Background: Ginsenoside Rg3 and gemcitabine have mutual enhancing antitumor effects. However, the underlying mechanisms are not clear. This study explored the influence of ginsenoside Rg3 on Zinc finger protein 91 homolog (ZFP91) expression in pancreatic adenocarcinoma (PAAD) and their regulatory mechanisms on gemcitabine sensitivity. Methods: RNA-seq and survival data from The Cancer Genome Atlas (TCGA)-PAAD and Genotype-Tissue Expression (GTEx) were used for in-silicon analysis. PANC-1, BxPC-3, and PANC-1 gemcitabine-resistant (PANC-1/GR) cells were used for in vitro analysis. PANC-1 derived tumor xenograft nude mice model was used to assess the influence of ginsenoside Rg3 and ZFP91 on tumor growth in vivo. Results: Ginsenoside Rg3 reduced ZFP91 expression in PAAD cells in a dose-dependent manner. ZFP91 upregulation was associated with significantly shorter survival of patients with PAAD. ZFP91 overexpression induced gemcitabine resistance, which was partly conquered by ginsenoside Rg3 treatment. ZFP91 depletion sensitized PANC-1/GR cells to gemcitabine treatment. ZFP91 interacted with Testis-Specific Y-Encoded-Like Protein 2 (TSPYL2), induced its poly-ubiquitination, and promoted proteasomal degradation. Ginsenoside Rg3 treatment weakened ZFP91-induced TSPYL2 poly-ubiquitination and degradation. Enforced TSPYL2 expression increased gemcitabine sensitivity of PAAD cells and partly reversed induced gemcitabine resistance in PANC-1/GR cells. Conclusion: Ginsenoside Rg3 can increase gemcitabine sensitivity of pancreatic adenocarcinoma at least via reducing ZFP91 mediated TSPYL2 destabilization.
백삼 가공품과 홍삼 가공품의 사포닌 분포 내용과 함량을 비교하기 위하여 시판되고 있는 백삼 농축액(WGC)과 홍삼 농축액(RGC)을 각각 1종 선정하여 조 사포닌의 함량과 개별 ginsenoside의 함량분포를 조사하였다. Shibata의 방법과 우리나라 식품공전에 따라 측정한 조 사포닌의 양은 WGC가 각각 10.65와 21.77%이었으며 RGC는 5.80와 10.94%이였고, HPLC에 의한 총 사포닌의 양은 WGC가 7.40와 10.64%, RGC는 3.31와 3.13%로서 백삼 농축액의 사포닌 함량이 홍삼 농축액의 경우 보다 전반적으로 높았다. HPLC로 분석한 인삼 사포닌, ginsenoside $Rb_1,\;Rb_2,\;Rc,\;Rd,\;Re,\;Rf,\;Rg_1,\;20(S)\;Rg_3,\;20(R)Rg_3,\;20(S)\;Rh_1$ 그리고 $20(R)\;Rh_1$ 이었으며 대부분 홍삼농축액 보다는 백삼농축액의 함량이 높았으며, 특히 ginsenoside $Rb_1,\;Rg_1$ 그리고 $Rb_2$은 백삼 농축액에 3배 이상 더 함유되어 있었다. 또한 protopanaxadiol group과 protopanaxatriol group의 비율(PD/PT)에 있어서는 농축액간의 차이는 크지 않았다. 홍삼의 특유 사포닌으로 알려진 20(S)- 및 20(R)-ginsenoside $Rg_3$가 WGC와 RGC에 비슷하게 분포하는 것으로 확인되었다. 20(S)-ginsenoside $Rg_3$의 조 사포닌 조제법에 따라 RGC에서 0.48과 0.47% WGC에 0.40와 0.53%, 20(R)-ginsenoside $Rg_3$도 RGC에 0.10과 0.11%, WGC에 0.14와 0.22%이었다.
