본 실험은 한우 종빈우의 임신말기에 Se과 Vit. E 투여가 종빈우의 분만 후 번식기능에 미치는 요인을 검토하였고, 임신말기 Se과 Vit. E 를 투여한 한우 종빈우에서 태어난 송아지의 발육능력을 조사하고, 혈액화학치와 혈중 Vit. E 농도에 미치는 영향을 검토하였다. 1. 분만 l 개월전 Se과 Vit E 을 투여한 한우 종빈우에서 태어난 송아지의 발육성적을 조사한 결과, 생시체중은 투여구가 대조구보다 높은 성적을 나타냈다 (P<0.05). 또한 이유시 체중과 일당증체량도 투여구가 대조구 보다 다소 높은 성적을 나타냈으나 처리구간 유의적인 차이는 인정되지 않았다 (P>0.05). 한편 종빈우의 번식능력을 조사한 결과, 투여구가 대조구보다 초발정이 빨리 도래하였고, 수태 당 인공수정 횟수도 적었으나, 처리구간 유의적인 차이는 인정되지 않았다 (P>0.05). 2. Se과 Vit. E를 분만 2 개월전 4 회 투여한 한우 종빈우로부터 태어난 송아지의 발육성적을 조사한 결과, 생시체중, 이유시체중 및 일당증체량은 투여구가 대조구보다 높은 성적을 나타냈으나, 처리구간 유의적인 차이는 인정되지 않았다 (P>0.05). 한편, 한우 종빈우의 번식능력을 조사한 결과, 분만 후 초발정은 투여구가 대조구보다 초발정 발현이 빨랐으며 수태 당 인공수정 횟수는 투여구가 대조구에 비해 적었으나 처리구간 유의적인 차이는 인정되지 않았다 (P>0.05). 3. Se과 Vit. E를 분만 1개월전 2 회 투여한 한우 종빈우에서 태어난 송아지의 혈액성분에 미치는 영향을 검토한 결과, 평균 혈중 albumin 은 Vit. E 2000IU 투여구가 여타구보다 높은 성적을 나타냈으며 (P<0.05), 평균 혈중 cholesterol이 함량 또한 Vit. E 1500IU 투여구가 여타구보다 높게 나타났다 (P<0.05). 그러나 혈중 BUN, creatinine, glucose, IP, calcium, TP 및 triglycerides 함량은 처 리 구간 유의 적 인 차이 는 없었다 (P>0.05). 4. Se과 Vit. E를 분만 2 개월 전 4 회 투여한 한우 종빈우에서 태어난 송아지의 혈액성분에 미치는 영향을 검토한 결과, 평균 혈중 albumin, cholesterol, BUN, creatinine, glucose, IP, calcium, TP 및 triglycerides 함량은 모든 처리구에서 유의적인 차이가 인정되지 않았다 (P>0.05). 5. 분만 l 개월 전 Se과 Vit. E를 투여한 한우 종빈우로부터 태어난 송아지의 혈중 Vit. E 농도를 측정한 결과, 평균 혈중 Vit. E 농도는 투여구가 대조구보다 다소 높은 농도를 나타냈으나 처리구간 유의적인 차이는 없었다 (P>0.05). 6. 분만 2 개월 전에 Se과 Vit. E를 투여한 한우 종빈우로부터 태어난 송아지의 혈중 Vit. E 농도에 미치는 효과를 검토한 결과, 투여구가 대조구보다 다소 높은 농도를 나타냈으나 처리구간 커다란 차이는 없었다 (P>0.05).
