Leyden crystal protein. In particular, the expression of ${\alpha}$-enolase was significantly greater in TC compared with normal tissue, but decreased in comparison to UC, implying that ${\alpha}$-enolase may represent a biomarker for differential diagnosis of TC and UC. This study therefore provides a valuable resource for the molecular and diagnostic analysis of human colitis.

SRAP을 이용한 국내육성 심비디움 품종의 유전적 다양성 분석 (Analysis of Genetic Diversity in Cymbidium Varieties Using SRAP)

  • 박부희;김미선;이영란;박필만;이동수;예병우
    • 한국육종학회지
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    • 제43권5호
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    • pp.399-404
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    • 2011
  • Genetic diversity among 28 Cymbidium varieties was evaluated by using a sequence-related amplified polymorphism (SRAP) marker system. The SRAP marker which was based on the open reading frames (ORFs) regions was developed primarily for Brassica species, but has been applied to various crops. A total of 30 SRAP primer combinations were initially screened. Twenty-eight SRAP primer combinations showed high polymorphism among the 28 Cymbidium varieties, which were consisted of breeding varieties and their parents in National Institute of Horticultural & Herbal Science (NIHHS). The amplified DNA fragments were separated by denaturing acrylamide gels and detected silver staining method. One hundred ninety six polymorphic bands (7 per primer) were generated and ranged from 0.3 to 1.0 kb in size. Polymorphic fragments were scored for calculating simple matching coefficient of genetic similarity and cluster analysis with multi-variate statistical package (MVSP) 3.1. The mean genetic similarity coefficient value was 0.588. The results showed that the correlation between $F_1$ varieties and their parents was high. These studied SRAP markers will be useful tools for genotype identification, germplasm conservation, genetic relationships in Cymbidium.

Zinc 대사와 관련된 Paneth 세포활성의 변화에 관한 조직화학적 연구 (Do Paneth Cells Regulate the Zinc Body Burden?)

  • 조승묵;김성준;박승국;강태천;원무호
    • Applied Microscopy
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    • 제30권4호
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    • pp.357-365
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    • 2000
  • 포유류 장생 상피세포의 하나인 파네스세포(Paneth cell)는 여러 가지 금속류를 함유하고 있으며, 생체가 과잉의 이들 금속류에 노출되거나 부족할 때에 장 내강을 통해 제거하거나 흡수함으로써 금속류의 항상성에 기여한다고 알려져 있다. 이번 연구는 이러한 연구보고에 근거하여 금속류중에서 zinc를 실험적으로 과량투여한 후 파네스세포내 zinc의 분포에 어떤 변화가 초래되는 지를 광학 및 전자현미경적 autometallography(AMG)로 관찰함으로써 파네스세포의 zinc와 관련된 세포생물학적 기능을 규명하고자 하였다. Wistar 랫드에 체중 당 20mg의 zinc chloride를 생리식염수 5ml에 녹여 복강주사한 후 2시간에 이르러 0.1 M phosphate buffer(PB)에 녹인 0.5% sodium sulphide-3% glutaraldehyde 흔합액으로 관류고정하였다. 회장(ileum)의 일부를 Dry Ice나 $CO_2$ gas로 얼린 후 cryostat을 이용하여 $20{\mu}m$ 두께의 조직절편을 만들어 및 단계의 AMG법을 시행하였다. 이와는 별도로 EM용으로 선택된 회장절편은 일련의 전자현미경 표본제작과정을 거쳐, 100nm두께의 thin section을 만들어 uranyl-lead 이중염 색 추 전자현미경으로 관찰하였다. Zinc를 투여한 동물에서 관찰된 소견은 생리식염수만을 투여한 대조군의 것과 비교할 때 큰 차이를 보였다. 우선 대조군에서는 파네스세포의 꼭대기(apex)부위에서 낱알모양을 띤 AMG양성반응 구조물(AMG grain)들이 분비과립과 사이토졸(cytosol)에서 관찰되었고, 세포사이공간에서도 적은 양의 grain이 분포하고 있었다. 반면 zinc를 투여한 랫드의 파네스세포에서는 AMG 입자가 이상의 부위에서 훨씬 많은 양의 grain이 분포해 있었으며, 특히 분비과립에서는 가장 높은 농도로 관찰되었다. 더욱이 대조군에서 관찰되지 많았던 장샘의 분비관(Lieberkuhn crypt)및 고유판 혈관의 내에서도 많은 grain이 관찰되었다. 이상의 결과를 요약하면 과량의 zinc에 노출된 생체는 혈관을 경유하여, 파네스세포의 분비과립을 매개로 하여, 장관의 내강쪽으로 과잉의 zinc 를 피내고 있는 모습을 보인다. 따라서 연구자는 파네스세포가 생체내 zinc의 양을 조절하는데 중요한 역할이 있을 것으로 본다.

