Salmonella enterica serovar Gallinarum is the causative agent of fowl typhoid (FT) and Salmonella enterica serovar Pullorum is pullorum disease (PD), a severe systemic disease of chick and it has the same antigenic fomula, the close relation but distinct pathogen. The traditional bacteriologic and serologic methods routinely used but tedious, time consuming. some of biochemical differences are helpful in differentiating the two organisms, however variation in the characteristics of some strains can be observed. During 2006 to 2008, there was isolated 30 strains. The biochemical characteristics of S. Gallinarum was nonmotile, fermentation of dulcitol, maltose but positive arginine (6.6%), lysine (83.3%) and arabinose (20.0%). The antimicrobial susceptibility test showed 100% sensitive to amikacin, ampicillin, amoxicillin/clavulanic acid and florfenicol, but resistant to penicillin (100%) and erythromycin (60.0%). This PCR method can be applied in the diagnosis between S. Gallinarum and S. Pullorum.
이 실험은 추백리의 병원성을 연구하고자 2006년 2월부터 12월까지 Salmonella enterica serovar. enterica subspecies (S.) Pullorum 야외주를 분리한 후, 이를 건강한 닭에 실험적으로 감염시킨 다음 임상증상, 여러 기관의 육안 및 조직병리학적 검색과 아울러 공격주의 재분리와 동정을 시도하였다. S. Pullorum에 혈청학적으로 음성인 12주령의 100수의 암탉을 $A{\sim}E$까지 20수씩 5그룹으로 구분하였다. $A{\sim}DS$. Pullorum을 $10^6\;CFU$, $10^7\;CFU$, $2{\times}10^7\;CFU$, $10^8\;CFU$로 각각 경구 감염시켰고, E는 비감염 대조군으로 삼았다. 실험 방법으로는 부검, 조직병리학적 검사, Salmonella에 대한 세균 배양, 염색, 생화학적 특성을 조사하고 그 결과를 기술하였다.
Pullorum disease and Fowl typhoid are kind of poultry specific disease for poultry. The peculiar character of these poultry specific diseases is that it can be infected by transmitting vertically and horizontally, also it is hard to be discovered by clinical sign, and pathology or immunology. So, to develop the PCR method which distinguishes these two genetically similar diseases of separated the specific DNA fragment from each strain and use it for differential diagnosis by subtraction PCR method. Standard strain of S gallinarum and S pullorum, and field isolation strain were verified by biochemistry, It confirmed existence of plasmid by using the PFGE. Then, Isolated DNA from it and used it as materials for the experiment. After cutting genomic DNA of two strains by using Sau 3Al, It ligated primer to tester DNA for PCR amplification and separated specific DNA fragment bacteria with method of subtraction PCR. And, It confirmed that it is a piece of unique DNA in every bacteria using base sequence of separated DNA fragment. 1. The six specific DNA fragment were separated from the DNA of S gallinarum and S pullorum by the subtraction PCR method. 2. In the result of comparison after setting base sequence of each fragment, each separated base sequence of DNA fragment they did not correspond to each other 3. As the result of each DNA fragment is derived from the each strain of DNA, and there was no homology of genomic DNA level in mutual. 4. The fragment originated in plasmid and includes S pullorum did not separate. 5. In the result of searching base sequence in Genebank, it partially shows homology in Salmonella enterica, S typhimurium, S dublin, Escherichia coli, Shigella flexneri, Yersinia pestis, Klebsiella pneumoniae. 6. Primer design by S gallinarum DNA 2, 3 fragment used PCR, They are positive reaction in only S gallinarum at 276, 367 bp position.
