We have got several clones from Serratia marcescens which stimulated the cells to use maltose as a carbon source in Escherichia. coli TP2139 ( lac, crp). One of the cloned genes, pCKB17, was further analyzed. In order to find whether the increased expression of the gent was under the direction of maltose metabolism, we constructed several recombinant subclones. We have found that the clone, pCKB17AV, codes maltose metabolism stimulation(mms) gene. E. coli transformed with the cloned gene showed increase in the activity of maltose utilzation, The recombinant proteins expressed by multicopy and induction with IPTG, one polypeptide of 29-kDa, was confirmed by SDS-PAGE. The overexpression of maltose-binding proter protein in the presence of mms gene was confirmed by Western blot analysis. Southern hybridization analysis confirmed that the cloned DNA fragment was originated from S. marcescens chromosomal DNA.
Three chitinase genes (chiA, chiB, and chiC) were cloned into E. coli by PCR amplification from Serratia marcescens KFRI314. The sizes of cloned chitinase genes were 1692 bp, 1500 bp, and 1443 bp which correspond to 563, 499, and 480 amino acids, respectively. Recombinant chitinases were overexpressed using pHCEIA expression vector and purified to homogenity. The molecular weights of chitinases were about 60kDa, 50 kDa, 52 kDa, respectively. Optimum pHs were around pH 5~6 and optimum temperatures were $45{\sim}50^{\circ}C$ while 90% of enzyme activities were stable up to $50^{\circ}C$. The specific activities of ChiA, ChiB, and ChiC were 233.1, 278.8, $111.3{\mu}mol\;(min)^{-1}\;mg^{-1}$ against colloidal chitin. From experiments using TLC and fluorescent substrate analogues, it was demonstrated that ChiA was endo-chitinase while ChiB and ChiC were chitobiosidase.
The chitinase-producing bacterial strain C-1 is one of the key chitinase-producing biocontrol agents used for effective bioformulations for biological control. These bioformulations are mixed cultures of various chitinolytic bacteria. However, the precise identification, biocontrol activity, and the underlying mechanisms of the strain C-1 have not been investigated so far. Therefore, we evaluated in planta biocontrol efficacies of C-1 and determined the draft genome sequence of the strain in this study. The bacterial C-1 strain was identified as a novel Serratia sp. by a phylogenic analysis of its 16S rRNA sequence. The Serratia sp. C-1 bacterial cultures showed strong in planta biocontrol efficacies against some major phytopathogenic fungal diseases. The draft genome sequence of Serratia sp. C-1 indicated that the C-1 strain is a novel strain harboring a subset of genes that may be involved in its biocontrol activities.
Optimal media and cultural conditions for the production of prodigiosin-like pigment were established using Serratia sp. KH-95. Glucose and phosphate(K2PO4) stimulated the cell growth, but inhibited the production of pigment at concentration levels of above 10 g/L and 2.0 g/L, respectively. Addition of soy been oil or rice oil to the production medium accelerated cell growth up to more than 2-3 times, but the production of prodigiosin increased about 15-20% in spite of the good cell growth. The effect of pH on the production of pigment was investigated in a 5 liter-bioreactor. When the pH of culture broth was maintained below 8.0, most of pigment was attached to the surface of cells. When the pH of culture broth was above 8.5, however, about 70% of total pigment was suspended in the supernatant of the broth. The cell growth and production of pigment were inhibited at dissolved oxygen concentration of below 10% of air-saturation.
In order to study on the pigment and protease of Serratia marcescens, the correlation between protease activity and pigment formation was investigated. The results are as follows ; 1) The protease activity exhibitied two pH optima 6.0 and 7.5, respectively. 2) The optimal temeprature of proteolytic activity was 45.deg.C. With these-results, it is suggested that the proteolytic enzymes of Serratia masrecescens is stable at neutral pH range and more active at the high temeprature than lthat of otehr proteolytic enzymes.
This study aimed to identify and characterize the antimicrobial activity of prodigiosin produced by Serratia sp. $PDGS^{120915}$ isolated from stream water in Busan, Korea; the identification was performed using phonological, biochemical, and molecular techniques, including 16S rRNA sequence analysis. Prodigiosin from the bacterial culture was purified by high-performance liquid chromatography (HPLC), and its antimicrobial activity and minimum inhibitory concentrations (MICs) were evaluated against 10 intestinal pathogenic gram-positive and negative bacteria. The results revealed that the isolated prodigiosin exhibited high antimicrobial activity against Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, and Vibrio parahaemolyticus; further, the isolated prodigiosin showed minimum inhibitory concentrations (MICs) between $3{\mu}g/ml$ and 30 mg/ml, but they were not active against Bacillus subtilis, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumonia, and Escherichia coli. In conclusion, prodigiosin isolated from Serratia sp. $PDGS^{120915}$ showed high antimicrobial activity against intestinal pathogenic bacteria and has potential applications in the development of new antimicrobial agents.
