Objective: This study investigated the efficacy of different concentrations of gelatin supplementation in long-term semen extender on boar semen quality during storage for 10 days at 17℃. Additionally, oxytocin was added to stored semen to enhance fertility. Methods: In Experiment 1, boar semen was collected, diluted with gelatin at concentrations between 0% and 2.5% (w/v) and mixed with a semen extender. Then, it was kept in a refrigerator at 17℃ and stored for 10 days. In Experiment 2, the sperm quality was examined after adding 0, 5, and 10 IU oxytocin per artificial insemination dose to the most effective semen extender from Experiment 1 and placing it in a refrigerator at 17℃ for 10 days. In Experiment 3, the fertility potential in terms of non-return rate and litter size was determined using the most effective solid-stored semen supplemented with oxytocin. Results: The results indicated that sperm quality decreased with increasing storage time (p<0.05). The sperm quality in terms of total motility, progressive motility, and viable sperm with intact acrosomes and high mitochondrial potential was the highest with 1.5% gelatin supplementation (p<0.001) on all days of storage. Treatment with oxytocin did not affect sperm quality (p>0.05). The non-return rate and litter size after insemination with semen supplemented with 1.5% gelatin and 10 IU of oxytocin after 8 to 10 days of storage were comparable to those of the control group (p>0.05). Conclusion: A semen extender as a solid medium supplemented with 1.5% gelatin successfully preserved boar semen for a long storage duration. Treatment with oxytocin did not affect sperm quality. In addition, the fertility capacity using 1.5% gelatin with 10 IU oxytocin and stored for 8 to 10 days was acceptable and comparable to that of short-term storage.
돼지 정액을 저장하는 동안 산화스트레스의 발생은 정자의 질과 생존에 영향을 미치는 중요한 인자이다. 정액의 저장은 온도 변화, 동결보호제 등의 다양한 스트레스 인자에 노출되어 있다. 이러한 정자 내에서의 산화스트레스는 활성산소종의 생성에 의해 발생되며, 이는 지질, 단백질, DNA와 같은 세포를 구성하는 물질에 산화적으로 손상을 일으킨다. 활성산소종과 항산화물질의 균형있는 체계는 정자의 생존과 그 기능을 유지하는 데 중요한 역할을 한다. 정액을 장기간 보존하게 되면 활성산소종의 수준이 증가하여 정자의 운동성, 막 온전성, DNA 온전성에 영향을 미치게 된다. 또한, 활성산소종에 의해 유도된 지질과산화 반응은 정자막의 유동성과 안정성에 영향을 미쳐 정자의 운동성을 감소시킨다. 그리고, DNA의 산화적 손상은 DNA 단편화를 일으켜 정자의 DNA 온전성을 손상시킬 수 있다. 결론적으로, 정액을 보관하는 동안 발생되는 산화스트레스는 정자의 질과 기능을 유지하는 데 중요하다. 따라서, 산화스트레스의 기본적인 메커니즘과 정자의 기능에 미치는 영향을 이해하는 것은 산화스트레스로부터의 손상을 최소화하고, 효율적이고 기능적인 정자의 저장 방법을 개선하기 위한 효과적인 전략과 연구 개발을 위해 중요할 것으로 판단된다.
This study was carried out to investigate the characteristics of semen and egg storage period on hatchability of Korean native chicken(KNC, 44-wk old). The body weight, volume of semen, concentration of spermatozoa, total sperm of an ejaculate, motility of sperm and percentage of fertile eggs were 2,555.89g, 0.473$m\ell$, 30.81${\times}$10(sup)8/$m\ell$, 13.14${\times}$10(sup)8 cells, 3.58 and 91.69%, respectively, in KNC. The percentage of fertile eggs were 87.9∼96.0% on storage period in KNC. The viability and hatchability were 80.2%. 74.6%, respectively, in storage period for 22 days in storage temperature of 11∼14$^{\circ}C$. The results of the trial show that viability can be get more than 80% in storage period for 3 weeks in storage temperature of about 13$^{\circ}C$.
