Incidence of infectious bronchitis virus(IBV) infection in vaccinated breeder chickens was investigated by hemagglutination inhibition(HI)test for IBV using Mass 41 antigen. In the breeder chickens with the reduced egg production. chalky deposit. wrinkled
마사츄셋형 전염성 기관지염 바이러스(IBV)를 SPF 발육란의 뇨막강내에서 증식시켜 Sucrose 밀도구배 초원심분리에 의해 정제한 다음 BALB/c 마우스에 면역시켰다. 면역 마우스에서 채취한 비장세포와 마우스 골수암세포와 여러 차례 융합시험을 실시하였다. 많은 융합세포 중에서 IBV에 특이적으로 작용하는 단클론항체(monoclonal antibody : MCA)를 산생하는 hybridoma클론은 2주밖에 얻지 못했다. 2주의 MCA는 모두 IgG형이었고 IBV중화능이나 혈구응집 억제능이 인정되지 않았다. 간접형광항체법으로 작성된 MCA를 이용하여 인공접종한 닭의 기관도말표본에서 10일간의 시험기간중 계속 IBV를 검출할 수 있었다.
In order to investigate the biological properties, pathogenicity and immune responses in artficially infected SPF chickens with Avian infectious bronchitis virus that was isolated from chickens showing IB like signs in southern region of Chung buk. Results obtained throuth the experiments are summarized as follows. 1. From 15 IB suspected cases, two strains of IB virus were isolated, one each from the tracheas and lungs. 2. Infectious bronchitis specific embryo lesions were observed after four serial passages of the isolates in chicken embryos. 3. The field isolates and M-41 strain of IB virus interfered with the replication of Newcastle disease virus in chicken embryos. 4. When specific pathogen free chickens, two week old, were inoculated with the IB virus isolates, clinical respiratory signs as dyspnea, coughing were observed. Airsacculitis was observed by necropsy. 5. AGP antibody positive rates of inoculated SPF chickens were highest on day 14 and lowest on day 36, while HI antibody responses were detected on day 14 in all Groups, the reinoculated Group was shown highest titers. 6. By Indirect immunofluorescence antibody assay of artificially infected SPF chickens, the viral antigens were detected in tissues of larynx, trachea and lung on the 4 th to 7 th days post inoculation.
국내 육계 농장에서 avian reovirus의 감염 여부를 확인하기 위한 ELISA 검사법을 이용한 혈청 검사와 바이러스 분리 및 2개 농장에서 분리된 바이러스를 SPF 닭에 공격 접종하여 병원성을 확인한 결과, 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 1일령 육계 병아리에서 avian reovirus에 대한 모체이행 항체 역가 검사를 통하여 육용종계에서 avian reovirus에 대한 항체 보유 상태가 매우 다양하며, 이로 인해 후 대 병아리의 항체 수준도 매우 불균일하게 분포된다는 것을 알 수 있었다. 2. 육계에서 avian reovirus에 대한 모체 이행 항체 역가는 14일령 전에 대부분 소실되며, 그 이후 혈청 역가가 상승하는 것이 확인되어 국내 육계 농장에서도 avian reovirus가 감염이 되는 것을 확인할 수 있었으며, 각 농장의 감염 상황 및 계군의 면역 정도에 따라 혈청 역가가 다양하게 분포함을 알 수 있었다. 3. RT-PCR을 이용한 avian reovirus 확인 결과, 1일령 병아리에서 모두 음성으로 확인되었고, 14일령과 출하 일령에 2개 농장에서 양성으로 나타나, 국내 육계 농장에서 avian reovirus 감염은 주로 14일령 이후에 나타나는 것으로 판단되었다. 4. 본 실험에서 실시한 ELISA, RT-PCR, 전자현미경 관찰을 통하여 국내 육계 농가에서의 ARV 감염과 존재를 확인할 수 있었다. 그러나 검사 방법간의 결과가 불일치한 것은 avian reovirus의 분리가 감염된 농장의 상황, 닭의 감염 일령 및 분리 장기에 따라 차이가 있음을 알 수 있었다. 5. 9일령 SPF 부화란 접종을 통해 2개의 육계 농장에서 avian reovirus가 분리되었고 분리된 바이러스를 3주령 SPF 닭에 공격 접종 시 혈청 역가의 상승 및 주요 조직에서 바이러스가 확인되었으나, 특이적인 임상 증상은 관찰되지 않았다. 이는 닭의 연령에 따라 avian reovirus에 저항성이 있는 것으로 여겨지며 ARV의 조직 내 잔존은 감염 장기에 따라 다르다는 것을 알 수 있었다.
