• KSBB Journal
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• 제9권5호
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• pp.518-524
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• 1994

Cytodex III 마립담체를 이용하여 무혈청배지에서 인간선장 세포를 배양하였다. 무혈청애지에서 미립담체 표변에 세포들은 정상적으로 부착하고 확 산하면셔 세포들은 담체에서 담체로 이동하여 생육 하였다. 미립담체에 접착 수율은 1%의 혈청 을 포 함된 배지에서는 약 93%인 반면에 무혈청배지에 서는 85% 정도로 나타났다. 접착된 세포의 90% 이상이 유가식 및 연속배양에서 탐체의 표변에 접 착한 후 6시간 후에 확산하며 생육하였다. 유가식 배양에셔 서1포농도와 최대 scu-P A 농도는 각각 $9.1{\times}10^5$ cells/m!와 1790 IU/ml이였고 연속배양에 셔는 각각 $2.5{\times}10^6$ cells/m]와 1820 IU/ml로 나타났다. 또한 저혈청배지에셔는 scu-P A가 tc-P A로의 전환율이 10% 정도로 높은데 비교하여 무혈 청배지에서는 전환율이 4.8%로 낮은 것으로 나타났 다. 이처럼 무혈청배지는 저혈청배지에셔보다 낮은 tc-P A로의 전환율을 유지할 수 있는 이점이 었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제19권2호
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• pp.133-145
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• 2004

난자의 체외성숙 및 체외배양에는 일반적으로 동물의 혈청을 사용하고 있다. 그러나, 채취한 소의 상태에 따라서 혈청의 질에 차이가 있어 실험데이터가 일정하지 않을 수 있고, 그것으로부터 바이러스, 세균, 마이코플라즈마 등에 오염될 가능성이 있다. 따라서, 본 실험에서는 완전 무 혈청 배양액에서 난자의 성숙, 배 발생율, 세포 수, 동결성을 검토하였다. 다음으로, 근래 혈청배지로 생산한 체외 배양 수정란은 과체중의 산자 생산, 초기 산자 사망률, caesarean section, dystocia 같은 발병으로 문제가 지적되고 있다. 그러나 무 혈청 배지로 생산한 체외 배양 수정란은 이러한 현상을 개선할 수 있다는 보고가 있어 본 실험에서는 완전 무혈청 배양액에서 생산된 동결란과 신선란을 젖소에 이식하여 그 결과를 검토하였다. 무혈청 배양액에는 에너지원과 세포성장인자가 첨가된 IVD101과 IVMD101, 대조군인 혈청 배양액에는 TCM199 + 10% FBS가 사용되었다. IVMD101에 의해 체외성숙이 이루어 졌고, 혈청이 첨가된 TCM199 + 10% FBS에서는 12.4% 배 발생율을 보인데 반해, 무혈청 배양액 IVD101과 IVMD101이 각 32.4%, 34.5%로 훨씬 높은 배 발생율을 보였다. 더욱이, 세포 수에 있어서도 무혈청 배양액에서 발생된 배반포의 세포수가 혈청이 첨가된 배양액에서 발생된 배반포의 세포수보다 월등하였으며, 이는 체내란과 비슷한 세포 수를 보이고 있다. 수정란의 내동성을 보면, 융해하고 24시간 배양기 정치 후에 IVD101과 IVMD101은 94.5%, 95.8%의 생존율을 보인 반면 TCM199 + 10% FBS는 52.5%에 불과하다. 융해하고 72시간후 탈출 배반포율이 IVD101과 IVMD101는 78.4%, 83.7%였는데 반해 TCM199 + 10% FBS는 32.0%였다. 마지막으로, 무혈청 배양액에서 발생한 동결란과 신선란을 젖소에 이식한 후에 임신율에 있어서는 유의적 차이는 없었지만, 무혈청 배지에서 생산된 수정란의 내동성의 탁월함이 증명되었다. 이러한 결과들로 종합해 보면, 무혈청 배양액 (IVD101, IVMD101)에서 발생된 수정란이 혈청 배양액에서 발생된 수정란보다 배발생율, 세포수, 동결성, 임신율에 있어서 우수함을 알 수 있었다. 이러한 무혈청 배양액은 배발생 과정의 연구뿐만 아니라 수정란 이식을 위한 고품질의 체외 수정란의 대량 생산, 복제, 형질전환 동물 생산 등에도 유익할 것으로 사료된다.

