These experiments were performed to investigate the safety of two herbs-Houttuynia cordata Thunberg and Lycium chinese Miller-irradiated with gamma-rays in respect of genotoxicity. Water extracts from the 10 kGy gamma-irradiated herbs were examined in two short -term in vitro tests ; (1) Salmonella typhimurium reversion assay (Ames test) in strain TA 98 and Ta100 and (2) Micronuclues test on clutured Chinese hamster ovary(CHO) cells. No mutagenicity was detected in the two assays with or without metabolic activation . From these results , the safety of the herbs irradiated with gamma-rays at practical doses could be revealed in further tests of genotoxicity in vivo, chronic and reproductive toxicity.
Water extract of Cordyceps militaris grown upon Protuetja dreujtarsis (CMPD) was examined for the genetic toxicity-bacterial mutagenicity, chromosome aberration, and micronucleus formation. For mutagenicity assay, bacterial reversion test with Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA 1537, and E. coli WP2uvrA were performed. The extract at the concentrations of $50{\sim}5,000{\mu}g/plate$ did not induce mutagenicity at all. Chromosome aberration test was performed by using Chinese lung (CHL) cells. There was no significant chromosome aberration in CHL cells with S-9 mixture at the concentrations of $312.5{\sim}1,250{\mu}g/ml$ of the extract and without S-9 mixture at the concentrations of $1.2{\sim}19.5{\mu}g/ml$ of the extract. For micronucleus test, ICR mice were treated with the extract at the dose of 0.5, 1, and 2g/Kg. The frequencies of the micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) in bone marrow preparations of the extract-treated group were not increased compared to the untreated control group. Taken together, our results show that water extract of CMPD did not induce any harmful genotoxicity.
본 연구에서는 백미의 돌연변이 억제 활성 물질의 분포 및 정제를 위한 기초자료를마련하고, 세포외 작용기작의 하나인 항산화활성과의 상관성을 살펴보기 위해 일품벼를 도정분획별로 분획한 다음 돌연변이 억제활성 및 항산화 활성을 조사하였다. Salmonella typhimurium reversion assay를 이용하여 Trp-P-2로 유도된 변이원성에 대해 도정분획별 돌연변이 억제활성을 살펴본 결과, 미강에서는 외층으로 갈수록. 백비에서는 내층으로 갈수록 더 강한 돌연변이 억제 활성을 보였다. 과산화물가(POV) 측정에 의한 항산화 활성은 배아와 미강 부분이 백미보다 더 활성이 강한 것으로, TBA치로 측정한 항산화 활성은 백미의 경우 $6{\sim}20%$로 낮았으며 배아, 미강, 배유는 거의 활성이 없었다. 전자공여능(EDA) 측정으로 살펴본 항산화 활성은 배아(45%), 미강$(35{\sim}40%)$보다는 백미$(41{\sim}65%)$에서, 도정 율이 낮을수록 더 강한 활성을 나타내었다. 돌연변이 억제활성은 전자공여작용과는 양의 상관성(r=0.609)을 과산화물가와는 음의 상관성(r=-0.471)을 나타내었고 TBA치 측정에 의한 항산화 활성과는 유의적인 상관성이 없었다. 도정분획별 페놀산 및 SH함량은 미강 및 배아가 백미에 비해 높았고, 백미에서는 내층으로 갈수록 함량이 낮아 돌연변이 억제활성과 음의 상관성을 보였다.
본 연구에서는 방사선 조사 오렌지의 수입 가능성이 높아짐에 따라 이들의 안전성을 검토할 목적으로 0.5, 1 kGy 감마선 조사 수입 오렌지의 복귀돌연변이 시험, 소핵 및 염색체 이상시험의 유전독성학적 안전성 평가를 수행하였다. S. Typhimurium TA98, TA100, TA1535 및 TA1537에 대한 감마선 조사 수입 오렌지(0.5, 1 kGy)의 복귀변이 집락수를 조사한 결과, 대사활성계 도입 및 부재 시 0.625~10 mg/plate의 범위에서 복귀변이 집락수의 농도 의존적인 증가 혹은 감소를 보이지 않았다. 포유류 배양세포를 이용한 염색체이상시험에서 0.5, 1 kGy 감마선 조사 수입 오렌지는 1.25~10 mg/mL의 시험적용 용량에서 염색체이상 유발능이 5% 미만이어서 염색체이상을 유발하지 않는 것으로 나타났다. 설치류 망상적혈구를 이용한 소핵형성 시험을 수행한 결과, 시험적용 용량인 250~2,000 mg/kg의 범위에서 0.5, 1 kGy 감마선 조사 수입 오렌지는 소핵을 가진 망상적혈구의 출현율이 음성대조군과 유의한 차이를 나타내지 않아 소핵을 유발하지 않음을 확인하였다. 이상의 결과, 0.5, 1 kGy 감마선 조사 수입 오렌지는 본 시험조건에서 유전독성이 없는 것으로 나타났다.