Ginsenoside Rg3는 홍삼으로부터 추출한 활성 성분들 중 하나로 한방 의학에선 원기를 회복시키는 약제로 잘 알려져 있는 인체에 유효한 화학 성분이다. Rg3는 지금까지 많은 연구들에 의하여 다양한 암세포로부터 강력한 항암효과를 가진다고 알려져 있다. 그러나 Rg3가 악성 흑색종 세포에서 어떻게 세포사멸을 유도하는지에 대한 작용 기작은 명백하게 밝혀지지 않았다. 따라서, 본 연구에서는 ginsenoside Rg3가 B16F10 흑색종 세포에서 세포 사멸 유도 활성 및 기전에 관한 영향을 조사하였다. 세포 생존력을 MTT assay 법으로 수행한 결과, B16F10 세포에선 농도 의존적으로 세포증식 저해 효과가 나타났고 정상세포인 EA.hy.926 과 NIH3T3 에서는 나타나지 않았다. B1610 세포에 Rg3를 농도 별로 처리 후, TUNEL 염색을 한 결과 세포사멸이 농도 의존적으로 증가 하는 것을 확인 할 수 있었다. Western blot 분석을 실시한 결과, Rg3를 처리한 B16F10 세포에서 p-FAK, Bcl-2, pro-caspase3 단백질들의 발현이 감소 되었고 이와 반대로 Bax, p-p38의 발현은 증가되었다. 따라서, 본 연구에서는 Rg3가 B16F10 흑색종 세포에서 항암제의 agent로써 사용 될 수 있다는 것을 입증하였다.
Purpose: 인삼이 항당뇨 활성을 가진다는 연구가 많은 연구자들에 의해 진행되었고, 이는 인삼의 구성 성분 중 ginsenoside에 기인한다는 보고가 있다. 본 연구는 ginsenoside의 항당뇨 작용기전을 in vitro에서 알아보고자 3T3-L1 지방세포에서 glucose uptake와 췌장 베타세포인 HIT-T15 세포에서 insulin 분비 효과를 확인하였다. 이를 위하여 인삼을 식초로 처리한 긴삼의 70% MeOH 분획으로부터 protopanaxadiol 계인 ginsenoside $Rb_2$, $Rg_3$ 그리고 protopanaxtriol 계인 $Rg_2$를 분리하여 본 실험에 사용하였다. Method: Ginsenoside $Rb_2$, $Rg_2$, $Rg_3$가 지방 세포에서 glucose uptake에 미치는 효과를 확인하기 위하여 3T3-L1 세포를 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에서 분화 유도시켰으며 3T3-L1 preadipocyte가 80% 정도 자라면 분화 유도 배지 (5% fetal bovine serum (FBS), 0.5 mM isobutylmethylxanthine (IBMX), 1 mM dexamethasone 그리고 $10{\mu}g/ml$ insulin가 포함된 DMEM)로 4일, $10{\mu}g/ml$ insulin가 포함된 DMEM으로 2일, FBS만 포함된 DMEM으로 2일 배양하여 총 8일 동안 분화를 유도하였다. 분화 유도된 3T3-L1 adipocytes 에 각각 $Rb_2$, $Rg_2$, $Rg_3$를 $20{\mu}M$로 처리하여 16시간 배양하여 low glucose DMEM에서 3시간 배양한 후에 $37^{\circ}C$에서 insulin 10 ng/ml 과 각각 $Rb_2$, $Rg_2$, $Rg_3$가 포함된 Krebs Ringer Hepes buffer(KRP buffer)에서 20분간 배양하였다. 2-deoxy-D-[$^3H$]-glucose를 넣고 10분 후에 차가운 PBS로 반응을 종결시켜 lysis buffer로 cell을 모은 후 scintillation counter를 이용하여 glucose를 측정하였다. Insulin 분비 효과는 HIT-T15 세포와 일차 배양한 흰쥐 소도세포(islets)를 사용하여 확인하였다. HIT-T15 세포는 24 well plate에 well 당 $2{\times}10^5$ 개씩 분주하여 24시간 동안 배양한 후 시료를 처리하였으며 소도 세포는 Sprague-Dawley rat의 췌장에 collagenase가 포함된 Hanks' Balanced Salt Solution(HBSS)을 주입하여 분리하고 islets을 얻었다. 분리한 소도세포를 $1{\sim}2$일 동안 배양하여 $Rb_2$, $Rg_2$, $Rg_3$가 각각 $20{\mu}M$의 농도로 첨가된 insulin 측정용 buffer인 Krebs-Ringer buffer (KRB+0.3% BSA, KRBB)에 $37^{\circ}C$에서 1시간 incubation 시킨 후 배양액으로 분비된 인슐린의 양을 측정하였다. 한편 ginsenoside의 인슐린 분비 촉진 기전을 알아보기 위한 실험에서는 ATP-sensitive $K^+$ channel opener인 diazoxide (0.5 mM)가 ginsenoside에 의해 촉진된 인슐린 분비를 억제하는지 살펴보았다. Result: glucose uptake assay 에서는 $Rg_2$가 가장 크게 glucose uptake를 증가시켰고 $Rb_2$, $Rg_3$는 그 활성이 크지 않았다. 한편 Insulin 분비 효과는 diol계인 $Rg_3$에서 용량 의존적으로 인슐린의 분비를 촉진시켰으며 $20{\mu}M$ 농도에서 대조군과 비교해 1.5배 이상의 분비 촉진 효과를 보였고 triol계인 $Rg_2$ 에서는 이러한 효과가 나타나지 않았다. $Rg_3$의 인슐린 분비 촉진 기전을 0.5 mM 의 diazoxide를 이용하여 확인한 결과 $Rg_3$에 의해 촉진된 인슐린 분비를 감소시켰다. 이로 미루어보아 $Rg_3$의 인슐린 분비 촉진 기전은 ATP-sensitive $K^+$ 채널의 봉쇄에 의한 것임을 확인할 수 있었다.
