As a condition for obtaining the silk I type crystal that has stability and high reproducibility, after dissolving silk fibroin crystalline part (Fcp), the changes of recrystallized crystal structure according to dialytic pH were examined by x-ray diffraction and differential thermal analysis. The Fcp was obtained from the aqueous solution of silk fibroin enzymatic proteolyzed by chymotrypsin. The crystal structure of Fcp showed silk II type. When the Fcp was dissolved by 10M LiBr aqueous solution, the Fcp1 showed the silk II type at pH 9. However, besides the silk II type, the silk I type structure begins to appear at pH 8 and only the silk I type structure was found below pH 6. On the other hand, the Fcp2 that calcium chloride was used in the dissolution found only the silk I type crystal structure below pH8.
To hydrolyze silk fibroin was treated with NaOH solution on various concentrations and times. And it was examined that the addition effects of NaHSO3 solution on the solubility and colouring of silk fibroin. As obtained results are as follows; The more increasement of concentration and time of NaOH treatment, the more increasement of solubility but solubility was slight above 3% concentration of NaOH. Fibroin yield was decreased above 3% concentration. This was due to formation of peptide or amino acids below molecular weight 3,000. Most of molecular weight distribution came out to be under 3,000 in 2% concentration and 4hrs of NaOH treatment. The more increasement of adding concentration and 4hrs of NaOH treatment. The more increasement of adding concentration of NaHSO3, the more reduction of solubility but white index of powder increased. In the results of FT-IR spectras of silk fibroin powder obtained by various concentrations of NaHSO3 treatment, the absorbent peak at 3,400 cm-1 which was considered as -CH=N- (azomethine) was disappeared by the more addition of NaHSO3. It showed that absorbent peak of $\beta$-fibroin moved into low temperature region and transferred to $\alpha$- and random coil structure through the DSC experiment. In the results of amino acid analysis, alkali hydrolysis reduced the oxy amino contents acid like serine and tyrosine, but increased the glycine content by the more addition of NaHSO3.
Sh. R. Madyarov;Yeo, Joo-Hong;Lee, Kwang-Gill;Lee, Yong-Woo
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제2권1호
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pp.7-13
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2001
Enzymatic hydrolysis of different forms of silk fibroin (soluble, gel and insoluble forms) by industrial and commercial enzyme preparations to obtain aqueous and powdered silk fibroin in relatively mild conditions was investigated. A mono-enzymatic hydrolysate systems were tested for hydrolysis of water-soluble form of fibroin as most productive form of protein substrate. Insoluble forms of substrate usually were hydrolyzed less effective. In some cases from soluble fibroin substrate gel was formed during hydrolysis process. This hindered intermixing and decreased rates of hydrolysis. Insoluble sediments were formed in enzymatic hydrolysates in other cases. These sediments and also sediment after chemical hydrolysis were purified and tested on amino acids content for comparison. Sediments formation in these conditions are considered as pure tyrosine isolation method. Obtained hydrolysates were characterized by gel-chromatography analysis and other standard biochemical methods. Possibility of application of enzymatic hydrolysis for preparation of silk fibroin hydrolysates is discussed.
실크 피브로인은 누에로부터 생산되는 천연단백질로서 생분해성과 생체적합성을 가지고 있어 생체재료로 사용하기에 적합한 물질이다. 본 연구에서는 이러한 실크 피브로인이 세포 생장에 미치는 영향을 확인하기 위해서, 다양한 농도의 실크 피브로인 용액을 만들고 이를 이용하여 실크 피브로인 필름을 제작하였다. 제작된 실크 필름에서 세포를 배양한 후 세포부착과 증식 능력, 형태등을 관찰하였으며, 세포 부착과 생장관련 유전자의 발현을 분석하였다. 그 결과 0.1과 1% 실크 피브로인 필름에서 배양한 세포가 세포 부착능력이 가장 우수했으며, 특히 1% 필름에서 자란 세포의 경우 다른 농도의 필름에서 보다 그 생장이 매우 좋았다. 또한 세포 생장과 관련된 유전자의 발현 수준은 0.1과 1% 실크 피브로인 필름에서 증가됨을 확인 할 수 있었다. 이러한 결과는 실크를 이용하여 다양한 용도의 의료용 소재로 사용하는데 있어 기존의 다른 생체막을 대체할 수 있을 뿐 아니라, 실크 생체막의 사용으로 결손된 부위에 대한 빠른 치유효과 또한 기대할 수 있을 것이라 생각된다.
Silk fibroin is likely to be hydrolyzed by acids or alkalies at high temperature, and the degree of the hydrolysis has been inferred from the changes in tensile strength and elongation. But, in this experiment, it was intended to infer that from the quantitative changes in terminal aminp group content as well as in tensile strength and elongation. Silk yarn was treated with boiling water, hydrochloric acid, and sodium hydroxide under various conditions. The boiling water somewhat degraded silk fibroin. Silk yarn treated with sodium hydroxide contained more terminal amino group than that treated with hydrochloric acid. This result agreed fairly well with the loss in weight, tensile strength, and elongation: the terminal amino group content increased with the decrease of tensile strength, elongation, and weight. The damage by sodium hydroxide to the silk fibroin was greater than that by hydrochloric acid.