과메기의 위생화를 위한 방사선 조사기술의 이용 가능성을 검토할 목적으로 방사선 조사를 실시한 후 독성학적 안전성 실험인 in vitro Ames test SOS chromotest 및 CHL 세포를 이용한 염색체 이상시험과 ICR 수컷 마우스를 이용한 in vivo 소핵세포실험을 실시하였다. 감마선 조사 및 비조사된 과메기의 Salmonella typhimurium(TA98, TA100, TA1535, TA1537)과 Escherichia coli WP2 uvrA 균주에 대한 복귀변이 집락수 시험, SOS chromotest(Escherichia coli PQ37) 시험 및 CHL 세포를 이용한 염색체 이상시험을 수행한 결과 물추출물과 용매추출물 및 대사활성계 도입 혹은 부재시 모두, 모든 시험균주에서 시험적용 농도인 10,000 $\mu\textrm{g}$/plate까지의 농도에서 감마선 조사된 시료는 비조사된 시료와 같이 음성을 나타내었다. 또, 감마선 조사 및 비조사된 과메기의 in vivo 소핵세포실험에서도 소핵이 발견되지 않았다. 따라서, 10 kGy까지 고선량 감마선 조사된 과메기는 위 수행된 in vitro 및 in vivo 유전독성시험을 실시한 결과 음성을 나타낸 것으로 보아 유전독성학적으로 돌연변이원성이 없음을 확인할 수 있었다.
식이 섬유소의 항암효과기전을 설명하기 위한 연구의 일부로 불용성 섬유소인 lignin 및 수용성 섬유소인 hemicellulose와 단백질 식품의 가열조리 중 생성되는 변 이원성 물질 인 IQ간의 홉착작용에 의한 in vitro돌연변이 억제활성을 Salmonella typhimurium주를 사용한 reversion assay를 통해 살펴 보았다. 특히 본 연구에서는 식품섭취 후 식품성분들이 접하게 되는 생체장관 조건을 맞추기 위해 섬유소와 IQ를 pH 5.4, 2.1과 6.6 순서로 각각 30분씩 미리 배양하였고 각 pH에서 일정량을 취하여 돌연변이 활성을 측정하였다. IQ는 0.01$\mu\textrm{g}$/plate 농도에서 약 100~200 revertants를 생산하는 것으로 나타났다. 그러나 IQ가 pH 2.1에서 30분간 배양된 후에는 그 돌연변이활성이 없어지는 것으로 나타났고 pH 5.4와 6.6의 조건에서는 lignin과 hemicellulose의 농도에 비례하여 돌연변이 억제활성을 보였다. 한편 같은 농도 와 pH조건에서 lignin과 hemicellulose의 항돌연변이 효과는 유사한 것으로 나타났고 단, pH 5.4에서 200$\mu\textrm{g}$의 hemicellulose가 pH 6.6에서는 100$\mu\textrm{g}$의 hemicellulose가 같은 농도의 lignin에 비해 그 억제활성이 통계적으로 유의하게 높은 것으로 나타났다. 섬유소와 IQ 배양 시의 pH에 따른 항돌연변이효과는 lignin의 경우 농도 100 및 200$\mu\textrm{g}$과 hemicellulose의 경우는 200$\mu\textrm{g}$의 농도에서 에서 pH 5.4일 때 pH 6.6일 때 보다 그 효과가 유의하게 큰 것으로 나타났다.
Kim, Youn-Jung;Park, Hyo-Joung;Kim, Young-Soo;Kim, Mi-Kyung;Lee, Seung-Ho;Jung, Sang-Hun;Ryu, Jae-Chun
한국환경성돌연변이발암원학회지
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제21권2호
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pp.99-105
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2001
Sophoricoside was isolated as the inhibitor of IL-5 bioactivity from Sophora japonica (Leguminosae). It has been reported to has an anti-inflammatory effect on rat paw edema model. To develope as an anti-allergic drug, genotoxicity of sophoricoside was investigated in bacterial and mammalian cell system such as Ames bacterial reversion test, chromosomal aberration assay and single cell gel electrophoresis (Comet) assay. As results, in the range of 1,250~40 $\mu\textrm{g}$/plate sophoricoside concentrations was not shown significant mutagenic effects in Salmonella typhimurium TA 98, TA 100, TA 1535 and TA 1537 strains in Ames test. The 80% cell growth inhibition concentration (IC/SUB 80/) of sophoricoside was determined as above 5,000 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ in Chinese hamster lung (CHL) fibroblast cell and L5178Y mouse lymphoma cell line for the chromosomal aberration and comet assay, respectively. Sophoricoside was not induced chromosomal aberration in CHL fibroblast cell at concentrations of 700, 350 and 175 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ or 600, 300 and 150 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ in the absence or presence of S-9 metabolic activation system, respectively. Also, in the comet assay, the induction of DNA damage was not observed in L5178Y mouse lymphoma cell line both in the absence or presence of S-9 metabolic activation system. From these results, no genotoxic effects of sophoricoside were observed in bacterial and mammalian cell systems used in these experiments.