The Journal of the Korean Society for Microbiology
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v.20
no.1
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pp.45-53
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1985
This study was undertaken to assess the susceptibility of pigmented and nonpigmented strains of Serratia marcescens to antibiotics and human sera, and the effect of culture filtrates from pigmented and nonpigmented of Serratia marcescens on humoral and cellular immune responses in mice to thymus-dependent and indepependent antigens. Humoral immune response was measured by hemagglutinin (HA) and hemolysin (HE) to sheep red blood cell (SRBC), and Arthus or antibody response to polyvinylpyrrolidone (PVP). The cellular immune response was measured by delayed-type hypersensitivity (DTH) determined by footpad swelling reactin to SRBC. The resistance of pigmented strains of Serratia marcescens to the bactericidal action of heat inactivated human serum was insignificantly greater than that of nonpigmented strains. However, the pigmented strains were significantly more resistant to the bactericidal action of heat-untreated human serum than that of nonpigmented strains. The clinical isolates of Serratia marcestens was also tested for their resistance to several antibiotics. There was no difference between the pigmented and non-pigmented strains in the resistance to carbenicillin. However, nonpigmented strains were more resistant to gentamicin, kanamycin and tobramycin than the pigmented strains. The intraperitoneal administration of culture filtrates from the pigmented or nonpigmented strains into mice caused enhancemented of antibody response to SRBC or PVP, and of DTH to SRBC. Besides, their enhancement of immune responses was more prominent when culture filtrate from the pigmented strains was administered.
Journal of the Korean Applied Science and Technology
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v.33
no.3
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pp.599-605
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2016
Serratia marcescens, a Gram-negative bacterium characterized by production of a nondiffusible red pigment. Serratia marcescens 2354 (ATCC 25419) was production and purification a high concentration of red pigments when growing on Cang's soytone (CS) culture broth with soytone and ethanol. The optimal temperature and intial pH range for the production of the red pigments were $28^{\circ}C$ and pH 7.5, respectively. The red pigments was separated and purified through organic solvents extraction. Characterization of the red pigments is studied by UV-spectrophotometer at ${\lambda}_{max}$ 537 nm. The HPLC-Mass analysis of the partially purified compounds showed two major peaks with the molecular masses of 537 and 565 g. The red pigments were stable at room temperature under the acidic pH (up to pH 6) but were unstable at the strong alkaline condition. And red pigments were stable at sun light.
A bacterial strain KH-95 producing a high concentration of red pigment was isolated from the soil. The strain KH-95 was identified as a strain of Serratia sp. based on morphological and physiological characteristics. The optimal temperature and initial pH range for the production of pigment were 28$^{\circ}C$ and 7.0-8.0, respectively. The red pigment was purified through solvent extraction and silica gel column chromatography. Analyzing the structure of this pigment by instrumental analysis, it was identified as prodigiosin-like compound. In optimization of carbon and nitrogen sources, all carbon sources tested in this work inhibited the production of pigment except oils. Casein fumed out to be the most suitable nitrogen source for pigment production. Other nitrogen sources such as yeast extract, beef extract and peptone showed good cell growth but potently inhibited the production of pigment.
Kim, Yong-Gyun;Kim, Keun-Seob;Seo, Ji-Ae;Shrestha, Sony;Kim, Hosanna-H.;Nalini, Madanagopal;Yi, Young-Keun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.19
no.3
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pp.314-322
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2009
Four different bacterial colonies were isolated from an old stock of an entomopathogenic nematode, Steinernema monticolum. They all showed entomopathogenicity to final instar larvae of beet armyworm, Spodoptera exigua, by hemocoelic injection. However, they varied in colony form, susceptibility to antibiotics, and postmortem change of the infected host insects. Biolog microbial identification and 16S rDNA sequence analyses indicate that these are four different species classified into different bacterial genera. Owing to high entomopathogenicity and a cadaver color of infected insect host, Serratia sp. was selected as a main symbiotic bacterial species and analyzed for its pathogenicity. Although no virulence of Serratia sp. was detected at oral administration, the bacteria gave significant synergistic pathogenicity to fifth instar S. exigua when it was treated along with a spore-forming entomopathogenic bacterium, Bacillus thuringiensis. The synergistic effect was explained by an immunosuppressive effect of Serratia sp. by its high cytotoxic effect on hemocytes of S. exigua, because Serratia sp. caused septicemia of S. exigua when the bacterial cells were injected into S. exigua hemocoel. The cytotoxic factor(s) was present in the culture medium because the sterilized culture broth possessed high potency in the cytotoxicity, which was specific to granular cells and plasmatocytes, two main immune-associated hemocytes in insects.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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