이 연구는 AP-PCR 기법을 이용하여 Salmonella 균주의 유전적 다양성과 근연관계를 비교하고자 수행하였다. 18종의 Salmonella 균주에 대해 8종류의 primer를 이용하여 각 균주에 대한 DNA 밴드를 검출한 결과 총 AP-PCR 단편의 수는 39에서 52개의 범위였으며 평균 43.6개가 검출되었다. 총 349개의 표지인자가운데 다형성을 나타내는 단편들은 185개로서 53.0%의 다형성 수준을 보여주었다. 살모넬라균주들은 GEN 703과 GEN 708 primer에서 각각 0.682와 0.676의 높은 다형성 수준을 보여주었으나 GEN 603, GEN 604, 및 GEN 607 primer에서는 각각 0.404, 0.460 및 0.472의 비교적 낮은 수준의 다형성을 나타냄으로써 살모넬라균주간 상동성 비율이 높음을 시사해 주고 있다. 따라서, 이들 primer들은 Salmonella 균주들의 AP-PCR 분석에 대단히 효율적임을 확인할 수 있었다. S typhimirium CU 2001의 다형성 수준은 77%로 S typhimirium CU 2002와 가장 근연관계가 가까운 것으로 나타났으며 다음이 S typhimirium CU 2003으로 63%, S typhimirium ATCC 14028이 50%, 그리고 S typhimirium CU 2004가 43%의 근연관계를 나타내었다. S enteritidis ATCC 13076의 다형성 수준은 83%로 S enteritidis CU 2005와 근연관계가 가장 가깝게 나타내었으며 다음이 S enteritidis CU 2006으로 63%, S enteritidis CU 2007이 58%의 근연관계를 나타내었다. S choleraesuis CU 2009의 다형성 수준은 67%로 S choleraesuis CU 2010과 가장 가까운 근연관계를 나타내었으며 S choleraesuis CU 2008은 53%의 근연관계를 나타내었다. S gallinarum CU 2011과 S gallimarum CU 2012의 다형성 수준은 70%로 근연관계가 가장 가깝게 나타났으며 S gallinarum ATCC 9184는 60%의 근연관계를 나타내었다. 마지막으로 S pullorum CU 2013과 S pullorum CU 2014의 다형성 수준은 80%로 매우 높은 근연관계를 나타낸 반면 S pullorum No 11은 53%로 근연관계가 먼 것으로 나타났다. 따라서, AP-PCR 분석은 Salmonella 균주의 유전적 다양성 및 근연관계를 추정하기 위한 강력한 도구로서 이용할 수 있을 것이다.
This investigation was conducted to study the effect of dietary formic acid (FA) and propionic acid (PA) mixture on inhibitory effect of Salmonella pullorum in layer chicks. Nine groups of one day-old layer chicks in addition to positive and negative controls, were fed with acids treated feed containing mixture of different acids concentrations, from 0.5% and 0.5% up to 1.5% and 1.5% FA and PA, respectively. Positive and negative controls were fed untreated feed. Groups except the negative control were challenged orally on day three with $10^4$ cfu/ml S. pullorum. Cloacal swabs were taken at three successive days and at 7, 14 and 21 days of challenge. After 1, 2 and 3 weeks after challenge, 4 chicks from each group were sacrificed and crop and cecal contents were examined for S. pullorum and pH. The numbers of S. pullorum positive culture from the excretion of all treated groups except groups treated with mixture of 0.5% and 0.5%, 1% and 0.5%, 0.5% and 1% FA and PA decreased significantly (p<0.05) as compared with the positive control. The mortality rates of all treated groups except the group treated with 0.5% FA and 0.5% PA were decreased significantly (p<0.05) as compared with the positive control. The treatment significantly (p<0.05) lowered the pH of the crop and cecal contents in all groups except the group treated with 0.5% FA and 0.5% PA as compared with the control. Also, the treatment significantly (p<0.05) lowered the pH of the crop and cecal contents in all groups after three weeks of treatment compared to the first and second weeks. The treatments significantly (p<0.05) lowered the frequency of S. pullorum recovery from crop and cecal contents in six groups treated with 1.5 and 0.5, 1 and 1, 1.5 and 1, 0.5 and 1.5, 1 and 1.5, 1.5% and 1.5% FA and PA respectively. These results indicate that addition of FA and PA mixture in a total concentration of 2 % or more to the diet of newly hatched infected layer chicks significantly decreases the crop and cecal colonization by S. pullorum and significantly decreases S. pullorum fecal excretion and reduced the chick mortality rate.
