본 연구는 장려 품종 누에고치로부터 실크 세리신과 실크 피브로인으로 분리하여 이들 단백질을 세포 첨가제로 개발하기 위하여 수행되었다. 장려품종 누에고치를 고온 고압기를 통하여 실크 세리신을 먼저 추출하였으며, 남겨진 실크 피브로인을 이용하여 시간별로 용해하여 품종별 실크 피브로인을 얻었다. 이들 실크 세리신과 실크 피브로인을 이용하여 세포 독성, 세포 증식 및 분열 관련 유전자 발현 분석을 확인하였다. 먼저, 누에고치의 특성을 분석하기 위하여 공극률을 측정하였다. 공극률은 금옥잠 누에고치의 경우 84.71%, 대성잠 81.58%, 백옥잠 73.23%의 공극률 값이 나타났다. 분자량 차이에 있어서 실크 세리신은 품종의 영향이 크지 않았으나 실크 피브로인의 경우, 금옥잠은 5시간의 장시간의 용해에도 불구하고 100 kDa 이상의 큰 분자량을 나타내었다. 장려품종 누에를 사용하여 제조된 실크 세리신과 실크 피브로인을 이용하여 세포 증식 실험을 하였으며 백옥잠으로부터 얻은 실크 세리신의 경우 농도에 따라 유의적으로 세포 증식 효과가 나타났으며, 금옥잠으로부터 얻은 실크 피브로인의 경우 5시간 용해 시 세포 증식에 있어서 가장 우수한 결과를 보였다. 또한, 백옥잠 실크 세리신 처리 결과 세포 증식 관련 유전자의 발현수준이 증가됨을 확인할 수 있었다.
Silk fabrics mordanted with $Fe^{2+},\;Ni^{2+},\;and\;Cu^{2+}$ were dyed with the aqueous extract of Cassia tora L. seed which was known to include water soluble colorant kaempferol, one of flavonol compounds. Kaempferol can react with free radicals and chelate transition metal ions, which is thought to catalyze processes leading to the appearance of free radicals and have antioxidant activity. In relation to the coordinating and chelating mechanism of the ions with the silk protein and kaempferol, reasonable conclusions should be made on the colorant uptake and the water fastness of the fabric. The amount of the colorant on the fabric was in the order of $Fe^{2+}>Ni^{2+}>Cu^{2+}$. In case of dyeing through coordinaiton bonds between transition metal ions and silk protein and colorants, it was thought that the ions with the smaller secondary hydration shell, the higher preference to the atoms of the ligand coordinated, and the suitable bonding stability for the substitution of primarily hydrated water molecules for colorants led to the higher colorant uptake. The water fastnsess of the fabric was in the order of $Fe^{2+}>Cu^{2+}>Ni^{2+}$. It should be reasonable to choose transition metal ions with weak and strong tendency to the ionic and the coordination bond, respectively, to the carboxylate anion of the silk protein. Although further research needs to be done, the conclusions above may be generally applied to the natural dyeing through the coordination bond mechanism between transition metal ions and colorants and substrates.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제24권2호
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pp.69-74
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2012
Tropical tasar silkworm Antheraea mylitta Drury experiences extreme temperature stress conditions during its life cycle particularly during diapauses and first crop. The present study witnessed the impact of high temperature on some biochemical profiles and egg production (fecundity) of semi-domesticated Daba and Shorea robusta (Sal) based wild ecorace Laria during seed cocoon (pupa) preservation. Cocoons of Daba and Laria were treated with high temperature at $40^{\circ}C$ for 10 days in a BOD incubator. The protein profile and carbohydrate content in the hemolymph and fat body and total haemocyte count (THC) in the hemolymph of pupa were investigated. Further, the fecundity and fertility of egg was assessed. Significant increase in the protein concentration was observed in the hemolymph with reduction in the fat body (p<0.05). The difference in protein concentration was highly significant between the semidomesticated Daba and wild ecorace Laria (p<0.05). High pupal mortality (20%) and reduced fecundity (10-15%) in Daba was noticed compared to wild Laria. Also an increased THC (>28000) was recorded in Laria. The study infers the potentials of wild ecoraces in sustaining the extreme temperature conditions and need of adopting suitable package of practices for the preservation of diapause seed cocoons during extreme summer conditions. There is possibility to introgression thermal stress resistant traits in the semi-domesticated races of tasar silkworm by resorting to conventional breeding plans with wild races and keeping the thermal stress induced response as markers.
본 연구의 목적은 누에형질전환 기술과 피브로인 재조합 단백질 발현시스템을 이용하여 황색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합 단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결코돈이 없는 EYFP 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 황색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 3,060개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 8 bloods의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 EYFP 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2세대의 누에형질전환체중에서 5령 3일 유충의 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부 견사선에서 황색형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 F2 세대의 고치와 저온에서 정련한 실크에서도 황색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었고, Western blot 분석에서도 EYFP 재조합 단백질이 피브로인 H-chain과 융합된 형태로 존재하는 것이 확인되었다. 이상의 결과에서 황색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었다.
