The influences of glucose concentration, initial medium acidity (pH), and temperature on the growth and ethanol production of Saccharomyces cerevisiae NK28, which was isolated from kiwi fruit, were examined in shake flask cultures. The optimal glucose concentration, initial medium pH, and temperature for ethanol production were 200 g/l, pH 6.0, and $35^{\circ}C$, respectively. Under this growth condition, S. cerevisiae NK28 produced $98.9{\pm}5.67$ g/l ethanol in 24 h with a volumetric ethanol production rate of $4.12{\pm}0.24g/l{\cdot}h$. S. cerevisiae NK28 was more tolerant to heat and ethanol than laboratory strain S. cerevisiae BY4742, and its tolerance to ethanol and fermentation inhibitors was comparable to that of an ethanologen, S. cerevisiae D5A.
생물시계(Biological clock)는 생명체에서 나타나는 반복되는 자율적인 리듬을 말하며, 단일세포는 물론 다세포 생명체의 기본적인 대사와 이에 따른 표현형과 행동을 직접적으로 조절하고 있다. 이러한 생물시계는 동면 리듬, 수면 리듬, 심장박동 리듬 및 짝짓기 노래 리듬 등 매우 다양하며, 24시간 이상의 주기를 infradian rhythm, 24시간 주기를 circadian rhythm, 24시간 이내의 짧은 주기를 ultradian rhythm으로 구분한다. 효모 Saccharomyces cerevisiae는 최소 5종 이상의 반복되는 자율적인 리듬이 알려져 있으며, 이중 일부는 생체시계로 인식되고 있다. 본 리뷰에서는 Saccharomyces cerevisiae의 glycolytic oscillation (T= 1~30분), cell cycle-dependent oscillation (T= 2~16 시간), ultradian metabolic oscillation (T= 15~50분), yeast colony oscillation (T= 수 시간) 및 circadian oscillation (T= 24시간)에 대한 연구 결과를 제시하고, 특히 ultradian metabolic oscillation의 특징, 집단 동조인자(population synchronizer), 동조인자의 조절 기작 및 효모 생물시계의 대사공학 분야의 이용성을 제시하여 효모를 이용한 동적 대사조절 및 생물시계 연구가 가능함을 제시하였다.
효모 Saccharomyces cerevisiae의 염색체상에 존재하는 superkiller 유전자인 SKIB 유전자를 cloning 시켜 ski 변이 주내에서 발현시켰다. 이 유전자의 C-말단부위에 E. coli의 tacZ 구조 유전자를 융합시켜 효모와 E. coli의 shuttle vector인 pSR605를 제조하고 이를 효모에 형질전환 시킨 후 나타나는 $\beta$-galactosidase의 융합단백질을 확인할 수 있었다.
전분 분해능력을 갖는 알콜생산용 효모를 만들기 위해 Saccharomyces cerevisiae에 glucoamylase 유전자인 STA를 도입하였다. 도입된 형질의 발현증대를 위해 STA 유전자의 promoter 부위를 alcohol dehydrogenase isoenzyme I 유전자의 promoter 부위와 치환 시켜준 재조합 플라스미드를 재조하였으며 안정성을 증진시키기 위해 centrometer 부위를 치환시킨 결과 glucoamylase의 발현이 증가하였으며, STA 유전자와 centromere를 갖고 있는 재조합 플라스미드는 여러세대가 거듭되어도 비교적 안정하게 유지되었으나 낮은 copy 수로 인해 형질전환체의 효소 역가와 형질전환 빈도는 낮아졌다. STA 유전자가 도입되어 형질전환된 다배체 산업용 효모는 액화 과정만을 거친 주정생산 배지(액화액)에서 원래의 알콜 생산용 효모에 비해 훨씬 많은 양의 알콜을 생산해 내었다. 그러나 centromere를 보유하는 플라스미드에의한 산업용 효모의 형질전환에는 실패하였다.
유가의 급등과 화석 연료의 고갈, 환경 오염문제 등에 대비하기 위하여 대체 수송 연료로서의 바이오에탄올에 대한 관심이 고조되고 있으며, 이에 따라 바이오에탄올 생산비용 절감을 위한 연구가 매우 활발하다. 본 연구에서는 에탄올 생산성 향상을 위하여 Zymomonas mobilis의 에탄올 발효특성을 Saccharomyces cerevisiae와 비교하였다. 음료용 에탄올 생산균주로 오랫동안 사용되어 온 효모와 연료용 에탄올 생산균주로서의 Z. mobilis의 가능성을 검토한 바 최종 에탄올 생성 농도는 큰 차이가 없었으나, 에탄올 생성속도는 Z. mobilis가 S. cerevisiae에 비해 2배 이상 빨랐다. 에탄올 생산성을 비교해 보면 현미, 쌀보리, 카사바의 경우 Z. mobilis는 $2.19g/l{\cdot}h$, $2.60g/l{\cdot}h$, $3.12g/l{\cdot}h$인 반면 S. cerevisiae는 $0.68g/l{\cdot}h$, $1.03g/l{\cdot}h$, $1.28g/l{\cdot}h$ 이었다. 증류액 내의 불순물은 S. cerevisiae는 iso-amylalcohol이 Z. mobilis는 ethyl heptanoate 농도가 상대적으로 높았다.