In this study, we aim to find the presence of virulence-related plasmid in Salmonella isolates from poultry, and the difference between S pullorum and S gallinarum on the plasmid profile and antibiotics resistance. We used seventeen isolates of Salmonella spp that were isolated from poultry. Thirteen isolates, S typhimurium(ST), S pullorum(SP) and S gallinarum(SG), contained virulence-related plasmids. These are 95Kd plasmid in ST and 85Kd plasmid in SP and SG. Three(1/4 of ST, 1/1 of SE, and 1/9 of SP) isolates have no detectable plasmids. The isolates of ST have relatively variable plasmid profile but the isolates of S pullorum except No 12(additional 3.0Kb plasmid) have common 85K6, 8.1Kb, 4.0Kb and 2.3Kb plasmid and two of three isolates of S gallinarum have common 85Kb, 4.0Kb and 2.3Kb plasmid but the rest has only 85Kb plasmid. Interestingly, all of the isolates of SP have 8.1Kb plasmid, and same size of plasmid is also found in one of ST isolates. All of the isolates have the resistance to penicillin, chloramphenicol, rifampicin, streptomycin, sulfamethazine and some isolates show the resistance to ampicillin and tetracycline. There is no relatedness between plasmid profile and antibiotics resistance and no differences between SP and SG in antibiotics resistance. Therefore further differentiation of each isolates by restriction enzyme assay and, if possible, charaterization of each plasmid, especially, 8.1Kb plasmid in SP and ST, may be necessary.
This study was conducted to investigate the isolation prequency, serotypes, and related epidemiological properties of 341 Salmonella spp from domestic poultry and environmental samples during the period 1993-1995. A total of 1,918 samples was collected during the three years period in nationwide. Most of Salmonella spp were isolated from the intestinal contents of poultry, especially cecal(46.0%) and rectal(35.8%) contents. Among the tested samples, rat(28.5 %) was the most predominant Salmonella reservoirs and followed by duck(24.8%), broiler(18.8%), layer(14.8%) and feed(7.1%), in order. More than twelve Salmonella serovars were identified among the 341 Salmonella isolates. The most prevalent serotypes isolated from non-human sources were S enteritidis (22.3%) and S pullorum (21.9%), S muenchen (13.9%), S typhimurium (12.6%), S gallinarum, S meleagridis, S heidelberg, and S senftenberg were followed, in order. In layer chickens, S pullorum (26.0%) was the most predominant serotype but S muenchen (33.0%) was in broiler chickens, S enteritidis (28.4%) was in ducks, and S typhimurium (60.0%) was in rats, respectively. As a results, S enteritidis was identified as the most prevalent serotype in non-human Salmonella isolates in Korea during the period 1993-1995. A preliminary study on the phage typing of 19 S enteritidis selected from the nationwide scale was shown that S enteritidis phage type(PT) 4 was the most predominant PT, and SEPT 1, SEPT 6a, SEPT 7 and SEPT 7a variant were also found in the same period.
Investigations of the prevalence of SalmoneIla organisms in chicken of Suwon area and the effect of selenite broth on the growth of Sal. pullorum were made. The results obtained were summarized as foIlowings. 1. Salmonella organisms was not isolated from fecal samples of 357 chicken from 6 poultry farms of Suwon area. 2. In selenite broth, the growth of Sal. pullorum was completely inhibited may due to the toxic effect of the medium when the inoculum contained less than $5{\times}10^3$ organisms. However, enrichment was attained overcoming the inhibitory action of the medium when $5{\times}10^3$ or more organisms were inoculated.
In order to investigate the seroprevalence of Salmonella Pullorum in boilers reared in Daejeon area, 509 samples were collected from 10 boiler farms randomly selected from 38. The survey was carried out during 6 months from April to October in 2007. Out of 509 chickens, 35 (6.9%) were seropositive and average titer was $2^{4.8}$. The seroprevalence by district was 5.5% (5/90) in Dong-gu, 4.1 % (4/96) in Seo-gu, 7.9% (24/303) in Yuseong-gu, 10.0% (2/20) in Daedeok-gu.
양계 산업에서 살모넬라에 의한 질병들 중 가장 중요한 원인체는 S. Gallinarum, S. Purollum, S. Enteritidis로 간주된다. 생화학적 검사에 의한 직접적인 균 분리.동정과 같은 이들 질병에 대한 종래의 진단법은 많은 시간이 소요되며, 특이성 또한 낮다. 본 연구는 3종의 살모넬라균에 의해 야기되는 이들 질병에 대한 빠르고 정확한 진단을 위한 효율적인 진단법에 초점을 두었다. 먼저 종래의 생화학적 검사를 대신하여 새로 고안된 ITSF/ITSR PCR primer를 이용하여 살모넬라균임을 확인하였으며, 증폭된 phase 1 flagellin (fliC) 유전자를 BpmI 또는 BfaI 제한 효소로 처리하여 S. Gallinarum, S. Purollum, S. Enteritidis를 상호 용이하게 감별하였다. 이상의 결과는 3종의 살모넬라균을 효율적으로 진단하기 위해 신속하게 검출하고 감별할 수 있는 유용한 진단법임을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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