Kim, Dal-Sik;Kim, Yunjeong;Jeon, Ji-Young;Kim, Min-Gul
Journal of Ginseng Research
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제40권4호
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pp.375-381
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2016
Background: We evaluated the drug interaction profile of Red Ginseng (RG) with respect to the activities of major cytochrome P450 (CYP) enzymes and the drug transporter P-glycoprotein (P-gp) in healthy Korean volunteers. Methods: This article describes an open-label, crossover study. CYP probe cocktail drugs, caffeine, losartan, dextromethorphan, omeprazole, midazolam, and fexofenadine were administered before and after RG supplementation for 2 wk. Plasma samples were collected, and tolerability was assessed. Pharmacokinetic parameters were calculated, and 90% confidence intervals (CIs) of the geometric mean ratios of the parameters were determined from logarithmically transformed data using analysis of variance after RG administration versus before RG administration. Results: Fourteen healthy male participants were evaluated, none of whom were genetically defined as poor CYP2C9, 2C19, and CYP2D6 metabolizers based on genotyping. Before and after RG administration, the geometric least-square mean metabolic ratio (90% CI) was 0.870 (0.805-0.940) for caffeine to paraxanthine (CYP1A2), 0.871 (0.800-0.947) for losartan (CYP2C9) to EXP3174, 1.027 (0.938-1.123) for omeprazole (CYP2C19) to 5-hydroxyomeprazole, 1.373 (0.864-2.180) for dextromethorphan to dextrorphan (CYP2D6), and 0.824 (0.658-1.032) for midazolam (CYP3A4) to 1-hydroxymidazolam. The geometric mean ratio of the area under the curve of the last sampling time ($AUC_{last}$) for fexofenadine (P-gp) was 0.963 (0.845-1.098). Administration of concentrated RG for 2 wk weakly inhibited CYP2C9 and CYP3A4 and weakly induced CYP2D6. However, no clinically significant drug interactions were observed between RG and CYP and P-gp probe substrates. Conclusion: RG has no relevant potential to cause CYP enzyme- or P-gp-related interactions.