• KSBB Journal
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• 제8권1호
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• pp.17-22
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• 1993

$1.96{\times}10^{-5}$(IU/cell/hr) of specific scu-PA production rate was obtained from HEK cells in maintaining ca. $8{\times}10^{5}$(cells/ml) of maximum roll density at 10(ml/hr) of perfusion rate with recycling 20% serum free conditioned media. It can be compared to $4{\times}10^{6}$(cells/ml) of maximum cell density and $4.56{\times}10^{-4}$(IU/cell/hr) of specific production rate in cultivating cells with 1% serum containing medium. Thc conversion ratio of scu-PA to tc-UK increased up to 55% as the recycling ratio increased; however, recycling the used medium seemed to have least negative effect on cell growth. It also showed that the recycling process had definitive advantage of using serum free medium in perfusion cultivation of HEK cell line.

• KSBB Journal
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• 제11권3호
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• pp.288-294
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• 1996

CHO 세포를 0.5%, 1 %. 2%, 3%, 4% 및 5% 놓도의 FBSd를 함유한 MEMa 배지에 $1{\times}10^4cells/\textrm{cm}^2 와 2{\times}10^4cells/\textrm{cm}^2$의 초기 농도로 정치배양하여 세포 성장과 EPO 생산 특성을 조사하였다. 혈청 농도와 접종 농도를 증가시킴에 따라 세포 증식 속도와 최대 세포 농도가 증가하는 경향을 보였으며, 적절한 혈청 농도의 선택이 세포 성장의 최적화에 필 요하다고 할 수 있다. 세포 성장 도중에 무혈청배지로 교환한 결과 세포 성장과 EPO 생산이 증가되었다. 배지를 교환하지 않았을 경우 세포 성장이 최대 ($2.1{\times}10^5cells/\textrm{cm}^2$)에 도달된 후 급격히 세포농도가 감소하는 높은 사멸율을 보이고, EPO의 최대 농도 도 2,380units/mL에 불과하였으나, 무혈청배지로 교환한 배양에서는 세포 성장이 크게 증가하여 $6.2{\times}105cells/$\textrm{cm}^2$의 최대 세포농도와 7,470units/mL 의 EPO 농도를 얻었다. 따라서 CHO 세포 성장과 E EPO 생산과는 상호 연관이 있으며, 세포배양으로 EPO 생산을 극대화하기 위해서는 CHO 세포의 고 농도 배양이 필요하다고 할 수 있다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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• pp.171-173
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• 2003

본 연구에서는 생분해성 고분자 나노입자를 이용하여 부착성 세포의 세포군집 (cell aggregates) 형성을 촉진시켜 무혈청 배지에서 3차원적 부유 배양하는 방법을 개발했다. 생분해성 고분자 나노입자의 사용은 무혈청 배지 부유배양에서 부착성 동물세포인 HEK 293 세포의 세포군집 형성과 세포증식(나노입자를 사용하지 않은 대조군과 비교하여 2배 이상)을 촉진하였다. 일반적으로 무혈청배지 부유배양에 세포를 적응(adaptation)시키는 데에는 시간이 오래 걸리고 많은 비용이 드는데, 이 연구에서 개발된 방법은 이러한 세포적응 공정이 필요없다. 이 배양법은 여러 부착성 동물세포의 산업적 대량배양에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제20권4호
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• pp.297-305
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• 1997

A new serum-free defined medium was developed that supports the growth of normal rat mammary epithelial cells. Mammary organoids from the glands of female F344 rats were cultured in a serum-free medium. Monolayer culture colonies developed within a week and remained viable for months in culture. Upon subculture of one-week-old primary colonies, almost the same morphology of colonies was developed. The scrape loading/dye transfer technique showed that most of colonies that developed in a serum-free medium containing EGF, human transferrin, insulin, and hydrocortisone (basal serum-free medium, BSFM) failed to show cell-cell communication. However, colonies cultured in BSFM supplemented with prolactin, $E_2$, and progesterone (complete hormone serum-free medium, CHSFM) showed cell-cell communication at 14 days of primary culture or of subculture. By flow cytometry with FITCPNA and PE-anti-Thy-1.1 monoclonal antibody, we distinguished four RMEC subpopulations in cultures in both media: Thy-1.1+ cells, PNA+ cells, cells negative to both reagents and cells positive to both reagents. It is likely that combined prolactin, cortisol, and insulin in CHSFM stimulate terminal differentiation of clonogenic cells.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.3-7
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• 2002

