누에 분말을 이용하여 B. subtilis 및 A. kawachii 균주에 의한 고체 발효를 통해 얻어진 발효 누에분말의 발효시간에 따른 이화학적 특성(단백질 함량 및 단백질 분해 패턴) 및 생리활성 효과(항산화 작용, 환원력 및 혈전용해 활성)를 평가하였다. 누에 단백질 함량과 항산화 활성은 B. subtilis 및 A. kawachii 두 균주 발효 모두 12일째에 가장 높았으며, 발효시간 증가와 함께 증가하는 경향을 보였다. 발효 누에분말의 환원력은 B. subtilis 균주 발효에 의해서는 6일째에 A. kawachii 균주 발효에 의해서는 12일째 가장 높은 것으로 나타나 균주간에 차이가 있었다. 혈전 분해 활성은 B. subtilis 및 A. kawachii 두 균주 발효 모두 6일째에 가장 높았으며, 이러한 효과는 B. subtilis 발효 누에분말보다는 A. kawachii 발효 누에분말에서 더 높았다. SDS-PAGE상의 단백질 패턴 분석에서는 66-97 kDa 크기의 단백질 밴드가 B. subtilis 발효에 의해서는 발효 초기인 3일째 대부분 분해가 일어났으나, A. kawachii 발효 누에분말에서는 발효 3일째부터 차츰 분해되기 시작하여 12일째 분해가 대부분 이루어졌다. 따라서 미생물을 이용한 발효 누에에서 특정의 생리활성 작용을 기대하기 위해서는 사용하는 균종에 따라 발효 기간이 달라져야 한다는 것을 시사하였다.
본 연구의 목적은 누에형질전환 기술과 피브로인 재조합 단백질 발현시스템을 이용하여 황색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합 단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결코돈이 없는 EYFP 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 황색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 3,060개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 8 bloods의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 EYFP 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2세대의 누에형질전환체중에서 5령 3일 유충의 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부 견사선에서 황색형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 F2 세대의 고치와 저온에서 정련한 실크에서도 황색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었고, Western blot 분석에서도 EYFP 재조합 단백질이 피브로인 H-chain과 융합된 형태로 존재하는 것이 확인되었다. 이상의 결과에서 황색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었다.
본 시험은 임업선진국들로부터 터어키국으로 도입되는 수개 잠품종들의 생산성을 구명하기 위해서 몇가지 중요한 가잠의 실용형질을 비교하였다. 1. 공시잠품종 모두 사육기관이 길어서 30~38일 이었다. 그러나 잠107$\times$잠108은 가장 짧은 30일이었다. 2. 일본잠품종 태평$\times$장안이 상자당 수견양이 가장 많았으며 이태리의 Isonzo Piave, 폴란드의 M-198 그리고 터어키의 M$\times$N, S$\times$P, J$\times$C 등이 그 다음으로 수견량이 많았고 한국의 잠107$\times$잠108이 가장 적었다. 3. 전견중, 견층비율 및 생사양비율은 공시잠품종 모두 비슷하였으나 잠 107$\times$잠108이 가장 낮은 수준이었다. 4. 이상의 성적을 종합해서 평가할 때 잠107$\times$잠108 품종은 좋은 환경하에서는 그 품종의 특성을 발휘해서 좋은 사육결과를 얻을 수 있으나 터어키와 같이 자연조건하에서 사육하는 경우에는 좋은 성적을 기대하기 어려운 것 같았다.
