To improve conventional yeast one-hybrid screening, we have developed an efficient mammalian one-hybrid system that allows rapid isolation of com-plementary DNAs which are able to induce human p14$^{ARF}$. tumor suppressor gene. A 1.5 kb promoter region of p14$^{ARF}$ was fused to EGFP to generate ARF promoter-EGFP reporter vector. This reporter plasmid was stably trans-fected into NIH3T3 cells for generation of reporter cell line. When the reporter cell line was infected with E2F-1 together with excess amounts of empty vector, the cells that received the positive modulator were readily identifiable by green fluorescence using FACS. The GFP-positive cells were cloned directly from the cultured cells and expanded in bulk culture. The genomic DNAs from GFP-positive cells were prepared and the CDNA insert in integrated retroviral genome was recovered by PCR using primers annealing to the retroviral vector sequences flanking the insert-cloning site. This system should be useful for efficient screening of expression CDNA libraries in mammalian cells to identify novel upstream regulators for spe-cific genes by one-hybrid interaction.ion.
Yoo, Ran Ji;Lee, Kyochul;Kang, Joo Hyun;Lee, Yong Jin
대한방사성의약품학회지
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제4권1호
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pp.26-31
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2018
Macrophages play a key role in atherosclerotic plaque formation, but their participation has been discerned largely via ex vivo analyses of atherosclerotic lesions. Therefore, we aimed to identify atherosclerosis on noninvasive in vivo imaging using reporter gene system. This study demonstrated that recruitment of macrophages could be detected in atherosclerotic plaques of Apolipoprotein E knockout (ApoE-/-) mice with a sodium iodide symporter (NIS) gene imaging system using $^{99m}Tc-SPECT$. This novel approach to tracking macrophages to atherosclerotic plaques in vivo could have applications in studies of arteriosclerotic vascular disease.
Previously, we have identified 14 putative downstream target genes of Hoxc8 homeoprotein in F9 murine embryonic teratocarcinoma cells through proteomics analysis. Among those, we tested a possibility of a DNA-k type molecular chaperone, Grp78, as a direct downstream target of Hoxc8, by cloning a 2.4 kb upstream region of murine Grp78 into a reporter plasmid and by testing if Hoxc8 can regulate its expression. We observed that Hoxc8 proteins could transactivate the reporter gene, which was affected by small interference RNAs (siRNAs) against to Hoxc8, suggesting that Grp78 is a novel downstream target of Hoxc8 in vivo.
This paper analyzes statistically the relationship between size and balance of text corpus by evaluation of the effect of interview sentences in language model for Korean broadcast news transcription system. Our Korean broadcast news transcription system's ultimate purpose is to recognize not interview speech, but the anchor's and reporter's speech in broadcast news show. But the gathered text corpus for constructing language model consists of interview sentences a portion of the whole, $15\%$ approximately. The characteristic of interview sentence is different from the anchor's and the reporter's in one thing or another. Therefore it disturbs the anchor and reporter oriented language modeling. In this paper, we evaluate the effect of interview sentences in language model for Korean broadcast news transcription system and analyze statistically the relationship between size and balance of text corpus by making an experiment as the same procedure according to varying the size of corpus.
Precisely reliable and quantitative reporters can provide phenotypes that are consistent with research goals in protein expression. Here, we developed an improved reporter mATglu III 5 by directed evolution using a versatile β-glucosidase ATglu derived from Agrobacterium tumefaciens. When expressed in hosts, a vector containing this mutant distinctly showed a colored or fluorescent phenotype, according to the supplemented substrate, without any inducer. Analysis of mATglu III 5 showed it to be fully functional in fusion state with oligomeric proteins, especially under non-induction conditions, thereby offering an alternative to conventional reporters.