Mohamadou Adamou;Dongmo Nguedia Arius Baulland;Ngo Bahebeck Pierrette;Tchoffo Herve;Chongsi Margaret Mary Momo;Noudjio Kezeter Claude;Nnanga, Germaine Estelle Mvondo;Ngwemetah Nathalie;Adamu Yusufa Njeiri;Ngoula Ferdinand
한국동물생명공학회지
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제39권3호
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pp.179-193
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2024
Background: Because oxidative stress can induce decreased quality of caprine semen during the storage, there has been limitation for the use of stored semen in the assisted reproductive technologies. The present study, therefore, assesses the potential of Annona muricata (A. muricata) to reduce semen storage associated-damages. Methods: Semen was collected by electro-ejaculation from ten bucks, and extended with Tris-egg yolk (TEY) supplemented with A. muricata leaf aqueous extract (SAE) at 20 (SAE20), 40 (SAE40), and 80 (SAE80) ㎍/mL. Sperm variables including motility, motion characteristics, viability, membrane functionality, and DNA integrity were assessed at different storage periods (6, 24, 48, and 72 hr). In addition, oxidative stress indicators in the extender supplemted with SAE were also assessed for each group. Results: By adding SAE at 80 ㎍/mL in TEY, the storage of goat buck semen was improved, resulting in reduced loss of sperm motility, viability, DNA fragmentation, and membrane integrity during chilled storage at 4℃ for up to 72 hr. In addition, enrichment of TEY extender with SAE significantly (p < 0.05) reduced malondialdehyde, an indicator of oxidative stress, compared to the negative control. Conclusions: Supplementation of SAE in TEY extender can reduce buck spermatozoa liquid storage associated damages due to oxidative stress.
The effect of adding transparent fluid (TF) to fowl semen on fertilizing capacity of fowl spermatozoa and on hatchability was studied. Diluted semen and semen containing 15% TF were stored for 24 h at $3-5^{\circ}C$ and inseminated at weekly basis for 5 consecutive weeks. No significant differences were observed in fertility, hatchability and embryonic mortality among the treatments. The results suggest that TF is not necessarily detrimental to fowl spermatozoa even when mixed with semen and stored outside the body.
The aim of this study was to investigate the effect of sperm preservation according to the various kinds of commercially available semen extenders and to investigate the effect of sperm preservation according to the various temperature storages of fresh-extended porcine semen. To investigate the effect of sperm preservation according to the various kinds of commercially available semen extenders, porcine semens diluted in 3 semen extenders, Beltsville Thawing Solution(BTS), Androhep and Kiev, were cooled at $8^{\circ}C$ storage temperature with a controlled cooling rate of $2-4^{\circ}C$/h. Motility, progressive motility, normal sperm(%) and sperm morphology were assessed comparatively. In motility and progressive motility, Androhep extenders revealed better result than other extenders. In normal sperm(%) and sperm morphology, 3 semen extenders revealed similar results. To investigate the effect of sperm preservation according to the various temperature storages of fresh-extended porcine semen, porcine semens diluted in BTS extender, were cooled at 3 storage temperatures($8^{\circ}C$, $12^{\circ}C$ and $17^{\circ}C$) with a controlled cooling rate of $2-4^{\circ}C$/h. Motility, progressive motility, normal sperm(%) and sperm morphology were assessed comparatively. In motility and progressive motility, $8^{\circ}C$ treatment group revealed better result than $12^{\circ}C$ and $17^{\circ}C$ treatment groups. In normal sperm(%) and sperm morphology, 3 temperatures of treatment groups revealed similar results.
In this study the effect of extenders and temperatures on sperm viability and fertilizing capacity of boar sperm during long-term storage was investigated. Acrosomal integrity, membrane integrity, motility and hypo-osmotic resistance were evaluated by fluorescence and light microscopy. An in vitro fertilization test was performed to assess the fertilizing capacity of stored spermatozoa. The five diluents tested were ranked according to their ability to maintain sperm functional parameters and Zorlesco (ZO) extender with BSA or with PVA instead of BSA produced the best results. Zorlesco extender substituted with PVA (ZO+PVA) was found to maintain motility both at 15 and 20$^{\circ}C$. within 5 days of storage, but the quality of semen stored at 15$^{\circ}C$ decreased thereafter as compared to semen stored at 20$^{\circ}C$ Semen stored at 5$^{\circ}C$ demonstrated rapid loss of motility already within 24 h. Both fertilization and cleavage of semen stored at 20$^{\circ}C$ in ZO substituted with PVA instead of BSA did not change significantly until day 8 of storage. It is therefore concluded that PVA can be used to substitute for BSA and 20$^{\circ}C$ was more suitable than 15$^{\circ}C$ for boar semen storage, and in vitro fertilizing capacity of spermatozoa was maintained for at least 8 days in ZO+PVA at 20$^{\circ}C$.