Sphingosine-1-phosphate (S1P) has a many function involved proliferation, differentiation and survival of many cells. In this study, to investigate whether S1P improve the developmental competence of porcine embryos, 50 nM of S1P were supplemented during in vitro maturation (with EGF or without EGF) medium and/or in vitro culture (IVC) medium. Addition of S1P was significantly increased the rate of oocytes reaching metaphase II (MII) compared to the control (83.5 vs. 64.1%) in without EGF medium, but not with EGF medium (89.5 vs. 84.6%). When treated with $1{\mu}M$ of N1N-dimethylsphingosine (DMS), a sphingosine kinase inhibitor which is blocked endogenous generation of S1P, the meiotic progression rates to MII stage (without EGF: 45.2 and with EGF: 66.7%) were significantly decreased and degeneration rates (without EGF: 51.2 and with EGF: 30.1%) were increased in both medium compared to control group during IVM periods. Also, the rates of blastocyst formation was significantly increased in the S1P treated group compared to control group (29.0 vs. 19.2%) of EGF supplemented medium, whereas there were no effect in the EGF free medium (9.0 vs. 10.5%). After 12 h IVM, the phosphorylation of ERK1 and ERK2, which is major signaling pathway of MAP kinase, were increased in the S1P group than that of control or DMS group. When supplemented of S1P during IVC, the rates of blastocyst formation and total cell number (30.2% and 40.6) were significantly increased in S1P-treated group compared with control (20.1% and 32.5), DMS (12.3% and 25.1), and S1P plus DMS group (24.7% and 33.6). The percentage of apoptosis nuclei in the S1P group was significantly decreased than other groups. Also, the rates of blastocyst formation (26.7 vs. 14%) and total cell number (42.8 vs. 32.5) were significantly increased in the S1P group than those of control group when S1P added during the entire IVM and IVC periods. Taken together, our results indicate that S1P supplementation in IVM and/or IVC medium affects beneficial effect of meiotic maturation and subsequent developmental competence of porcine embryos.
Somatic cell nuclear transfer in cattle has limited efficiency in terms of production of live offspring due to high incidence of fetal failure after embryo transfer to recipients. Such low efficiency of cloning could possibly arise from abnormal and poorly developed placenta. In the present study the placental proteome in late pregnancy established from in vitro fertilization (IVF) and nuclear transfer (NT) was analysed. Proteome alternation was tested using two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-DE) and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI- TOF). Comparing placenta from NT embryos to those from IVF counterparts, significant changes in expression level were found in 18 proteins. Of these proteins 12 were not expressed in NT placenta but expressed in IVF counterpart, whereas the expression of the other 6 proteins was limited only in NT placenta. Among these proteins, cytokeratin 8 and vimentin are considered to be involved in regulation of post-implantation development. In particular, cytokeratin 8 and vimentin may be used as makers for placental development during pregnancy because their expression levels changed considerably in NT placental tissue compared with its IVF counterpart. Data from 2-DE suggest that protein expression was disorientated in late pregnancy from NT, but this distortion was eliminated with progression of pregnancy. These findings demonstrate abnormal placental development during late pregnancy from NT and suggest that alterations of specific placental protein expression may be involved in abnormal function of placenta.
Park, Jong-Ju;JarGal, Naidansuren;Yoon, Jong-Taek;Min, Kwan-Sik
Reproductive and Developmental Biology
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v.34
no.1
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pp.33-40
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2010
Equine chorionic gonadotropin (eCG) is a heavily glycosylated glycoprotein composed of non-covalently linked $\alpha$- and $\beta$-subunits. To study the function and signal transduction of tethered recombinant-eCG (rec-eCG), a single chain eCG molecule was constructed, and the rec-eCG protein was prepared. In this study, we constructed 5 mutants (${\Delta}1$, ${\Delta}2$, ${\Delta}3$, ${\Delta}4$, and ${\Delta}5$) of rec-eCG using data about known glycoprotein hormones to analyze the role of specific follicle stimulating homone (FSH)-like activity. Three amino acids of certain specific sites were replaced with alanine. The expression vectors were transfected into CHO cells and subjected to G418 selection for 2~3 weeks. The media were collected and the quantity of secreted tethered rec-eCGs was quantified by ELISA. The LH- and FSH-like activities were assayed in terms of cAMP production by rat LH/CG and rat FSH receptors. Then, the metabolic clearance rate analyzed by the injection of rec-eCG (5 IU) into the tail vein was analyzed. The mutant eCGs (${\Delta}l$, ${\Delta}4$, and ${\Delta}5$) were transcripted, but not translated into proteins. Rec-eCG A2 was secreted in much lower amounts than the wild type. Only the rec-eCG ${\Delta}3$ ($\beta$-subunit: $Gln^{94}-Ile^{95}-Lys^{96}{\rightarrow}Ala^{94}-Ala^{95}-Ala^{96}$) was efficiently secreted. Although activity is low, its LH-like activity was similar to that of tethered $eCG{\beta\alpha}$. However, the FSH-like activity of rec-$eCG{\beta\alpha\Delta}3$ was completely flat. The result of the analysis of the metabolic clearance rate shoed the persistence of the mutant in the blood until 4 hours after the injection. After then, it almost disappeared at 8 hours. Taken together, these data suggest that 94~96 amino acid sequences in eCG $\beta$-subunit appear to be of utmost importance for signal transduction of the FSH receptor.