Kim, Kyung-Tack;Lee, Young-Chul;Cho, Chang-Won;Rhee, Young-Kyoung;Bae, Hye-Min
Journal of Ginseng Research
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제34권1호
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pp.1-7
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2010
본 논문은 백삼 추출물의 코팅 처리에 의한 인삼 커피의 품질 특성에 대한 것으로 주요 내용은 다음과 같다. 백삼 추출물 (WGC-2)의 농도에 따라 커피의 품질 속성을 실험하였다. 대조군과 $5^{\circ}$ Brix (WGC-1)와 $20^{\circ}$ Brix의 사포닌 농도는 8.29%, 8.74%와 8.93% 였고, WGC-1과 WGC-2의 총 진세노사이드 농도는 0.3 mg/g과 0.6 mg/g 였다. 특히 주요 진세노사이드 $Rg_1,\;Rg_2,\;Rb_1,\;Rb_2,\;Rg_2,\;Rh_1$와 $Rg_3$ 함량은 백삼 추출물의 농도에 따라 증가하였다. 커피 맛은 WGC-2가 상업적 커피콩보다 유의하게 낮았고, 소비자 관능 평가에서는 별 차이가 없다는 내용이다.
Objective: This study investigated the effects of intrauterine growth restriction (IUGR) during late pregnancy on the cell growth, proliferation, and differentiation in ovine fetal thymuses. Methods: Eighteen time-mated Mongolian ewes with singleton fetuses were allocated to three groups at d 90 of pregnancy: restricted group 1 (RG1, 0.18 MJ ME/body weight [BW]0.75/d, n = 6), restricted group 2 (RG2, 0.33 MJ ME/BW0.75/d, n = 6) and control group (CG, ad libitum, 0.67 MJ ME/BW0.75/d, n = 6). Fetuses were recovered at slaughter on d 140. Results: The G0/G1 phase cell number in fetal thymus of the RG1 group was increased but the proliferation index and the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) were reduced compared with the CG group (p<0.05). Fetuses in the RG1 group exhibited decreased growth hormone receptor (GHR), insulin-like growth factor 2 receptor (IGF-2R), and their mRNA expressions (p<0.05). For the RG2 fetuses, there were no differences in the proliferation index and PCNA expression (p>0.05), but growth hormone (GH) and the mRNA expression of GHR were lower than those of the CG group (p<0.05). The thymic mRNA expressions of cyclin-dependent protein kinases (CDKs including CDK1, CDK2, and CDK4), CCNE, E2-factors (E2F1, E2F2, and E2F5) were reduced in the RG1 and RG2 groups (p<0.05), and decreased mRNA expressions of E2F4, CCNA, CCNB, and CCND were occurred in the RG1 fetuses (p<0.05). The decreased E-cadherin (E-cad) as a marker for epithelial-mesenchymal transition (EMT) was found in the RG1 and RG2 groups (p<0.05), but the OB-cadherin which is a marker for activated fibroblasts was increased in fetal thymus of the RG1 group (p<0.05). Conclusion: These results indicate that weakened GH/IGF signaling system repressed the cell cycle progression in G0/G1 phase in IUGR fetal thymus, but the switch from reduced E-cad to increased OB-cadherin suggests that transdifferentiation process of EMT associated with fibrogenesis was strengthened. The impaired cell growth, retarded proliferation and modified differentiation were responsible for impaired maturation of IUGR fetal thymus.