This study was conducted to evaluate the mutagenic potential of dimethyl isophthalate (DMIP) using Ames bacterial reverse mutation test, chromosomal aberration test and mouse lymphoma $tk^{+/-}$ gene assay. As results, in Ames bacterial reversion assay, DMIP was tested up to the concentration of 5,000 ${\mu}g$/plate and did not induce mutagenicity in Salmonella typhimurium strains TA98, TA100, TA1535 and TA1537, and Escherichia coli WP2uvrA with or without metabolic activation (S9 mix). Using cytotoxicity test, the maximal doses of DMIP for chromosomal aberration assay were determined at 1,250 ${\mu}g/mL$, which was a minimum precipitation concentration ($IC_{50}>1,940\;{\mu}g/mL$ or 10 mM) and at 155 ${\mu}g/mL$ ($IC_{50}:155\;{\mu}g/mL$) in the presence and the absence, respectively, of S9 mix. DMIP in the presence of S9 mix induced statistically significant (P<0.001) increases in the number of cells with chromosome aberrations at the dose levels of over 250 ${\mu}g/mL$, when compared with the negative control. However, DMIP in the absence of S9 mix did not caused significant induction in chromosomal aberrant cells. In MLA, DMIP at the dose range of 242.5-1,940 ${\mu}g/mL$ in the presence of S9 mix induced statistically significant increases in mutation frequencies related to small colony growth, whereas any significant mutation frequency was not observed in absence of S9 mix. From these results, it is conclusively suggested that dimethyl isophthalate may be a clastogen rather than a point mutagen.
In order to investigate the safety of a water extract (ADP) of 1 : 1 mixture of Anemarrhena rhizoma and Phellodendron cortex for alleviating benign prostate hyperplasia, genotoxicity studies in bacterial and mammalian cell assay systems, namely, the Ames bacterial reverse mutation and chromosomal aberration assays were performed. As shown by the results of the Ames bacterial reversion assay, ADP in the range of 625-5000 $\mu\textrm{g}$/plate did not induce mutagenicity in Salmonella typhimurium TA 98, TA 100, TA 1535 and TA 1537 strains in the absence or in the presence of S9 (the microsomal fraction of rat liver homogenate) metabolic activation. The $IC_{50}$ (50% cell growth inhibition concentration) values of ADP for the chromosomal aberration assay were determined; these were 2425 $\mu\textrm{g}$/ml in the absence and 8126 $\mu\textrm{g}$/ml in the presence of S9 metabolic activation in Chinese hamster lung (CHL) fibroblast cell culture. No chromosomal aberration was observed in CHL cells treated with ADP at 2425, 1212.5 and 606.25 $\mu\textrm{g}$/ml in the absence, or at 8126, 4063 and 2031.5 $\mu\textrm{g}$/ml in the presence of S9 metabolic activation. These results show that under the conditions used, ADP does not harmfully affect the bacterial or mammalian cell system at the gene level.
The controversy on genotoxicity of molinate, an herbicide, has been reported in bacterial system, and in vitro and in vivo mammalian systems. To clarify the genotoxicity of molinate, we performed bacterial gene mutation test, in vitro chromosome aberration and mouse lymphoma $tk^{+/-}$ gene assay, and in vivo micronucleus assay using bone marrow cells and peripheral reticulocytes of mice. In bacterial gene mutation assay, no mutagenicity of molinate ($12-185{\mu}g/plate$) was observed in Salmonella typhimurium TA 98, 100, 1535 and 1537 both in the absence and in the presence of S-9 metabolic activation system. The clastogenicity of molinate was observed in the presence ($102.1-408.2\;{\mu}g/mL$) of metabolic activation system in mammalian cell system using Chinese hamster lung fibroblast. However, no clastogenicity was observed in the absence ($13.6-54.3\;{\mu}g/mL$) of metabolic activation system. It is suggested that the genotoxicity of molinate was derived some metabolites by metabolic activation. Molinate was also subjected to mouse lymphoma L5178Y $tk^{+/-}$ cells using microtiter cloning technique. In the absence of S-9 mixture, mutation frequencies (MFs) were revealed $1.4-1.9{\times}10^{-4}$ with no statistical significance. However, MFs in the presence of metabolic activation system revealed $3.2-3.4{\times}10^{-4}$ with statistical significance (p<0.05). In vivo micronucleus (MN) assay using mouse bone marrow cells, molinate revealed genotoxic potential in the dose ranges of 100-398 mg/kg of molinate when administered orally. Molinate also subjected to acridine orange MN assay with mouse peripheral reticulocytes. The frequency of micronucleated reticulocytes (MNRETs) induced 48 hr after i.p. injection at a single dose of 91, 182 and 363 mg/kg of molinate was dose-dependently increased as $10.2{\pm}4.7,\;14.6{\pm}3.9\;and\;28.6{\pm}6.3\;(mean{\pm}SD\;of\;MNRETs/2,000\;reticulocytes)$ with statistical significance (p<0.05), respectively. Consequently, genotoxic potential of molinate was observed in in vitro mammalian mutagenicity systems only in the presence of metabolic activation system and in vivo MN assay using both bone marrow cells and peripheral reticulocytes in the dose ranges used in this experiment. These results suggest that metabolic activation plays a critical role to express the genotoxicity of molinate in in vitro and in vivo mammalian system.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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