Endocrine disruptors are chemicals which can be found in our normal daily lives. Chemicals such as bisphenol A, DDT, benzophenone and phenylphenol can be easily ingested through plastic food containers and pesticides. Endocrine disruptors can be very harmful and toxic because they disrupt the normal function of the endocrine system. It has been reported that endocrine disruptions can cause fatal strikes in the cardiovascular, reproductive, and central nervous systems, and other parts of the body. Therefore we examined if benzophenone as an endocrine disruptor inhibits development in or induces malformation of chick embryos. Chick embryos which received a single injection of benzophenone ($1{\mu}g$/egg $\sim$$500{\mu}g$/egg) via the yolk sac at designated times (6, 9, 12, 15, 18 and 21 days after incubation) were investigated. Body weight reduction was observed in middle doses ($40{\mu}g$/egg $\sim$$60{\mu}g$/egg). High mortality rates and teratogenic signs such as abnormal wry beak and abnormal eyeballs were seen in high doses ($80{\mu}g$/egg $\sim$$500{\mu}g$/egg). In conclusion, it is suggested that benzophenone induces malformation of chick embryos and seriously inhibits development.
Dispersal polymorphism in insects Is a kind of adaptive strategy of the life history together with the diapause, consisting of the “long-winged or alate forms” of migratory phase and the “short-winged or apterous forms” of stationary phase. Dispersal polymorphism is a polymorphism related with the flight capability, and has three categories ; the wing polymorphisms, flight muscle polymorphisms, and flight behavior variations. Phase variation is another type of dispersal polymorphism varying in morphology, physiology and wing forms in response to the density of the population. The dispersal migration is a very adaptive trait that enables a species to keep pace with the changing mosaic of its habitat, but requires some costs. In general, wing reduction has a positive effect on the reproductive potential such as earlier reproduction and larger fecundity The dispersal polymorphism is a kind of optimization in the evolutionary strategies of the life history in insects; a trade-off between the advantages and disadvantages of migration. Wing polymorphism is a phenotypically plastic trait. Wing form changes with the environmental conditions even though the species is the same. Various environmental factors have an effect on the dispersal polymorphisms. Density dependent dispersal polymorphism plays an important role In population dynamics, but it is not a simple function of the density; the individuals of a population may be different in response to the density resulting different outcomes in the population biology, and the detailed information on the genotypic variation of the individuals in the population is the fundamental importance in the prediction of the population performances in a given environment. In conclusion, the studies on the dispersal polymorphisms are a complicated field in relation with both physiology and ecology, and studies on the ecological and quantitative genetics have indeed contributed to understanding of its important nature. But the final factors of evolution; the mechanisms of natural selections, might be revealed through the studies on the population biology.
The demand for the production of gene-defective mice from embryonic stem (ES) cells is increasing to clarify decisive gene function in vivo. Although blastocyst injection is widely used to generate ES cell-mediated knockout mice, coculture method has been alternatively used because of several advantages, such as low cost and simple procedure. Thus, this experiment was designed to demonstrate the feasibility of the coculture method using J1 ES cells, which are known to be efficient for blastocyst injection. Eight-cell embryos were harvested from 2.5 days post-coitum (dpc), denuded with acid tyrode's solution, and transferred onto trypsinized J1 ES cells. Aggregation was carried out following two typical methods, which are simple coculture method and aggregation in groove prepared by aggregation needle. Successfully aggregated-embryos were developed to blastocysts for 24 h and transferred into uterus of pseudo-pregnant foster mother. Chimeric offspring was judged by coat pigmentation. In this study, we could obtain chimeric mice from all the two aggregation methods, but the chimera production efficiencies in coculture using groove were three times higher at least than those in the other group. In conclusion, these observations suggest that coculture method should be available for production of knockout mice from J1 ES cells. Presently, the germ-line transmission rates of the chimeras produced from the two methods are under investigation.