본 연구의 목적은 최근 새롭게 텔레비전 뉴스 프로그램 제작에 등장한 VJ의 영상표현상의 특성을 카메라 기자의 영상표현상의 특성과 비교 분석하고 그 차이에 대한 함의를 알아보기 위한 것이다. 본 연구에서 분석대상으로 선정한 텍스트는 2005년 7월부터 동년 12월까지 6개월간 KBS2TV를 통해 방송된 '뉴스타임' 120회분으로, 뉴스의 내용별, 취재원별 분류과정을 거쳐 샘플로 추출된 영상을 대상으로 화면의 크기, 카메라워크, 샷의 지속시간, 카메라 앵글 등이 어떻게 표현되고 있는지를 분석하였다. 연구결과 텔레비전 뉴스 프로그램에서 VJ는 사회분야, 경제분야, 문화분야를 중심으로 한 연성뉴스를 주로 취재하고, 정치분야, 건강과학분야 등 사회적으로 민감하고 국민생활 전반에 큰 영향을 미칠 수 있는 경성뉴스의 취재에는 철저히 소외되고 있으며, 영상표현상의 특성으로는 VJ가 카메라기자에 비해 현장 밀착형 취재방식을 선호하여 그룹샷보다 원샷을 자주 사용하고, 기동성과 역동성 있는 카메라워크를 선호하여 팔로우잉과 줌을 지나치게 자주 사용하며, 몰래카메라 형식의 로우앵글을 선호하는 특성을 가지고 있는 것으로 나타났다.
Objectives : We investigated the effects of Sopungsungi-won(Shu!engshunqiyuan) (SSEx1, SSEx2) to treat the metabolic syndrome by the molecular mechanism of regulation of PPAR and modulation of mitochondrial MCAD, VLCAD mRNA expression. Methods : Mouse NMu2Li liver cells and C2C12 skeletal muscle myogenic progenital cells were transiently transfected with expression plasmids for PPAR(PPAR${\alpha}$, PPAR${\delta}$), a luciferase reporter gene construct containing 3 copies of the PPRE from the rat acyl-CoA oxidase gene and ${\beta}$-galactosidase gene. Cells were treated with several concentrated kinds of SSEx1, SSEx2 at the initial time of culture and analyzed PPAR${\alpha}$, PPAR${\delta}$ reporter gene activity using spectrophotometer (405 nm). Total RNA was extracted from SSEx1, SSEx2 and measured mRNA levels of mitochondrial MCAD, VLCAD. Representative RT-PCR bands are shown. Results : 1. SSEx1 increased the expression of PPAR${\alpha}$ reporter gene activities at 0.1 ${\mu}$g/ml (p${\mu}$g/ml (p<0.05), SSEx2 at 0.1 ${\mu}$g/ml (p${\mu}$g/ml (p<0.05) significantly in NMu2Li liver cell lines. 2. SSEx1 increased the expression of PPAR${\alpha}$ reporter gene activities at 1 ${\mu}$g/ml (p${\mu}$g/ml (p${\alpha}$ reporter gene activities in C2C12 skeletal muscle cells. 4. SSEx1 increased the modulation of mitochondrial MCAD mRNA expression (p<0.05) significantly in NMu2Li liver cell lines. 5. SSEx1, SSEx2 both increased the modulation of mitochondrial MCAD mRNA expression (p<0.05) significantly in C2C12 skeletal muscle cells. Conclusions : These results show the SSEx1, SSEx2 can be used as therapeutic agent for metabolic syndrome and it's molecular mechanisms of PPAR more contribute to the activation of PPAR${\alpha}$ then PPAR${\delta}$ reporter gene activities and it's total RNA more contribute to the modulation of mitochondrial MCAD then VLCAD mRNA expression.
Phenxoy compounds, 2,4-dichlorophenol acetoxyacid (2,4-D) and 2,4-dichlorophenol (DCP), are widely used as a hormonal herbicide and intermediate for pesticide manufacturing, respectively. We have previously reported the potential of these compounds as androgenic endocrine disruptors using in vivo Hershberger assay and in vitro reporter gene assay.(omitted)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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