• Journal of Oral Medicine and Pain
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• 제25권1호
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• pp.29-39
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• 2000

소(牛) 태아 대동맥으로 부터 Urea 추출, Sephacryl S200 HR 크로마토그라피, Cibacron blue-agarose 친화 크로마토그라피, 그리고 Sephacryl S300 HR 크로마토그라피를 이용하여 lysyl oxidase를 순수분리를 하였고 분리가간 중 항상 단백분해 억제제를 첨가하였다. 순수 분리된 효소는 가교결합이 없는 교원단백질과 엘라스틴에 활성을 보였고, BAPN 같은 아미노나이트릴에 의하여 억제되였다. Sephacryl S300 HR 크로마토그라피로 분리 될 경우, 이 효소는 0.45의 $K_{av}$ ($V_t$의 65%)값을 보였고, 이온교환 고속액체 크로마토그라피의 경우에서는 이온 강도가 0.1-0.15 사이에서 하나의 피크로 용리되었다. 순수 분리된 이 효소는 SDS 폴리아크릴아마이드 전기영동에서는 하나의 밴드로 이동하였는데, 환원이 될 경우에는 분자량이 33,500, 비환원이 될 경우에는 분자량이 24,500의 위치로 이동하였다. 이온교환 고속액체 크로마토그라피의 결과를 참조하여, 다른 보고서와는 달리 소(牛) 태아(服兒) 대동맥(大動服)에는 여러 종류가 아닌 한 종류의 lysyl oxidase가 존재한다고 결론을 내렸다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권5호
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• pp.306-311
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• 1987

황산암모늄 분획, 2차례의 DEAE-Cellulose, DEAE-Sephadex A-50 및 Sephacryl S-200 superfine gel filtration으로 정제한 결과 Streptomyces sp. J-350P의 세포외 adenine deaminase는 0.3%의 수율로서 1764배로 정제되었다. Streptomyces sp. J-350P의 세포외 adenine deaminase는 pH6.5~8.5 사이에서 안정하였고, pH7.0에서 10분간 열처리하였을 때 5$0^{\circ}C$까지는 안정하였다. 효소 활성 최적 pH와 온도는 pH6.5와 35$^{\circ}C$ 였다. Sephacryl S-200 superfine gel filtration 의한 분자량의 측정 결과 본 효소의 분자량은 약 36,000이었다.

• 미생물학회지
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• 제36권1호
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• pp.20-25
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• 2000

Trichoderma sp. C-4의 배양액으로부터 한 종류의 endoglucanase(F-II-II)를 Sephacryl S-200 및 Sephacryl S-100 chromatography를 통하여 분리하였다. 분리된 효소는 SDS-PAGE및 isoelectric focusing을 통하여 단일 band로 나타났으며, 분자량이 26,000, 등전점이 8.0으로 나타났다. 이 효소의 반응 최적온도와 최적 pH는 각각 $50^{\circ}C$, 5.0 이었으며, $50^{\circ}C$에서 24시간 동안 안정하였다. 분리된 효소의 carboxymethylcellulose에 대한 specific activity는 776.2 U/mg protein으로 나타났다. 이 효소의 아미노산 조성을 조사하였다. 효소를 trypsin으로 가수분해한 후 분해산물에 대한 단백질서열 분석을 행하였다. 그 결과 이 효소의 서열은 현재까지 밝혀진 다른 단백질과 homology를 갖지 않음이 확인되었다. 이 효소는 그 specific activity가 대단히 높고 아직 보고되지 않은 novel protein일 가능성이 대단히 높기 때문에 좋은 유전자 자원이 될 것으로 사료되었다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제15권1호
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• pp.34-37
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• 1999

Cymbidium mosaic virus (CyMV) was purified from CyMV infected orchid plant leaves by Sephacryl S-500 HR column chromatography. Partial purification was done by solubilization with Triton X-100 (alkylphenoxypolyethoxy ethanol) and precipitation with polyethylene glycol (PEG 6,000) followed by ultracentrifugation on 30% sucrose cushion. Based on the spectrophotometric analysis, 33 mg of CyMV could be obtained form 100 g of CyMV-infected orchid plant leaves. The purified CyMV represented one distinct homogeneous band by SDS-PAGE, and electron microscopy revealed that it was highly homogeneous and not fragmented. Bioassay demonstrated that the purified CyMV had a normal infectivity to Chenopodium amaranticolor and orchid plants. Based on these results, the purification method in this work could be served as an improved method for the purification of CyMV and similar viruses with good yield, high purity and native integrity.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제14권3호
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• pp.233-237
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• 1999

