The biocatalytic efficiency of recombinant Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 expressing the secondary alcohol dehydrogenase of Micrococcus luteus NCTC2665 was studied. Recombinant C. glutamicum converts ricinoleic acid to a product, identified by gas chromatography/mass spectrometry as 12-ketooleic acid (12-oxo-cis-9-octadecenoic acid). The effects of pH, reaction temperature, and non-ionic detergent on recombinant C. glutamiucm whole cell bioconversion were examined. The determined optimal conditions for production of 12-ketooleic acid are pH 8.0, 35℃, and 0.05 g/l Tween80. Under these conditions, recombinant C. glutamicum produces 3.3 mM 12-ketooleic acid, with a 72% (mol/mol) maximum conversion yield, and 1.1 g/l/h volumetric productivity in 2 h; and 3.9 mM 12-ketooleic acid, with a 74% (mol/mol) maximum conversion yield, and 0.69 g/l/h maximum volumetric productivity in 4 h of fermentation. This study constitutes the first report of significant production of 12-ketooleic acid using a recombinant Corynebacterium glutamicum-based biocatalyst.
The Actinomycete strain KH29 is antagonistic to the multidrug-resistant Acinetobacter baumannii. Based on the diaminopimelic acid (DAP) type, and the morphological and physiological characteristics observed through the use of scanning electron microscopy (SEM), KH29 was confirmed as belonging to the genus Streptomyces. By way of its noted 16S rDNA nucleotide sequences, KH29 was found to have a relationship with Streptomyces cinnamonensis. The production of an antibiotic from this strain was found to be most favorable when cultured with glucose, polypeptone, and yeast extract (PY) medium for 6 days at $27^{\circ}C$. The antibiotic produced was identified, through comparisons with reported spectral data including MS and NMR as a cyclo(L-tryptophanyl-L-tryptophanyl). Cyclo(L-Trp-L-Trp), from the PY cultures of KH29, was seen to be highly effective against 41 of 49 multidrug-resistant Acinetobacter baumannii. Furthermore, cyclo(L-Trp-L-Trp) had antimicrobial activity against Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus, Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus niger, and Candida albicans, However, it was ineffective against Streptomyces murinus.
The present study concerned the identification and characterization of a novel bacterial strain isolated from entomopathogenic nematodes collected from different regions in Korea. The bacterial isolate M1021 was Gramnegative, bioluminescent, and produced red colonies on MacConkey agar medium. A rod-shaped structure was confirmed by the electron micrograph. Fatty acid composition was analyzed by using the Sherlock MIDI system. The identification was further supported by 16S rDNA sequence analysis, which revealed 96-99% sequence homology with strains of Photorhabdus temperata. The location of the isolated strain of P. temperata in the phylogenetic tree was confirmed and it was named P. temperata M1021. P. temperata M1021 exhibited catalase, protease, and lipase activities when grown on appropriate media supplemented with respective substrates. The culture of P. temperata M1021 exhibited insecticidal activity against the larvae of Galleria mellonella and the activity was the highest after 3-4 days of cultivation with agitating at $28^{\circ}C$ under 220 rpm. Antibacterial activity was also observed against Salmonella Typhimurium KCTC 1926 and Micrococcus luteus KACC 10488.
Arthrobacter luteus로부터 분리(分離)한 zymolyase 조효소(粗酵素) 표품(標品)의 효모(酵母) 세포벽(細胞壁)에 대한 용해(溶解) 활성(活性)을 측정(測定)함에 있어서, 보다 적합(適合)한 조건(條件)을 찾기 위하여, 맥아즙(麥芽汁) 배지(培地)에서, 진탕 배양(培養)한 S. sake의 용해(溶解)에 관여(關與)하는 제(諸) 인자(因子)의 영향(影響)을 검사(檢射)하였다. 1. 본(本) 용해(溶解) 효소(酵素)에 대한 S. sake 생세포(生細胞)의 용해(溶解) 감수성(感受性)은 대수(對數) 증식기(增殖期)의 세포(細胞)는 높았고, 지체기 및 정상기(定常期)의 세포(細胞)는 낮았다. 그 중에서 특(特)히 18시간(時間) 배양(培養)된 세포(細胞)는 가장 높은 용해(溶解) 감수성(感受性)을 보였다. 2. 본(本) 용해(溶解) 효소(酵素)는 S. sake의 생세포(生細胞)에 대해서 아주 낮은 용해(溶解) 활성(活性)을 나타냈으나, 효모(酵母) 세포(細胞)를 아유산(亞硫酸) 소-다(0.05 M)로 전처리(前處理)하므로서 그 용해(溶解) 활성(活性)은 4배(倍) 이상(以上)으로 증가(增加)되었다. 3. 시중(市中)의 빵 효모(酵母)에 대해 본(本 ) 용해(溶解) 효소(酵素)의 활성(活性)은 지급히 미약(微弱)하였고 아유산(亞硫酸) 소다의 효과(效果)도 약하였다. 4. 동결(凍結) 건조(乾燥)시킨 빵 효모(酵母)의 세포(細胞)는 생세포(生細胞)의 경우 보다 높은 용해(溶解) 감수성(感受性)을 보였다. 그러나 동결(凍結) 건조(乾燥) 세포(細胞)의 경우, S. sake나 빵 효모(酵母)의 그 어느 세포(細胞)도 아유산(亞硫酸) 소-다에 의한 용해(溶解) 감수성(感受性)의 영향(影響)은 인정(認定)되지 않았다. 5. 효모(酵母) 세포벽(細胞壁) 용해(溶解)에 있어서, 그 반응(反應) 속도(速度)와 조효소(粗酵素)의 농도(濃度)와의 관계(關係)는 효소(酵素) 반응(反應) 속도론(速度論)에 준(準)하는 경향(傾向)을 보이는 것 같았으나, 반응(反應) 속도(速度)와 효모(酵母) 세포(細胞)의 농도(濃度)와의 관계(關係)는 효소(酵素) 반응(反應) 속도론(速度論)과는 다른 패턴을 보여주었다. 6. 0.05 M phoshate buffer (pH 7.5)에 용해(溶解)시킨 zymolyase 조세포(粗細胞) 표품(標品)을 $7^{\circ}C$에서 10일간(日間) 보존(保存) 시킨 결과(結果), 용해(溶解) 활성(活性)의 잔존(殘存)율은 약(約) 80 %였다.