There have been no published studies concerning the anti-inflammatory effects of corn silk on colon cancer cells. Thus, this study was conducted to investigate the effect of corn silk extract containing high levels of maysin on inflammation and its mechanism of action in colon cancer cells. SW 480 human colon cancer cells were treated with $1{\mu}g/mL$ of lipopolysaccharide (LPS) to induce inflammation, and next they were treated with different concentrations of corn silk extract (0, 5, 10 and $15{\mu}g/mL$). The concentrations of nitric oxide (NO) were determined. The mRNA expressions of inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), tumor necrosis factor ${\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$), interleukin-1beta ($IL-1{\beta}$) and interleukin-6 (IL-6), were determined. Western blot analysis was performed to determine the protein expressions of nuclear factor-kappa B ($NF-{\kappa}B$) and mitogen-activated protein kinases, and the latter consists of extracellular signal-related kinase (ERK), c-jun NH2-terminal kinase (JNK) and p38 MAP kinase (p38). The concentration of NO and the mRNA expression of iNOS were significantly and dose-dependently decreased in the corn silk-treated groups (P<0.05). The mRNA expression of $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ and IL-6 were significantly increased in the LPS-treated group (P<0.05), but these expressions were significantly and dose-dependently decreased in the corn silk treated groups (P<0.05). The protein expressions of $NF-{\kappa}B$ (in a dose-dependent fashion), ERK (at 10 and $15{\mu}g/mL$), JNK (at $15{\mu}g/mL$) and p38 (at 10 and $15{\mu}g/mL$) were significantly decreased with corn silk treatments (P<0.05). In conclusion, corn silk extract containing high levels of maysin seems to inhibit the LPS-induced inflammatory responses in SW480 colon cancer cells via the $NF-{\kappa}B$ pathway.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제4권1호
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pp.1-4
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2002
Silk proteins consist of two major proteins, fibroin and sericin. There is currently an enormous reawakening of interest in these silk proteins as a biomaterial due to their mechanical and biological properties based on the detailed findings. Novel method for determination of the crystalline structure of silk proteins in an atomic level using nuclear magnetic resonance (NMR) was reviewed. Recent application of silks to biomaterials and prospects for future were discussed.
천잠 견단백질 가수분해 분말의 생리활성을 검토하여 비의류용 소재개발을 위한 기초 자료로 삼기 위하여 우선 항산화 및 항당뇨 활성을 탐색하였다. 1. 천잠 고치를 가수분해하여 제조한 분말은 항산화제인 비타민 C 대비 75% 내외의 항산화 활성을 나타내었다. 2. 천잠 견단백질 가수분해 분말은 혈당강하 효과도 나타내어 기능성 식품소재 적용 가능 물질로 사료된다.
This study was designed to investigate the effects of silk fibroin powder on oxygen radicals and their scavenger enzymes in serum of rats. Sprague-Dawley(SD) male rats (160${\pm}$10 g) were fed experimental diets (SFP-2.5 and SFP-5.0 groups)added 2.5 and 5.0 g/kg BW/day for 6 weeks. Triglyceride levels were remarkably inhibited (15∼25%) in SFP-2.5 and SFP-5.0 groups compared with control group. Hydroxyl radical ($.$OH) formations resulted in a marked decrease (15%∼25%) compared with control group, while superoxide radical and hydrogen peroxide formations resulted in a significant decrease (6∼12% and 10%). Lipid peroxide and oxidized protein (>C=O group) productions resulted in a significant decrease (6∼12% and 6%) compared with control group. Superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities were remarkably increased (35∼55% and 40∼50%), but glutathione peroxidase (GSHPX) activities were significantly increased (13%) compared with control group. These results suggest that anti-aging effect of silk fibroin powder (SFP) may play a pivotal role in attenuating a various age-related changes.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제17권2호
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pp.229-234
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2008
We used serial analysis of gene expression (SAGE) approach to derive a profile of expressed genes of the posterior silk glands (PSG) and to create a reference for understanding gene cluster related to the mechanism of silk protein synthesis in the silkworm, Bombyx mori. We constructed a 3' SAGE library from the PSG of the fifth instar larvae of the silkworm. In total we obtained 2,406 SAGE tags, of which 682 were unique tags. Sorted by tag count number, 27 (4%) unique tags were significantly more abundant genes (ten or more times), whereas 445 (65%) unique tags were detected as single copies. The annotation of 682 unique SAGE tags revealed that 462 (68%) of the SAGE tag sequences represented known genes, whereas 220 (32%) of the tag sequences had no matches in SAGE map and silkworm EST databases. Of the 682 SAGE tags, the most abundant tag sequences were that of the fibroin light chain gene and the silk protein P25. In addition, we compared two relative abundance results of the SAGE and the EST approaches to verify whether their transcript quantitative aspects are significant or not. The comparative results of relative abundances of the fibroin H-, L- chain and P25 glycoprotein genes indicated that the quantitative approach based on SAGE tags is effective for quantitative cataloging and comparison of expressed genes in same organs. The SAGE tag information reported in this study would be useful for researchers in the field to analyze genes associated with silk processing mechanisms of insects.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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