Seo, Chung-Won;Um, In-Chul;Rico, Catherine W.;Kang, Mi-Young
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제23권1호
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pp.115-122
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2011
The effect of dietary feeding of silk fibroin/sericinmixtureson the antioxidative status and glucose metabolism in high fat-fed mice was investigated. The mice weregiven experimental diets for 6 weeks: normal control (NC),high fat (HF) andhigh fat supplemented with F100 (pure fibroin, HF-F100), F81 (81:19 fibroin-sericin, w/w, HF-F81) or F50 (50:50 fibroin-sericin, w/w, HF-F50). The silk protein-fed mice showed decreased lipid peroxidation, enhancedantioxidant enzymesactivities and lower blood glucose level relative to HF group. The HF-F50 animals exhibited significantly lower insulin level, higher glycogen concentration, enhanced hepatic glucokinaseactivity and reduced glucose-6-phosphate and phosphoenolpyruvatecarboxynaseactivities than the HF ones. The $in$$vivo$ antioxidant activity and hypoglycemic action tended to increase with increased amount of sericin and decreased fibroin content in the diet. These findings demonstrate that silk protein, particularly sericin, may be beneficial in suppressing high fat diet-induced hyperglycemiaand oxidative stress.
Changes of silk fibroin molecular weight was studied by enzymatic proteolysis and reverse reaction of enzymatic proteolysis (plastein reaction) using chromatography, X-ray diffraction and thermal analysis methods. When the treatment of enzymatic proteolysis with $\alpha$-chymotripsin to silk fibroin solution, a precipitate of Fcp fractions was formed. And, this was dissolved in LiBr aqueous solution, the precipitate of PIFcp fractions was obtained again. Fcp and PIFcp fractions showed silk IIand silk Itype structure, respectively. Fcp fractions was about 6,900 in molecular weight, PIFcp fractions obtained by plastein reaction on the precipitate of Fcp fractions increased molecular weight to abort 15,000. The molecular weight of Fcp fractions was increased by plastein reaction, but Fcp fractions almost transited to silk I type crystal. The structure of silk I type of PIFcp fractions was steady identified by X-ray diffraction and thermal analysis. As molecular weight of Fcp fractions was gradually low, PIFcp fractions was become to macromolecule little by little.
침강성 탄산칼슘의 제조를 위해 액체-액체 상태에서의 결정화 실험을 실행하였다. 탄산칼슘 결정을 만들기 위한 방법 중 조작이 간단하며 다양한 탄산칼슘 결정을 얻을 수 있는 염화칼슘과 탄산나트륨의 반응법을 선택하였다. 반응 시간, 용질의 농도, pH, 유기 첨가제를 변경하여 탄산칼슘을 합성하였다. 유기 성분을 가진 탄산칼슘을 합성하기 위해 아미노산이 복합되어 있는 silk fibroin을 첨가하였고, silk fibroin이 탄산칼슘의 결정화에 미치는 영향에 대해 초점을 맞추어 실험을 수행하였다. 여러 탄산칼슘 결정을 분석하기 위해 FE-SEM, XRD, 그리고 FT-IR을 사용하였다. 반응 시간, pH가 탄산칼슘 결정 형태에 큰 영향을 줌을 관찰하였다. Silk fibroin이 결정형태 vaterite의 형성을 저해하고 calcite의 형성에 효율적인 첨가제로 작용하는 것을 발견하였다.
PLGA는 미국 식품의약품안전청의 승인을 받은 합성고분자로서 생체재료로 널리 쓰이며, 실크피브로인은 세포친화성 및 우수한 기계적 특성으로 세포의 조직성장을 지지한다. 본 연구에서는 PLGA/실크피브로인 0, 10, 20, 40 및 80 wt% 하이브리드 필름을 제조하였고 함량별 슈반세포의 최적환경을 설정하고자 하였다. DSC결과 PLGA/실크피브로인 필름이 in vivo 적용시 열적으로 안정할 것으로 사료되었다. 접촉각 측정을 통해 PLGA/실크피브로인 10 및 20 wt% 필름이 세포 분화 및 증식에 적합할 것으로 사료되며 RT-PCR과 SEM 결과로부터 PLGA에 10 및 20 wt%의 실크피브로인을 함유한 필름에서 슈반세포의 우수한 부착거동 및 형태유지를 확인하였다. 또한 WST 결과 10 wt% 실크피브로인 함량에서 높은 증식률이 확인되었다. 결과적으로 PLGA/실크피브로인 10 및 20 wt% 필름이 세포에 알맞은 상호관계를 제공해 긍정적으로 작용함을 확인하였다.
In order to investigate the crystallization in silk fibroin induced by acid treatment and its photo-yellowing reduction effect. silk fibroin were immersed in PH 3.5~4.0 sulfuric acid and 0.01N hydro-chloric acid at 2$0^{\circ}C$, and the changes of crystallinity were measured by infrared spectroscopy, X-ray diffraction. Yellowness index caused by UV irradiation were also observed. The results are as follows : 1. ${\beta}$-form transition occurs when the silk fibroin are immersed at 2$0^{\circ}C$ in pH 3.5~4.0 sulfuric acid and 0.01N hydro-chloric acid. Formation of new hydrogenbond in molecules on the amorphous region induced ${\beta}$-form structure, and increased crystallinity. 2. Crystallization owing to $\beta$-form transition reduced the initial yellowness index by ultraviolet irradiation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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