• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제17권12호
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• pp.1158-1161
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• 1996

• FOCUS: LIFE SCIENCE
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• 제1호
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• pp.3.1-3.7
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• 2024

The article discusses the critical role of chromatography in the analysis and purification of proteins in biopharmaceuticals, emphasizing the importance of comprehensive characterization for ensuring their safety and efficacy. It highlights the use of Avantor® ACE® HPLC columns for the separation and purification of proteins, focusing on the analysis of intact proteins using reversed-phase liquid chromatography (RPLC) with fully porous particles. This article also details the application of different mobile phase additives, such as TFA and formic acid, and emphasizes the advantages of using type B ultra-pure silica-based columns for efficiency and peak shape in biomolecule analysis. Additionally, it addresses the challenges of analyzing intact proteins due to slow molecular diffusion and introduces the concept of solid-core (or superficially porous) particles, emphasizing their benefits over traditional porous particles for the analysis of therapeutic proteins. Furthermore, it discusses the development of Avantor® ACE® UltraCore BIO columns, specifically designed for the high-efficiency separation of large biomolecules, such as proteins, and demonstrates their effectiveness in achieving high-resolution separations, even for higher molecular weight proteins like monoclonal antibodies (mAbs). In addition, it underscores the complexity of analyzing and characterizing intact protein biopharmaceuticals, requiring a range of analytical techniques and the use of wide-pore stationary phases, operated at elevated temperatures and with relatively shallow gradients. It highlights the comprehensive range of options offered by Avantor® ACE® wide pore columns, including both fully porous and solid-core particles, bonded with a variety of complementary stationary phase chemistries to optimize selectivity during method development. The use of ultrapure and highly inert base silica is emphasized for enabling the use of lower concentrations of mobile phase modifiers without compromising analyte peak shape, particularly beneficial for LC-MS applications. Then the article concludes by emphasizing the significance of reversed-phase liquid chromatography and its compatibility with mass spectrometry as a valuable tool for the separation and analysis of intact proteins and their closely related variants in biopharmaceuticals.

• Natural Product Sciences
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• 제24권4호
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• pp.288-292
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• 2018

High-performance countercurrent chromatography (HPCCC) coupled with reversed-phase highperformance liquid chromatography (RP-HPLC) method was developed to isolate dihydrophaseic acid 3'-O-${\beta}$-D-glucopyranoside (DHPAG) from the extract of Nelumbo nucifera seeds. Enriched DHPAG sample (2.3 g) was separated by HPCCC using ethyl acetate/n-butanol/water system (6:4:10, v/v/v, normal-phase mode, flow rate: 4.0 mL/min) to give 23.1 mg of DHPAG with purity of 88.7%. Further preparative RP-HPLC experiment gave pure DHPAG (16.3 mg, purity > 98%). The current study demonstrates that utilization of CCC method maximizes the isolation efficiency compared with that of solid-based conventional column chromatography.

• 분석과학
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• 제5권1호
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• pp.63-71
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• 1992

역상 액체 크로마토그래피에 의한 몇 가지 금속-N-Alkylisonitrosoacetylacetone imine 킬레이트의 용리거동을 Novapak $C_{18}$ 분리관을 사용하여 조사하였다. 용리액은 Acetonitrile/Water로 하였으며, 각 금속의 킬레이트의 최적 용리액 조성은 각각 70:30(Pd의 경우), 60:40(Ni의 경우) 및 50:50(Co의 경우)이었으며, 리간드의 alkyl기 종류에 따른 금속 킬레이트의 용리순서는 methyl>ethyl>propyl>butyl 유도체 순이었다. 모든 금속 킬레이트의 log k'값은 $0{\leq}log\;k^{\prime}{\leq}1$의 범위였고, log k'값과 용리액 중 물의 부피분율을 도시한 결과 직선관계가 성립되었다. 또한 뱃치법으로 측정한 분포비(Dc)값의 크기는 금속 킬레이트의 용리순서와 비교적 잘 일치할 뿐만 아니라 Dc값과 k'의 직선관계를 나타냄으로써, 금속 킬레이트의 용리 메카니즘은 주로 소용매성 효과, 즉 소수성 효과에 기인함을 확인하였다.

• 대한화학회지
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• 제30권3호
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• pp.312-319
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• 1986

알킬 처리된 실리카(ODS)칼럼을 정지상으로하여 역상에서의 이온-쌍 크로마토그래피 법으로 방향족 카르복시산들의 크기 인자를 조사하고 분리하는데 반대 이온으로 브롬화 도데실트리메틸암모늄(DTAB)을 사용하였다. 시료의 크기 인자는 반대 이온의 농도, 메탄올의 농도, 전해질의 종류 및 농도, 시료 분자에 붙어 있는 다른 작용기의 종류 및 위치등에 따라 영향을 받았다. 최적 조건하에서 몇 가지 혼합 시료를 분리할 수 있었다.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제7권1호
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• pp.12-17
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• 2002