The purpose of this study was to assess sperm quality during in vitro storage of miniature-pig semen in order to determine which extender should be used and how extender can be diluted for in vitro storage of miniature-pig semen. Freshly ejaculated miniature-pig's semen was diluted with same volumes of Beltsville Thawing Solution (BTS), Androhep, Modena, Mulberry III and modified-Modena extenders. Sperm quality was evaluated by examining viability, motility, abnormality, acrosome intactness, intensity and capacitation status by chlorotetracycline (CTC) staining. Sperm motility decreased with storage period prolonged and differences among BTS, Androhep, Modena and Mulberry III were apparent On Day 1, approximately 80% of the sperm were motile, but motility decreased to $40\%$ at Day 7. During the 7 days of storage, sperm survival in modified-Modena B extender was higher than another extenders. However, it was not differ significantly among other extenders. The percentage of F and B patterns were not differ significantly among the extenders. However, F pattern in modified-Modena B extender was slightly higher until 3 days of storage than that of Modena extender, modified-Modena A extender and modified-Modena C extender. The percentage of AR patterns in modified-Modena B extender was slightly lower, but did not differ significantly among other extenders. The results of present study suggest that modified-Modena B was effective as new extender for in vitro storage of miniature-pig semen.
The objective of this study was to investigate the effect of storage time on fresh boar semen in Androhep and Beltsville Thawing Solution (BTS). Boar semen samples extended in each extender were stored at $17^{\circ}C$ up to 4 days. Sperm motility kinematics was evaluated by computer assisted sperm analyzer (CASA) and capacitation status by chlortetracycline (CTC)/Hoechst 33258 staining. Sperm motility (%) was not decreased during storage in BTS and Androhep. No significant difference between extenders was observed. Only significant differences in kinematic parameters on linearity during storage were found. The percentage of dead sperm significantly decreased during storage (p<0.05). Also the percentage of noncapacitated, capacitated, and acrosome-reacted sperm significantly modified during storage (p<0.05). However, there was no significant difference between extenders except proportion of capacitated sperm. This finding supported that modification in these parameters was not significantly different between extenders during this short-term storage. Our finding strongly indicated that both Androhep and BIS maintained favorable conditions for motility, motility kinematics, and capacitation status during short-term storage. Despite modifications in some parameters were apparent during sperm storage in extenders, these may not affect the fertilizing capacity of boar semen.
The present work describes experiments undertaken to evaluate the usefulness of selected physicochemical indices of semen, cell membrane integrity and sperm chromatin structure for the assessment of boar semen sensitivity to processes connected with pre-insemination procedures. The experiments were carried out on 30 boars: including 15 regarded as providers of sensitive semen and 15 regarded as providers of semen that is little sensitive to laboratory processing. The selection of boars for both groups was based on sperm morphology analyses, assuming secondary morphological change incidence in spermatozoa as the criterion. Two ejaculates were manually collected from each boar at an interval of 3 to 4 months. The following analyses were carried out for each ejaculate: sperm motility assessment, sperm pH measurement, sperm morphology assessment, sperm chromatin structure evaluation and cell membrane integrity assessment. The analyses were performed three times. Semen storage did not cause an increase in the incidence of secondary morphological changes in the group of boars considered to provide sperm of low sensitivity. On the other hand, with continued storage there was a marked increase in the incidence of spermatozoa with secondary morphological changes in the group of boars regarded as producing more sensitive semen. Ejaculates of group I boars evaluated directly after collection had an approximately 6% smaller share of spermatozoa with undamaged cell membranes than the ejaculates of boars in group II ($p{\leq}0.05$). In the process of time the percentage of spermatozoa with undamaged cell membranes decreased. The sperm of group I boars was characterised with a lower sperm motility than the semen of group II boars. After 1 hour of storing diluted semen, the sperm motility of boars producing highly sensitive semen was already 4% lower ($p{\leq}0.05$), and after 24 hours of storage it was 6.33% lower than that of the boars that produced semen with a low sensitivity. Factors that confirm the accuracy of insemination male selection can include a low rate of sperm motility decrease during the storage of diluted semen, low and contained incidence of secondary morphological changes in spermatozoa during semen storage and a high frequency of spermatozoa with undamaged cell membranes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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