본 연구에서는 시판되고 있는 식초를 이용하여 6종의 식품 유해세근에 대한 항균력을 비교하였다. 그 결과, 감식초와 현미식초는 합성식초에 비해 S. aureu, M. luteus, S. enteritidius 및 E. coli에서 항균 활성이 높게 나타났으며, 현미식초가 감식초에 비해 식품유해세균에 대한 항균활성이 비교적 더 높게 나타났다. 현미식초의 농도에 따른 항균활성을 조사한 결과 5종의 그람양성 세균 및 음성 세균 모두 10$\mu$L/mL 이상의 농도에서 생육이 거의 억제되었으나, V. purahaermolyticus는 15$\mu$L/mL 농도에서 생육이 거의 정지되어, 현미식초는 식품 부패균과 대장균 생육억제에 우수한 것으로 나타났다. 식초처리에 의한 미생물의 형태 변화를 전자 현미경으로 관찰한 결과 S. aureu, E coli 모두 세포가 팽윤되고 일부 세포벽이 완전히 파괴된 형태를 관찰할 수 있어 식초처리로 인해 세균의 생육이 억제되는 것을 알 수 있었다.
Gentamicin에 저항성을 나타내는 세균을 병원 하수로부터 분리하여 aminoglycoside-(3)- N-acetyltransferase를 암호화하는 유전자인 aac(3)II의 존재여부를 dot-blot hybridization으로 조사하였다. aac(3)II유전자의 일부를 탐침으로 사용한 결과 gentamicin저항성 세균의 41% (39/95)가 이 유전자를 가지고 있었다. aac(3)II와 Tn3에서 각각 설계된 primer를 사용한 PCR 결과 aac(3)II를 가지고 있는 39개 균주 중 13개 균주가 TnS-aac(3)II구조를 가지고 있음을 알 수 있었다. aac(3)II의 상류에 Tn3를 가지고 있는 13개 균주의 gentamicin에 대한 최소억제농도는 가지고 있지 않은 균주에 비해 상대적으로 높았다. 13개 균주를 동정한 결과 5개는 Eschelichia coli, 3개는 Acinetobacter johnsonii, Enterobacter agglomerans와 Micrococcus luteus가 각각 2개, 그리고 1개의 Pseudomonas facilis로 동정되었다. 이러한 결과들은 Tn3-aac(3)II구조가 gentamicin 저항성 세균들에서 널리 분포하고 있음을 말해준다.
There was a shortage of research reports on sterilization criterion and contamination of ultrasonic probes. Therefore, in this study, we were going to provide a basic study to measure the level of microbial contamination in ultrasonic probes and to investigate the radiographer's awareness of infection. After the scan, samples were collected from the rubber part of the probe by opening a sterile swab (Transport Medium AM608-1S) for medical bacteria collection with the remaining gel removed with a paper towel. Also, the collected samples of bacteria were grown for seven days and then the laboratory was analyzed. Among the total 29 types of microorganisms, Micrococcus luteus 21(26%), Moraxella species 16(20%), Coagulase negative staphylococcus 8(10%), Bacillus species 5(7%), Bicillus circulans 3(5%), Acinetobacter lwoffii 2(2%), and 1 other Candida parapsilosis (1%) a number of bacteria and fungus, was detected. In a disinfectant experiment using LuciPac Pen on the Lumitester PD-30s, we cultured the rubber part of the probe two to three times to measure the bacteria. Bacteria decreased to 97% with Aquanax (alkaline reduced water 100%), 99% with Klarion wash (0.01% sodium hydroxide), 94% with Klarion disinfection (0.01% nitrous acid water), Sterilization was best with Klarion wash (0.01% sodium hydroxide). Therefore, guidelines for cleaning and disinfection of ultrasonic probes was required, and further development of probe-only disinfectants is required.