A mixture of 20(R)- and 20(S)-ginsenoside Rg$_{3}$ was obtained under mild acidic hydrolysis from protopanaxadiol saponins, ginsenosides Rb$_{1}$, Rb$_{2}$, Rc and Rd. The product was acetylated to give the peracetates, which were further converted into 20(R)-ginsenoside Rg$_{3}$, 20(S)-ginsenoside Rg$_{3}$, 20(R)-ginsenoside Rh$_{2}$ and 20(S)-ginsenoside Rh$_{2}$ by the direct alkaline treatment depending upon two kinds of temperature conditions respectively. The structure and physicochemical properties of a prosapogenin, 20(R)-ginsenoside Rh$_{2}$, were investigated.
It was reported that Red ginseng contains specific ginsenoside-Rg$_2$,-Rg$_3$,-Rh$_1$and -Rh$_2$, which show various pharmacological effects. However, production of these specific ginsenosides from Red ginseng is not commercially applicable because of high cost of the raw material, roots. This work was carried out to examine the production of Red ginseng specific ginsenosides from Agrobacterium-transformed hairy roots. Hairy roots were induced from 3 year-old root segment of Korean ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) after infection with Agrobacterium rhizogenes A4. Among many lines of hairybroots, KGHR-8A was selected. Steam heat treatment of hairy roots was resulted in the changes of ginsenoside composition. Eleven ginsenosides were detected in heat-treated hairy roots but eight in freeze dried hairy roots. In heat treated hairy root, content of ginsenoside-Rb$_1$,Rb$_2$,Rc, Rd, Re, Rf, and Rg$_1$were decreased compared to those of freeze dried hairy roots. However, heat treatment strongly enhanced the amount of Red ginseng specific ginsenogides (ginsenoside-Rg$_2$,-Rg$_3$,-Rh$_1$and -Rh$_2$). Amounts of ginsenoside-Rg$_3$,-Rh$_1$and -Rh$_2$ in heat-treated hairy roots were 2.58, 3.62 and 1.08 mg/g dry wt, respectively, but these were detected as trace amount in hairy roots without heat treatment. Optimum condition of heat treatment for the production of Red ginseng specific ginsenoside was 2 h at 105$^{\circ}C$. This result represents that Red ginseng specific ginsenoside can be producted from hairy roots by steam heat treatment.
본 연구에서는 상처치유(wound healing)와 같은 허혈성 심뇌혈관 질환의 잠재적 치료제로서 산양삼 추출물과 진세노사이드 Rg5의 가능성을 인간 제대정맥 내피세포인 HUVEC에서 확인하고자 하였다. 그 결과, 산양삼 추출물과 Rg5는 10-100 nM의 저농도에서 혈관신생 과정에서 발생하는 세포의 증식이나 이동, 관 형성과정을 유의적으로 증진시켰으며, 그 증가현상은 산양삼 추출물과 Rg5가 유사한 수준으로 발생하였다. 따라서 Rg5를 이용하여 혈관신생 과정에 관여하는 신호전달 메커니즘을 확인한 결과, Akt/eNOS와 ERK1/2의 인산화는 양성대조군으로 사용한 VEGF와 유사한 수준으로 증가되는 것을 확인하였다. 마지막으로 혈관 신생 유도인자이며 양성대조군인 VEGF의 혈관염증 관련 부작용이 Rg5의 혈관신생 효과에도 작용하는지 확인하기 위하여 혈관염증 관련 단백질인 ICAM-1과 VCAM-1의 발현량을 확인한 결과, ICAM-1과VCAM-1의 발현이 양성대조군인 VEGF에서는 유의적으로 증가하였으나 Rg5를 처리한 경우에는 일반 대조군과 유사한 수준으로 낮게 나타났다. 따라서 본 연구는 산양삼 추출물과 Rg5가 혈관신생 유도효과가 있으며, 이러한 현상은 Akt/eNOS와 ERK 관련 신호전달 메커니즘을 통해 진행되고 이러한 효과가 혈관염증은 유도하지 않는다는 것을 입증하였으며, 잠재적 치료제로서의 가능성을 확인하는 계기가 되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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