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각종 포유동물 갑상선내의 소포방세포에 관한 비교조직학적 연구 (Comparative Histological Study on the Parafollicular Cells of Mammals)

  • 고정식;박상윤
    • 한국동물학회지
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    • 제23권2호
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    • pp.89-108
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    • 1980
  • 본 연구는 포유동물 갑상선내에 출현하는 PF cell의 형태학적 특징을 밝히기 위하여 사람을 비롯한 포유동물 5목 9종 (영장목, 사람; 우제목, 소, 돼지, 흑염소; 식육목, 개; 설치목, 흰쥐, 마우스, 다람쥐; 토끼목, 집토끼)을 재료로 하여 이 세포의 분포상태, 형태 및 염색성을 비교 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. PF cell의 출현수는 종에 따라 유의한 차이를 보였으며, 단위면적당 출현수는 개에서 가장 많았으며, 그 다음이 흰쥐, 다람쥐, 마우스, 집토끼, 소, 돼지, 흑염소, 사람의 순서로 적었다. 2. PF cell의 갑상선내의 분포상태를 보면 소, 집토끼, 다람쥐 및 마우스의 경우는 선엽의 부위에 따라 유의한 차이를 보였으며 개, 사람, 돼지, 흑염소 및 흰쥐의 경우는 유의한 차이는 아니나 부위에 따라 다소 차이를 보였다. 개에서는 선엽전체에 걸쳐 비교적 고르게 분포하였고, 흰쥐의 것은 각 부위의 중심부에 모여 있었다. 흑염소와 다람쥐의 것은 후부에 더 많았다. 마우스와 집토끼의 것은 선엽의 중간부에 많이 출현하되 마우스의 것은 주로 중심부에, 집토끼의 것은 후외측부위에 더 많았다. 사람, 소 및 돼지의 것은 중상부와 후상부에 많이 분포하되 사람과 소의 것은 주로 중심부에 더 모여 있었으며 돼지의 것은 곳곳에 밀집되어 나타났다. 3. PF cell의 출현 위치관계를 보면 개의 경우는 대부분 소포사이에 위치하며 무리를 이루는 경우가 많았지만, 집토끼의 것은 소포내 또는 소포질과 소포사이의 결합조직내에 두루 분포하되 무리를 이루고 있는 것이 자주 관찰되었고, 사람, 소, 돼지, 흑염소, 흰쥐, 마우스 및 다람쥐의 경우는 대부분 소포내 또는 소포곁에 낱개로 산재하였다. 4. PF cell의 모습은 식육목인 개의 것만 구형 또는 난원형이고 기타 동물의 것들은 방추형, 원추형, 난원형, 구형 및 세포질 돌기를 가진 세장형등 매우 다양한 모습이었다. 5. 세포의 크기는 소, 개 및 돼지의 것이 다소 크고, 집토끼, 사람 및 흑염소의 것이 중등대였으며 흰쥐, 마우스 및 다람쥐의 것이 다소 작은 편이었다. 6. PF cell내에 함유되어 있는 분비과립의 양에 따른 형별 세포의 출현비율에서 볼때 다과립형 세포가 많은 동물은 돼지, 소, 개 및 다람쥐였고, 희과립형 세포가 많은 동물은 마우스, 흰쥐 및 사람이었다. 7. 은친화성 도은법에서는 모든 동물에서 양성 반응을 볼 수 없었으나, 기타 3가지 염색법에서는 종에 따라 차이는 보이나 모두 양성 반응을 보였다. 즉, 개, 소 및 돼지의 PF cell은 3가지 염색에서 모두 중등도 이상의 강한 양성 반응을 보였고, 흑염소의 것은 Grimelius 은호성 도은법과 HCl-toluidine blue법에서, 집토끼와 다람쥐의 것은 HCl-toluidine blue 법에서, 흰쥐의 것은 Grimelius 은호성 도은법과 HCl-lead hematoxylin법에서, 마우스의 것은 HCl-lead hematoxylin법과 HCl-toluidine blue법에서 중등도 이상의 양성반응을 보였으며, 사람의 것은 3가지 염색법에서 모두 약한 양성 반응만을 나타내었다. 8. 이상의 소견을 종합하면, PF cell의 분포 위치 및 형태등에 종간의 차이를 볼 수 있었다. 또 조직학적 식별을 위한 염색법에 있어서는 양성 반응도가 다르기 때문에 실험 목적에 따라 염색법을 선택하여야 할 것으로 사료된다.

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