한국산 닭으로부터 분리한 크립토스포리디움(Cryptosporidium)의 중형 오오시스트를 SPF 병아리에 경구투여하여 그 분변속에의 오오시스트의 크기 및 배출양상과 파브리시우스낭 조직에서 많이 발견되는 여러 발육기의 미세구조를 관찰하였다. 병아리에 있어서 prepateat period는 평균 5.9일간, patent period는 $12.87{\pm}3.4$일간, 오오시스트 배출 정점기는 접종후 $12{\pm}2.78$일째, 그리고 일반적으로 8일째부터 14일째까지 1주일간에 걸적 다수의 오오시스트가 분변으로 배출되었다. 이 원충의 거의 모든 발육기의 미세구조는 C. muris를 제외한 사람을 포함한 포유동물과 조류에서 이미 발견된 것들과 거의 비슷하지만 분변으로 배출되는 오오시스트의 크기는 Kinyoun 항산염색(변법)표본에서 $5.24{\pm}0.44{\times}4.86{\pm}0.37{\mu\textrm{m}}$, 오스윰산 증기고정 Giemsa 염색표본에서 $6.06{\pm}0.23{\times)4.86{\pm}0.34$\mu\textrm{m}$이었다. 이상의 연구결과를 기초로 하여 한국산 닭유래 크립토스포리디움을 C. baileyi라고 동정한다.
국내에서 분리된 CAA의 병아리에 대한 병원성시험과 야외계군에서의 CAA에 대한 항체 보유상황을 조사한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. CAA국내 분리주 89-69를 감수성이 있는 1일령의 SPF병아리에 접종하였을 때 접종 14일 후 심한 빈혈과 흉선 및 Fabricius낭의 위축이 유발되었고 접종계 및 그 동거계에서 CAA가 재분리되었다. 2. CAA분리주 89-69를 유래가 다른 1일령의 SPF 두 계군의 병아리에 각각 근육접종하였을 때 두 계군간 CAA분리주에 대한 감수성의 차이를 보여 주었으며 이는 이 두 계군에서의 CAA에 대한 항체보유율과 관련이 있었다. 3. 간접형광항체반응 시험으로 야외계군에서의 CAA에 대한 항체보유상항을 조사한 결과 39계군중 29계군(74%)이 CAA에 대한 항체를 보유한 것으로 나타났으며 두 SPF계군중 한 SPF계군에서도 항체가 검출되었다.
닭에 있어서 닭와포자충의 재감염에 대한 방어기전을 이해하기 위하여 장기간에 걸쳐 혈청IgG항체가를 경시적으로 조사하였다. 2일령의 SPF 병아리(Dekalb-Warren, Sex-Sal-Link)에 $5{\;}{\times}{\;}10^5$개 그리고 IgG가가 정상으로 복귀한 다음 10일인 340일령에 $1{\;}{\times}{\;}10^7$개의 닭와포자충의 오오시스트를 경구투여하고 나서 채혈하여 간점형광항체법을 이용하여 혈청IgG 항체가를 측정하였다. IgG 가는 감염후 3일부터 38일까지는 대조군과 차이가 없었으나 45일부터 1:21.33으로 상승하기 시작하여 120일에 1:512로 최고치에 이른다음 점점 떨어져 330일에 1:4로 정상치에 이르렀다. 도전 감염후 7, 14, 28일에 각각 1:16, 1:512, 1:1.024로서 점점 높아져 정점에 이른다음 급격히 떨어져 63일에 정상으로 복귀하였다. 한편, 대조군의 항체가는 모두 1:2~1:4의 범위에 있었으며 이 원충의 도전감염전 및 후에 있어서 분변으로부터 집충시켜 제작한 Kinyoun 항산염색표본에서도 오오시스트를 전혀 검출할 수 없었다. 분변내의 오오시스트의 소실 시기와 최초 감염에 있어서 IgG가의 피이크는 일치하지 않았다.