In vitro embryo culture techniques provide significant contributions not only for a basic research of fertilization and early embryogenesis, but also for a low cost mass production of bovine embryos for transfer, embryo diagnosis, nuclear cloning and the production of transgenic cows. This presentation introduces newly developed serum-free media (IVD101 and IVMD101) that are effective far high yields of transferable embryos of excellent quality from in vitro-matured and fertilized oocytes. Both serum-free media are superior to a conventional serum-containing medium on the increased rates of blastocyst formation, post-thaw embryo viability, and pregnancy after transfer. Furthermore, reduced risks of calf mortality and large calf syndrome are also observed for the serum-free-derived embryos. Serum-derived embryos contain a large number of lipid droplets and immature mitochondria in their cytoplasm that may account for the lower production of transferable embryos and poor embryo quality.

• 한국안광학회지
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• 제4권1호
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• pp.1-6
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• 1999

사람의 각막상피 세포를 배양하여 각막상피가 저절로 탈락해 나가는 과정을 이해하기 위해 무 혈청 배지에서 세포를 1주일 동안 배양하여 시간의 경과에 따른 세포의 소실과정을 조사하였다. 사람 각막상피 세포 주를 무 혈청 배지에서 배양하여 1, 2, 3, 6일에 세포의 형태적 관찰과 세포고사(Apoptosis) 정도를 측정하기 위해 Giemsa 염색, Hoechst 33342 형광 염색, 그리고 TUNEL(TdT-dUTP terminal nick-end labelling) assay를 시행하였다. 무 혈청 배지에서 세포를 배양하연 시간이 지남에 따라 세포의 모양이 변하였으며 망상의 세포 군집을 형성하였다. 많은 세포가 부유하여 작은 소체를 형성하였으며 세포고사 율은 3일 경과 후 50%를 나타냈다. 또한 TUNEL assay에 의해 단편화된 DNA도 관찰할 수 있었다. 본 연구의 결과는 영양 부족상태의 각막상피 세포가 세포고사를 거쳐 소모되고 탈락되는 것을 암시하고 있다.

• 한국축산식품학회지
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• 제43권6호
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• pp.1017-1030
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• 2023

Fetal bovine serum (FBS), which contains various nutrients, comprises 20% of the growth medium for cell-cultivated meat. However, ethical, cost, and scientific issues, necesitates identification of alternatives. In this study, we investigated commercially manufactured serum-free media capable of culturing Hanwoo satellite cells (HWSCs) to identify constituent proliferation enhancing factors. Six different serum-free media were selected, and the HWSC proliferation rates in these serum-free media were compared with that of control medium supplemented with 20% FBS. Among the six media, cell proliferation rates were higher only in StemFlex^TM Medium (SF) and Mesenchymal Stem Cell Growth Medium DXF (MS) than in the control medium. SF and MS contain high fibroblast growth factor 2 (FGF2) concentrations, and we found upregulated FGF2 protein expression in cells cultured in SF or MS. Activation of the fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR1)-mediated signaling pathway and stimulation of muscle satellite cell proliferation-related factors were confirmed by the presence of related biomarkers (FGFR1, FRS2, Raf1, ERK, p38, Pax7, and MyoD) as indicated by quantitative polymerase chain reaction, western blotting, and immunocytochemistry. Moreover, PD173074, an FGFR1 inhibitor suppressed cell proliferation in SF and MS and downregulated related biomarkers (FGFR1, FRS2, Raf1, and ERK). The promotion of cell proliferation in SF and MS was therefore attributed to FGF2, which indicates that FGFR1 activation in muscle satellite cells may be a target for improving the efficiency of cell-cultivated meat production.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권6호
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• pp.1299-1303
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• 2005

Human articular chondrocytes (HAC) were cultivated as a monolayer in a serum-free medium for primary culture (SFM-P). An optimized SFM-P provides $95\%$ proliferation rate of that obtainable from primary and secondary chondrocyte cultures grown in a control medium with serum. The gradual decrease in the amounts of synthesized glycosaminoglycan and type II collagen was improved by coating the culture dishes with type IV collagen and fibronectin. A significant improvement in the expression of type II collagen and aggrecan mRNA could be achieved. In addition, the monolayer cultures showed better synthesis of the extracellular matrices than alginate-bead cultures in SFM-P.