The present study was performed to analyze the gene expressions of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide(PACAP) and its receptor in the rat uterus, a candidate for novel extrahypothalamic source and target. The PACAP cDNA fragments corresponding to the common exon region which is found in both the rat hypothalamus and testis were produced from all tissue samples including the rat uterus by reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR). No PCR product was amplified from the rat hypothalamic, pituitary, ovarian and uterine samples when the 5' primer corresponding to the testis-specific exon 1 region was used, while the predicted size of product was detected from the testis sample. RT-PCR using the uterine RNA and specific primers for the PACAP receptor yielded products with predicted sizes. Transcripts for the rat uterine PACAP receptor were identified as type I isoforms with hip-hop and hip- or hop-type inserts. After pregnant mare's serum gonadotropin (15 IU) treatment of immature rats (day 25), the level of PACAP mRNA was increased in 24 h and 48 h group, and was declined to the lowest in 72 h group. The present study shows the presence of transcripts for PACAP and its receptor isoform in the rat uterus. These finding ssuggest that the uterine PACAP ight act as a novel autocrine and/or paracrine factor via its specific receptors on the reglulation of rat uterine function and physiology during the reproductive cycle.
Objective: Prostaglandins (PGs) function in various reproductive processes, including luteolysis, maternal pregnancy recognition, conceptus development, and parturition. Our earlier study has shown that PG transporters ATP-binding cassette, subfamily C, member 4 (ABCC4) and solute carrier organic anion transporter family, member 2A1 (SLCO2A1) are expressed in the uterine endometrium in pigs. Since several other PG transporters such as ABCC1, ABCC9, SLCO4C1, and SLCO5A1 are known to be present in the uterine endometrium, this study investigated the expression of these PG transporters in the porcine uterine endometrium and placenta. Methods: Uterine endometrial tissues were obtained from gilts on day (D) 12 and D15 of the estrous cycle and days 12, 15, 30, 60, 90, and 114 of pregnancy. Results: ABCC1, ABCC9, SLCO4C1, and SLCO5A1 mRNAs were expressed in the uterine endometrium, and levels of expression changed during the estrous cycle and pregnancy. Expression of ABCC1 and ABCC9 mRNAs was localized mainly to luminal and glandular epithelial cells in the uterine endometrium, and chorionic epithelial cells during pregnancy. Conceptuses during early pregnancy and chorioallantoic tissues from mid to late pregnancy also expressed these PG transporters. $Estradiol-17{\beta}$ increased the expression of ABCC1 and SLCO5A1, but not ABCC9 and SLCO4C1 mRNAs and increasing doses of $interleukin-1{\beta}$ induced the expression of ABCC9, SLCO4C1, and SLCO5A1 mRNAs in endometrial explant tissues. Conclusion: These data showed that several PG transporters such as ABCC1, ABCC9, SLCO4C1, and SLCO5A1 were expressed at the maternal-conceptus interface, suggesting that these PG transporters may play an important role in the establishment and maintenance of pregnancy by regulating PG transport in the uterine endometrium and placenta in pigs.
Clinical arthritis is typically divided into rheumatoid arthritis (RA) and osteoarthritis (OA). Arthritis-induced muscle weakness is a major problem in aged people, leading to a disturbance of balance during the gait cycle and frequent falls. The purposes of the present study were to confirm fiber type-dependent expression of muscle atrophy markers induced by arthritis and to identify the relationship between clinical signs and expression of muscle atrophy markers. Mice were divided into four experimental groups as follows: (1) negative control (normal), (2) positive control (CFA+acetic acid), (3) RA group (CFA+acetic acid+type II collagen), and (4) aging-induced OA group. DBQA/1J mice (8 weeks of age) were injected with collagen (50 ${\mu}g/kg$), and physiological (body weight) and pathological (arthritis score and paw thickness) parameters were measured once per week. The gastrocnemius muscle from animals in each group was removed, and the expression of muscle atrophy markers (MAFbx and MuRF1) and myosin heavy chain isoforms were analyzed by reverse transcription-polymerase chain reaction. No significant change in body weight occurred between control groups and collagen-induced RA mice at week 10. However, bovine type II collagen induced a dramatic increase in clinical score or paw thickness at week 10 (p<0.01). Concomitantly, the expression of the muscle atrophy marker MAFbx was upregulated in the RA and OA groups (p<0.01). A dramatic reduction in myosin heavy chain (MHC)-$I{\beta}$ was seen in the gastrocnemius muscles from RA and OA mice, while only a slight decrease in MHC-IIb was seen. These results suggest that muscle atrophy gene expression occurred in a fiber type-specific manner in both RA- and OA-induced mice. The present study suggests evidence regarding why different therapeutic interventions are required between RA and OA.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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