The correlation between in vitro Congo-red binding properties of E coli and in vivo invasiveness of the organisms in SPF chickens and mice was investigated. Congo-red positive E coli colonies were dark-red color with a typical colonial morphology of rough appearance when grown on Congo-red medium, while Congo-red negative colonies showed pale-pink color and smooth surfaced colonial morphology. Pathogenicity of 10 Congo-red positive E coli for mice was observed in 92.5% but that of 5 Congo-red negative E coli was 45%. Invasiveness of 10 Congo-red positive E coli for chickens was observed in 96% of the SPF chickens tested but that of 5 Congo-red negative E coli was 16% only. These results of pathogenicity studies with E coli isolates indicate a significant correlation between Congo-red binding ability and virulence in avian Escherichia coli.
Avian reovirus (ARV) and fowl adenovirus (FAdV) were evaluated for pathogenicity in specific pathogen free (SPF) chickens. ARV was isolated from the broilers with history of malabsorption syndrome (MAS). FAdV was isolated from the layer breeders with inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome. Total 6 inoculated groups including 1 un-inoculated group were organized and inoculated with the ARV and/or FAdV by oral route. The minimal pathological lesions and lower viral gene detection rates were present in the ARV inoculated groups compared to those of FAdV or ARV/FAdV inoculated groups. Common gross lesions in the ARV inoculated group were distended intestine with foamy contents and in the FAdV group there were foamy cecal contents and hydropericardium among the evaluation methods such as gross and histological lesion, viral gene detection, body weight and serum chemistry, histopathological lesion score was reliable especially in the liver lesions such as hepatic necrosis and lymphocytic infiltration. However, we did not success to evaluate the synergetic effect of mixed infection of ARV and FAdV in this study. Therefore, we need further study to reproduce malabsorption syndrome of ARV infection using different viral agent such as rotavirus and using different dose of virus.
봉입체성 간염-심낭수종증(IBH-HPS)은 주로 육계에서 다발하며 3~6주령의 육계에서 최고 75%까지의 폐사율을 일으킬 수 있는 질병이다. 주 증상으로는 심낭의 황색 수양성 액체가 저류되는 심낭수종증과 함께 봉입체성 간염이 나타난다. 1987년 파키스탄에서 처음 발생이 보고된 후 여러 나라에서 발병되었으며, 최근 우리나라에서도 질병 발생이 확인된 바 있다. 본 실험에서는 IBH-HPS에 대한 경제적 피해를 감소시키기 위한 목적으로 사독 오일 백신을 제조하여 안전성 및 효능을 평가하였다. 2주령의 SPF 닭에 제조한 사독 백신을 1 또는 2수분으로 근육 접종한 뒤 2주 후인 4주령에 FAdV-4로 공격 접종을 실시하였다. 백신 접종에 의한 임상 증상 발현 및 폐사가 관찰되지 않아 백신의 안전성이 인정되었고, AGP 검사를 통해 FAdV-4에 대한 항체가 100% 형성되었음을 확인하였다. 공격 접종 시 각각 경구 또는 근육으로 접종하였고, 접종 후 10일간 관찰한 결과, 백신 접종군 모두 부검 소견, 바이러스 유전자 검색율 및 조직학적 병변도에 있어서 효능이 인정되었다. 육안 병변의 경우, 백신 비접종군에서는 간의 괴사 반점이 10~50%의 개체에서 발생한 데 비해 백신 접종군에서는 관찰되지 않았다. 바이러스 유전자 검색 양성률 또한 백신 접종군이 백신 비접종군에 비해 낮은 수준으로 나타났으며, 이는 특히 근육 투여군에서 더 명확하게 나타났다. 조직 병변도는 관찰 기간 내내 핵내 봉입체는 관찰되지 않았으나, 림프구 침윤 및 간세포의 괴사 정도가 백신 접종군에서 현저히 감소한 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 실험에서 제조한 FAdV-4 사독 오일 백신은 실험계에 임상적으로 안전하고 면역원성도 높았으며, 효능에 있어서는 백신 비접종군에서의 임상 증상이 명확하지 않았음에도 불구하고, 육안 병변, 바이러스 검색율 및 조직 병변도에 있어서 공격 접종에 대한 방어가 효과적인 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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