Research on the hormones of insect has followed by the special opportunities and problems arising from pollution. Since then, the main frame of it has been energetically exploited by ligation, decapitation and so on. In the meanwhile, knowledge of the biochemistry of hormone action as well as other aspects of biochemistry in insects has been gradually disclosed. Since 1966, practical use of active analogs of the hormones has been also worked out as an insecticide and brought the features of it to the light. On the other hand, it is expected to afford the increase of silk productivity resulted from control of the fifth larval period by delaying normal development. With these regards, some of analogs have been tried to apply practically to the silkworm. One of them is "Manta" produced by Zoecon Chemical Company and it is presently used for the increase of silk productivity in Japan. Another one is "R-20458", not registered one, issued by Stuffer Chemical Company. It is still pending for the silkworm growth regulator For the possibility of practical use, two chemicals are tested on the increase of silk productivity by topical application and the obtained results are summarized as follows. 1. It is evident that the fifth larval period was extended by topical application of the tested chemicals "Manta"and "R-20458"at the fifth instar after 51 hours of the last ecdysis, ranging from 12 hours to one day, as compared to. the control 2. In survival rates, there is no significance at 5% level between control and treatments. It proved that there was no toxity to silkworm by topical aprication. 3. There is an increase of cocoon yield in both chemical treatments. It was resulted from increase of weight of single cocoon. "Manta"2.5ppm produced 22.2kg of cocoon. It is equal to 9% increase in index, as compared to that of control. In case of R-20458, the increasing rates were varied at the different concentration; 21.4kg of cocoon production with 5% increase at 5ppm, 20.9kg of it with 2% increase at 2.5ppm and 20.6kg of it with 1% increase at 1. 25ppm in index, respectively, as compared with that of control. 4. Percentage of cocoon shell was increased by topical application. In case of "Manta" 2.5ppm, it is 25.6% which is equal to 6% increase in index, as compared with that of control. For "R-20458", the increasing rates of percentage of cocoon shell were varied with the different level of chemical concentration. They are 25.0% of 4% increase at 2.5ppm, 24.9% of 3% increase at 1.25ppm and 24.7% of 3% increase at 5ppm. 15% increase was attained at "Manta" 2.5ppm in the weight of cocoon layer based on cocoon yield and percentage of cocoon shell in index, as compared with that of control. The rates for "R-20458"are 5% increase at 2.5ppm and 4% increase at 1. 25ppm in index.
본 연구의 목적은 누에형질전환 기술을 이용하여 적색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합 단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결 코돈이 없는 DsRed2 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 적색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 1020개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 6 broods의 형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인 할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 DsRed2 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2세대의 누에형질전환체 중에서 5령 5일 유충을 해부하여 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부와 후부 견사선에서 적색형광단백질이 발현되는 것을 확인 할 수 있었고, F2 세대의 고치에서도 적색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었다. 이상의 결과에서 적색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었고 이러한 결과를 토대로 새로운 산업소재로서 실크를 활용할 수 있을 것으로 기대한다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제5권2호
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pp.153-162
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2002
Earlier breeding experiments undertaken at Central Sericultural Research and Training Institute, Mysore, India since a decade had resulted in the development of many productive and qualitatively superior bivoltine hybrids. However, the hot climatic conditions of tropics prevailing particularly in summer are not conducive to rear these high yielding bivoltine hybrids. This has necessitated breeding of compatible bivoltine hybrids for year-round rearing. Accordingly, the Japanese hybrid, B2Ol ${\times}$ BCS12 which was found to be tolerant to high temperature was used as breeding resource material. Following hybridization and selection rearing of silkworms was taken up in SERICATRON (Environmental chamber with precise and automatic control facilities for uniform maintenance of temperature and humidity) at high temperature of $36{\times}1^{\circ}C$ and 85${\times}$5% RH in fifth instar and the control batches at $25{\times}1^{\circ}C$ and 65{\times}$5% RH. Directional selection was resorted to the batches reared at 36$\pm$1$^{\circ}C$ till F$_{5}$ keeping pupation rate as important selection criteria. From $F_{2}% onwards the experiment was modified in such a way as to conduct normal rearing every alternate generation to regain the lost vitality due to continuous exposure to high temperature and high humidity stress. At $F_{2}$ , Oval and dumb-bell cocoons were separated out and designated as CSR18 and CSR19, respectively. By utilizing these lines at $F_{12}$, the hybrid CSR18$\times$CSR19 was prepared and studied for the thermotolerance by subjecting to stress condition at high temperature of 36$\pm$1$^{\circ}C$ and 85$\pm$5% RH in fifth instar and the control batches at $25{\times}1^{\circ}C$ and 65${\times}$5% RH. The better performance of CSR18${\times}$CSR19 (survival > 88%) at $36{\times}1^{\circ}C$ clearly indicates the general superiority of CSR18${\times}$CSR19 with regard to high temperature tolerance over the productive hybrids and CSR18$\times$CSR19 can perform well in varied agro-climatic conditions of the tropics with optimum qualitative and quantitative characteristics.s.