다양한 기능성을 갖는 생약재 32종을 대상으로 천연보존료 개발의 일환으로 메탄올로 추출한 항균활성 물질을 몇 종의 병원균과 식중독균, 식품과 관련이 있는 세균, 젖산균 및 효모 등 12종의 균주 B. subtilis, M. luteus, Sta aureus, Sta. epidermidis, Strep. mutans, E. coli, Pse. aeruginosa, Sal. typhimurium, V. vulnificus, Lac. brevis, Leu. mesenteroides, Sacch. cerevisiae에 대하여 항균활성을 검색하였으며, 항균력이 강한 생약재 추출물은 최소저해농도(MIC)를 측정하였다. 검색한 결과 계피, 목단, 적양, 정향, 팔각향 등의 메탄올 추출물은 12균주 중 세균에 대하여 항균활성이 강하였으나, 젖산균 및 효모에 대해서는 낮은 항균활성을 보였다. 최소저해농도는 B. subtilis에 대해 강한 증식억제효과를 보였고, Sta. epidermidis나 Pse. aeruginosa에 대해서도 거의 모든 추출물이 저해활성을 나타내었다. 하지만 항균활성 측정시 거의 저해가 없었던 Lue. mesenteroides도 대부분의 추출물에서 억제 효과를 나타내 항균성과는 약간 다른 결과를 보였다. 생약재 중 강한 항균력을 보인 녹차, 정향, 적양, 인진호 등은 폴리페놀 함량이 약 7 mg/g 이상으로 높아 이들 페놀성 물질들이 항균활성에 많은 영향을 준 것으로 사료된다. 따라서 여러 미생물에 의해 변패될 수 있는 식품에서 천연보존료로의 이용이 가능할 것으로 생각된다.
Kim, Mu-Yong;Oh, Jeong-In;Paek, Kyoung-Sook;Hong, Chang-Yong;Kim, In-Chull;Kwak, Jin-Hwan
Archives of Pharmacal Research
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제19권1호
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pp.52-59
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1996
The in vitro activity of LB20304 was evaluated against clinical isolates and compared with those of Q-35, ciprofloxacin, sparfloxacin, lomefloxacin and ofloxacin. LB20304 demonstrated 16-to 64-fold more potent activity than ciprofloxacin against gram-positive bacteria. LB20304 inhibited 90% of the isolates of methicillin-susceptible Staphylococcus aureus(MSSA) at a concentration of $0.016\mug/ml\; (MIC_{90}). MIC_{90}$ values of LB20304 against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), methicillin-susceptible Staphylococcus epidermidis (MSSE), methicillin-resistant S. epidermidis (MRSE) and Streptococcus pneumoniae were $2\mug/ml,\; 0.016\mug/ml,\; 0.5\mug/ml \;and\; 0.031\mug/ml,$ respectively. LB20304 was also very active against gram-negative bacteria. Against Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa and Acinetobacter calcoaceticus, $MIC_{90}s of\; LB20304 were\; 0.031\mug/ml,\; 0.25\mug/ml,\; 2\mug/ml,\; 8\mug/ml\; and\; 0.5\mug/ml$, respectively. Its activity was comparable to that of ciprofloxacin but much better than those of Q-35, sparfloxacin, ofloxacin and lomefloxacin. LB20304 also exhibited the most potent acitvity among quinolones tested against laboratory standard strains, ofloxacin-resistant strains, .betha.-lactamase-producing strains and anaerobic strains. The inhibitory effect$ (IC_{50)$ of LB20304 on DNA gyrase from Micrococcus luteus, determined by the supercoiling assay, was 8-fold more potent than that of ciprofloxacin. LB20304 did not induce topoisomerase-associated DNA cleavage even at a concentration of 10 mg/ml, although ciprofloxacin induced DNA cleavage at a concentration of 1 mg/ml.
효모 Saccharomyces cerevisiae를 숙주 세포로 이용하여 활성형의 항균펩티드를 생산하기 위한 model system으로서 쉬파리 유래 defensin의 합성 유전자를 GAP promoter, mating factor $\alpha$1 (MF$\alpha$1)의 preprosequence 및 GAL7 transcription terminator의 조절하에 있는 재조합 plasmid pGMD18을 제작한 후 Saccharomyces cerevisiae에 형질전환하여 growth inhibtion zone assay를 통해 항균활성을 보유한 재조합 효모를 선별하였다. 재조합 효모의 성장 속도와 defensin의 분비능을 증가시키기 위하여 최적의 배지 조성과 배양조건을 결정하였다. 재조합 효모의 defensin 생산을 위한 최적 배양조건을 조사한 결과 0.4% yeast extract, 유기질소원 2% corn steep liquor, 탄소원 2.5% glucose, 0.05% $C_2CO_3$를 포함한 배지에서 초기 pH3 그리고 배양온도 $28^{\circ}C$의 경우가 세포성장과 defensin 의 항균활성이 가장 우수하였다. 이 조건으로 배양을 수행한 결과 YPD 배지에서 배양한 조건보다 약 2배의 세포 성장과 약 4배의 defenzin 생산을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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