Simultaneous determination of nine water-soluble vitamins contained in multi-nutrient tablets was carried out by reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) equipped with analytical $C_{18}$ column and UV (270 nm) detector. Those standard vitamins were successfully separated within 23 minutes by gradient elution with solvent A (0.5 M potassium phosphate monobasic) and solvent B (0.25 M potassium phosphate monobasic-methanol, 1:1). Calibration curves showed good linealities with correlation coefficients (> 0.92) in tested ranged respectively. The detection limits were considered to be 2.1 ng for ascorbic acids 60 ng for Vit B$_{6}$ 3 ng for p-aminobenzoic acid, 9 ng for niacinamide, 9 ng for thiamin, 5.0 ng for folic acid and 1.5 ng for riboflavin at 0.05 a.u.f.s. Solid phase extraction through Sep-Pak (C$_{18}$ ) cartridge was successfully applied for purification of water soluble vitamins in commercial multi-nutrient tablets.ts.

• 분석과학
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• 제11권4호
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• pp.292-296
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• 1998

헤테로 고리 화합물인 isoquinoline과 외부치환체로서 $COOCH_3$, CN 및 $CH_3$ 작용기들이 치환된 화합물들의 혼합물을 정상 및 역상법으로 분리 한 결과, 이동상의 종류에 따라 용리순서에 용매화 효과가 나타났다. 또한, 헤테로 고리 화합물 내부의 방향족성이 없는 2-methylindoline과 방향족성이 있는 2-methylindole, 그리고 헤테로 원자가 질소와 산소인 benzoxazole과 질소와 황인 benzothiazole의 머무름거동은 정상 액체 크로마토그래피의 경우 시료 분자와 충진제의 흡착 표면과의 흡착력으로 설명할 수 있었고, 역상 액체 크로마토그래피의 경우는 시료와 정지상과의 소수성 상호작용 등으로 설명할 수 있었다.

• Natural Product Sciences
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• 제10권6호
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• pp.262-267
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• 2004

A reversed-phase liquid chromatographic method for decursin and decursinol angelate of Angelicae gigantis Radix, an important crude drug in Korean traditional medicine, was developed and validated. Decursin and decursinol angelate, the structure isomer (pyranocoumarin) each other, are the main organic constituents in Angelicae gigantis Radix. This method was developed using a RP-18 column, UV detector at 280 nm and 50% acetonitrile solution containing 0.01 M sodium dodecyl sulfate and 25 mM sodium dihydrogen phosphate (pH 5.0) as the mobile phase. Various validation parameters were included and evaluated satisfactorily. Linearity was established in range 2-75 mg/ml of decursin and decursinol angelate (correlation coefficient = 0.9997 and 0.9995, respectively). This analytical method showed good accuracy (98.1% and 99.5%, respectively). Precision (repeatability) revealed a relative standard deviation value of 1.71% (decursin) and 3.19% (decursinol angelate). For intermediate precision measure the considered variables were equipment and days. A robustness test showing the influence of deferent counter-ion concentration in mobile phase was also performed.

• 분석과학
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• 제11권6호
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• pp.436-439
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• 1998

인삼 사포닌을 역상 고속 액체크로마토그래피 방법을 이용하여 여러 종류의 컬럼으로 분석하였다. 최적 조건은 Novapak $C_{18}$ ODS 역상 칼럼($3.9mm{\times}150mm$, $5{\mu}m$), $CH_3CN/H_2O$ 이성분 이동상 용액과 기울기 제어장치, 그리고 1.5 mL/min의 용매 흐름속도였으며, UV 검출기(203 nm)를 사용하였다. 인삼의 주성분인 ginsenoside $Rb_1$, $Rb_2$, Rc, Rd, Re, Rf 그리고 $Rg_1$ 7종을 50분 안에 양호하게 분리하였다. 각 성분에 대한 검량선은 직선성이 좋았으며, 회귀계수는 0.98~0.99이었다.

• 대한화학회지
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• 제39권4호
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• pp.257-265
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• 1995

시중에 시판되고 있는 우유를 전처리하여 이 우유에 포함된 유리 아미노산을 dansyl-chloride로 유도체화시켜 C-18 컬럼을 이용한 역상 LC법으로 분리한 다음 표준물 첨가법으로 정량했다. 미량의 D-아미노산의 분리에서는 LC의 Column-Switching System을 이용하였으며 비키랄 컬럼을 통과한 단실 D/L-아미노산에 $Cu(N-benzyl-L-proline)_2$를 이동상에 첨가한 키랄 분리를 수행하여 L-아미노산에서 D-아미노산을 분리 정량했다. 이 방법은 우유시료 중에 존재하는 16가지 아미노산의 정량이 가능하며 이중에 12가지의 D-아미노산이 column switching 방법을 통한 키랄 분리로 정량이 가능하다. 우유 100 mL에 총 유리 아미노선이 41.00 mg 포함되어 있음을 확인했으며, D-아미노산은 D-glutamic acid가 2.05%, D-alanine 2.93%만이 포함되어 있음을 확인했다.