본 연구는 누에 유충의 행동반응성에 관한 것으로서 행동반응이 가장 민감한 황색지에서의 행동반경에 대한 귀전 및 행동반경과 실용형질과의 귀전상관과 경로계수를 분석하여 얻은 결과는 다음과 같다. 1. 행동반경이 큰 품종과 작은 품종을 교잡한 F1세대 및 F2 세대의 행동반경은 양친간 행동반경의 평균치보다 작았다. 따라서 누에 행동반경은 작은 것이 큰 것에 비하여 부분우성임을 추정할 수 있다. 2. 분산분석법에 의하여 추정된 누에 유충의 행동반경에 대한 귀전력의 범위는 52~84%였다. 3. 의잠과 3령 및 5령의 해동반경과 몇 가지의 실용형질간에 상관이 인정되었다. 행동반경과 1$\ell$당 고치수 및 최청부터 발아까지의 일수사이에 정의 귀전상관이 인정되었고, 행동반경과 수견량, 단견중 및 견층중간에는 부의 귀전상관이 인정되었다. 4. 행동반경이 수견량에 미치는 효과를 알기 위하여 경로계수에 의한 분석결과 수견량과는 부의 직접효과가 있었고, 단견중 및 견층량과는 정의 상관효과가 있음을 추정하였다.
해충의 생물적 방제 인자로서 주목받고 있는 곤충병원선충(Steinernema carpocapsae)과 이들의 공생세균(Xenorhabdus nematophilus)이 유용곤충인 누에(Bombyx mori)와 그물등개미(Pristomyrmex pungens)에 상이한 독성을 보였다. S. carpocapsae는 누에에 대해 매우 높은 살충력(반수치사농도: 4IJs (감염태 유충수)/ml)을 보이는 반면, 그물등개미에 대해서는 매우 약했다. (반수치사농도: >150,000 IJs/ml). 반면에 X. nematophilus는 그물등개미에 대해 높은 경구독성(반수치사농도: $1.4$\times$10^3$cfu (콜로니 형성수)/ml)을 보였으나, 누에에 대해서는 낮았다. (반수치사농도: >$10^{8}$ cfu/ml). 또한 실험동물 랫드(Rattus norvegicus)에 S. carpocapsae와 X. nematophilus를 강제로 경구투여 한 결과 시험 전기간(21일)동안 치사개체는 없었으며, 내부 장기에서 처리한 공생세균과 선충은 발견되지 않았다.
최근 들어 여러 산업 분야에 활발히 사용되고 있는 고분자 분리막은 화학구조의 제어나 제막공정에서의 물리적 특성 제어뿐만 아니라 다양한 소재와 혼합된 복합막 제조를 통해서 고유의 특성을 부여할 수 있는 장점을 가지고 있다. 본 연구에서는 분리막 제조 시에 누에(Bombyx mori)가 생산한 친환경 천연소재로 활용 가능성이 넓은 실크 고분자의 복합막 제조 시 다른 소재와의 혼화성 지표로 사용할 수 있는 용해도 파라미터를 분자동역학을 이용하여 계산하였다. 역시 친환경성 및 생체적합성을 갖고 있는 polyvinylalcohol (PVA)의 용해도 파라미터를 분자동역학을 이용하여 계산 후 서로 비교하였을 때 두 고분자 소재가 비슷한 용해도 파라미터 값을 갖는 것을 확인하였다. 결론적으로, 두 고분자가 서로 잘 혼합될 수 있음을 이론적으로 증명하였고, 실제 실험을 통해서도 이를 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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