Lactobacillus sp. GM7311을 MRS broth에 배양하여 배양 상등액으로부터 n-propanol/acetone처리 , ion-exchange chromatography, gel filtration 및 SDS-PAGE를 이용해 박테이로신을 부분 정제하였다. 정제 과정 중 가장 큰 문제점은 n-propanol 과 acetone등의 유기용매 처리 단계에서의 급격한 활성 감소로서 회수율은 48.0%를 나타내었다. 거러나 이후 CM-cllulose를 통한 ion-exchange chromatography와 Sephacryl HR-100에 의한 gel filtration 과정을 거치면서 활성이 크게 증가하여, 비활성 뿐만 아니라 정제도에서도 493배의 증가를 얻을 수 있었으며 최종 회수율은 8.3%였다. SDS-PAGE로 정제도를 확인했을 때 분자량 약 8,200과 2,500의 2개의 band를 관찰할 수 있었으며, 2개의 band를 각각 나누어 활성을 측정한 결과 두 부분 모두 활성이 있는 것으로 나타나 Lactobacillus sp. GM7311이 2가지 성분의 박테리오신을 생산하는 것으로 추정할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제6권6호
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• pp.402-406
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• 1996

Inulin fructotransferase (depolymerizing) (EC 2.4.1.93) was purified 34-fold from the culture broth of Arthrobacter sp. A-6 by using a combination of ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sepharose CL-6B chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The purified enzyme converts inulin into di-D-fructofuranose dianhydride III(DFA III) and small quantities of fructo-oligosaccharides. The temperature and pH optima of the enzyme were $70^{\circ}C$ and 6.0, respectively. Molecular weight of the enzyme was determined to be 49 kDa by 12$%$ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and 145 kDa by Sephacryl S-200gel filtration. This indicates that the functional inulin fructotransferase of Arthrobacter sp. A-6 has a homomeric trimer structure. The enzyme had an isoelectric point of pH 4.6. The N-terminal amino acid sequence of the purified enzyme subunit was Ala-Asp-Asn-Pro-Asp-Gly(\ulcorner)-Ser-Asn-Met(or Glu)-Tyr-Asp-Val.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제4권1호
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• pp.39-44
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• 2002

The fast-migrating cationic peroxidase isozyme, named RC3, was purified from rice (Oryza sativa cv. Nak-Dong) callus. Purification of the enzyme was accomplished by ammonium sulfate fractionation, CM-cellulose ionexchange chromatography, and Sephacryl S-100 gel filtration. The molecular mass of the enzyme was about 34 KDa as determined by SDS-PACE and 38 KDa by Sephacryl-100 gel filtration. The pI value of the enzyme was 8.9. Antiserum against RC3 was raised in rabbits, and anti RC3 antiserum reacted with RC3 isozyme by Ouchterlony double immunodiffusion. The optimum pHs and Km values of the enzyme for various substrates were determined. Kinetic studies with various substrates showed that RC3 had very low Km value of 0.01 mM for ferulic acid and ascorbic acid. However, the enzyme did not use esculetin as a substrate.

• 미생물학회지
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• 제32권4호
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• pp.297-300
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• 1994

토양에서 분리한 방선균에서 제한효소 활성을 조사하여 그 가운데 Streptomyces diastatochromogenes로부터 제한효소 활성을 확인하였다. 이 균주의 제한효소 SdiI을 균체 15g으로부터 streptomycin sulfate침전, ammonium sulfate 침전, hydroxylapatite colume chromatography, Sephacryl S-200 HR column chromatography, hydroxylapatite column chromatography의 단계를 거쳐 분리하였고, SDS-polyacrylamide gel-electrophoresis에 의하면 소단위체 분자량은 약 35,000Da으로 추정되었다.

• 약학회지
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• 제38권5호
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• pp.608-613
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• 1994

We isolated two Cd-binding high molecular weight proteins from intraperitoneally cadmium injected rat liver. Molecular weight of Cd-BP(I) purified from Sephacryl S-100 and DEAE Sepharose column chromatography and Cd-BP(II) purified from DEAE Sepharose column chromatography and Sulphonyl Sepharose column chromatography was 33,000 and 18,400, respectively. Alcohol dehydrogenase and alkaline phosphatase acitivities were not detected from two purified proteins.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권4호
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• pp.320-326
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• 1988

Aspergillus sp.로부터 추출한 glucoamylase를 Sephacryl S-200과 DEAE-Sephacel 이온교환 칼럼을 통과시킨 후, 2개의 Isozyme으로 분리하였다. 분리된 glucoamylase isozyme(GI, GII)의 효소학적특성을 각각 조사하였다. GI 및 GII isozyme의 활성최적 pH 및 온도는 pH4.5 및 $65^{\circ}C$였다. 분리된 효소는 pH 3-7 사이에서 안정했으며, 또한 55$^{\circ}C$ 이하에서 안정하였다. Hg$^{++}$는 효소 황성을 완전히 저해하였으나, 글리세롤은 효소의 안정성을 크게 증가시켰다. 효소반응의 활성화에너지는 GI의 경우 10,62 kcal/mole이었으며, GII의 경우에는 10.23kcal/mole이었다. GI isozyme의 기질에 대한 Km값은, 0.62% (soluble starch), 0.32% (dextrin), 1.03%(glycogen)이었으며, GII isozyme의 경우에는, 0.66%(soluble starch) 0.23%(dextrin), 그리고 0.14% (glycogen)이었다.