효모 Saccharomyces cerevisiae를 숙주 세포로 이용하여 활성형의 항균펩티드를 생산하기 위한 model system으로서 쉬파리 유래 defensin의 합성 유전자를 GAP promoter, mating factor $\alpha$1 (MF$\alpha$1)의 preprosequence 및 GAL7 transcription terminator의 조절하에 있는 재조합 plasmid pGMD18을 제작한 후 Saccharomyces cerevisiae에 형질전환하여 growth inhibtion zone assay를 통해 항균활성을 보유한 재조합 효모를 선별하였다. 재조합 효모의 성장 속도와 defensin의 분비능을 증가시키기 위하여 최적의 배지 조성과 배양조건을 결정하였다. 재조합 효모의 defensin 생산을 위한 최적 배양조건을 조사한 결과 0.4% yeast extract, 유기질소원 2% corn steep liquor, 탄소원 2.5% glucose, 0.05% $C_2CO_3$를 포함한 배지에서 초기 pH3 그리고 배양온도 $28^{\circ}C$의 경우가 세포성장과 defensin 의 항균활성이 가장 우수하였다. 이 조건으로 배양을 수행한 결과 YPD 배지에서 배양한 조건보다 약 2배의 세포 성장과 약 4배의 defenzin 생산을 확인하였다.
전보에서 과실로부터 분리한 에탄올 생성능과 향기생성능이 우수한 2종의 균주(Saccharomyces cerevisiae S-2와 Saccharomyces cerevisiae S-6)와 Saccharomyces cerevisiae IFO 1950을 이용하여 약주 제조시 주모로 첨가하여 약주의 품질특성을 분석하고 효모가 약주의 품질에 미치는 영향에 대하여 조사하였다. Saccharomyces c cerevisiae S-2, Saccharomyces cerevisiae S-6과 Saccharomyces cerevisiae IFO 1950의 발효과정 중 pH의 변화는 경시적으로 낮아지는 경향을 보였고, 발효 8일 후에는 S-2균주는 pH 3.0, S-6균주는 pH 2.9, IFO 1950은 pH 3 3.3으로 비슷한 경향을 나타내었다. 산도의 변화는 발효 개시후 완만한 증가를 보이다가 발효 8일 이후에는 S-2는 4.8ml, IFO 1950은 4.3ml를 나타내었다. 그러 나 S-6균주는 8.7ml로 다른 균주에 비해 거의 두배정도 높은 산도를 나타내었다. 이것은 S-6의 citric acid와 lactic acid의 함량이 다른 두 균주에 비해 높은 함량을 나타낸 것에 원인을 찾을 수 있을 것이다. 세가지의 균주에서 발효된 약주에서는 공통적으로 glucose와 maltose가 검출되었고 S-6균주의 약주는발효기간전체에 걸쳐 유리당이 검출 되어 다른 두 균주에 비해 발효능이 떨어진다는 것을 알 수 있었고, 이것은 에탄올 함량변화에서도 확인할 수 있었다.
100 different yeast colonies were isolated from spontaneously fermented kiwis, persimmons, apples, pears, watermelons, grapes, grape fruits, peachs, and plums, and selected yeast strains were used to produce kiwi-persimmon mixed wine (KPMW). Among the isolates, five representative strains exhibited tolerance to sucrose, alcohol, pH, and potassium metabisulfite when compared with the control yeast strain (Saccharomyces cerevisiae KCCM 12615). All five yeast strains (Y4, Y10, Y28, Y78, and Y81) exhibited 99% 26S rDNA sequence similarity to S. cerevisiae. The pH, acidity, Brix, reducing sugar, alcohol, and organic acid contents were consistent in KPMW prepared from the S. cerevisiae KCCM 12615 and Y28 strains. KPMW made from the Y4, Y10, and Y28 strains exhibited lower quantities of free sugars than those of the KPMW made from the other yeast strains. The level of ethyl esters in KPMW prepared from the Y28 was higher than that in the other KPMWs. All strains, except for Y28, produced lower concentrations of sulfur and ketone compounds. Furthermore, the KPMW produced by the Y28 strains had total phenolic contents with 1.1 g/L, with DPPH and ABTS radical scavenging activities of 57.06% and 55.62%, respectively, and a FRAP assay value of 0.72. Our results suggest that Y28 is a promising yeast strain for producing high-quality wines.
In order to identify the protein(s) secreted into culture medium by the sool-l/retl-l mutation of Saccharomyces cerevisiae, proteins from the culture medium of cells grown at permissive (28$^{\circ}C$) and non-permissive temperatures (37$^{\circ}C$), were analyzed. Comparison of protein bands separated by SDS-PAGE identified a prominent band of 47-kDa band from a mutant grown at 37$^{\circ}C$. N-terminal amino acid sequencing of this 47-kDa protein showed high identity with enolases 1 and 2. Western blot analysis revealed that most of the cell wall-bound enolase was released into the culture medium of the mutant grown at 37$^{\circ}C$, some of which were separated as those with lower molecular weights. Our results, presented here, indicate the impairment of cell wall enolase biogenesis and assembly by the sool-l/retl-l mutation of S. cerevisiae.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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