• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권1호
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• pp.119-126
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• 2015

Among the various human growth factors, epidermal growth factor (hEGF, consisting of 53 amino acids) has various effects on cell regeneration, stimulation of proliferation, migration of keratinocytes, formation of granulation tissues, and stimulation of fibroblast motility, which are important for wound healing. Owing to their multiple activities, EGFs are used as pharmaceutical and cosmetic agents. However, their low productivity, limited target specificity, and short half-life inhibit their application as therapeutic agents. To overcome these obstacles, we fused the collagen-binding domain (CBD) of Vibrio mimicus metalloprotease to EGF protein. About 18 or 12 amino acids (aa) (of the 33 total amino acids), which were essential for collagen-binding activity, were combined with the N- and C-termini of EGF. We constructed, expressed, and purified EGF (53 aa)-CBD (18 aa), EGF (53 aa)-CBD (12 aa), CBD (18 aa)-EGF (53 aa), and CBD (12 aa)-EGF (53 aa). These purified recombinant proteins increased the numbers of cells in treated specimens compared with non-treated specimens and control hEGF samples. The collagen-binding activities were also evaluated. Furthermore, CBD-hybridized hEGF induced phosphorylation of the EGF receptor. These results suggested that these fusion proteins could be applicable as small therapeutic agents in wound tissue healing.

• 한방재활의학과학회지
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• 제30권3호
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• pp.1-21
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• 2020

Objectives This study was designed to evaluate the bone regeneration effects of Sintongchukea-tang (SC) on rib fractured rats. Methods Rats were randomly divided into 5 groups (normal, control, positive control, SC low [SC-L] and SC high [SC-H]). All groups were subject to fractured rib except normal group. Normal group received no treatment at all. Control group was orally fed with phosphate buffered saline, and positive control group was medicated with tramadol (20 mg/kg). SC group was orally medicated with SC (50 mg/kg, 100 mg/kg) once a day for 14 days. The fracture healing process was observed by x-ray, micro CT and fracture tissue slide was observed by immunohistochemical staining. We analysed levels of transforming growth factor-β1, Ki67, alkaline phosphatase (ALP), runt-related transcription factor 2 (Runx2), receptor activator of nuclear factor kappa-β, tartrate resistant acid phosphatase (TRAP) and analysed levels of Osteocalcin in plasma. We measured levels of aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), ALP, blood urea nitrogen (BUN) and creatinine in plasma, for hepatotoxicity and nephrotoxicity of SC. Results Though X-ray and micro-computed tomography, more callus formation was observed and bone union was progressing. Through Hematoxylin and Eosin, callus formation was increased compared to the control group. Runx2 level at SC-H was significantly increased and TRAP level at SC-L was significantly decreased compared with the control group. AST, ALT, ALP, BUN and creatinine were not statistically different from the control group. Conclusions As described above, SC promoted fracture healing by stimulating the bone regeneration factor. And SC shows no hepatotoxicity and nephrotoxicity. In conclusion, it seems that SC helps to promote fracture regeneration and it can be used clinically to patients with fracture.

• 미생물학회지
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• 제23권4호
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• pp.265-270
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• 1985

Brevibacterium flavum과 Corllnebac ter ium glutamicum세포로부터의 원형질쳐l 형성과정, 형성된 원형질체의 미세구조, 이들 원형질체간의 융합 및 세포벽 재생을 투과전자현미경을 사용하여 관찰하였다. 원형질쳐1의 형성과 정은 특이하게 관찰되었다. 즉, penicillin G와 lysozyme의 작용을 받아 세포벽의 한 부위가 파괴되어 생긴 細孔응 통하여 원형질이 빠져나가 구형의 원형질체를 형성하였닥 융합과정에서는 원형질체들이 서로 접촉하여 접촉부꾀 를 형성하고 이어서 이 부위의 셰포막이 얼부 소실되며 양 원형질쳐1간에 내부의 울질들이 이동하였다 융합 원 행질체들은 비융합 원형질체에 비하여 세포벽의 재생이 다소 더디게 일어나는 것으로 관찰되었으며, 융합 원형질 쳐l들이 비융합 원형질체들 보다 그 크기가 월등히 컸다.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권5호
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• pp.323-327
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• 1998

페튜니아에서의 안토시아닌 생합성 경로는 하나의 중요한 유전적인 모델시스템으로 연구되어 왔다. 본 연구에서는 이 경로에 대한 유전자를 연구하기 위하여 CaMV 35S promoter와 가지로부터 분리된 flavonoid 3',5'-hydroxylase cDNA를 pBI121 플라스미드에서 fusion gene 시스템을 만들었다. 형질전환된 페튜니아를 얻기 위한 최적조건이 페튜니아 절간을 IAA 0.2 ㎎/mL, BA 3 ㎎/mL를 혼용한 MS배지에서 얻었다. 효과적인 형질전환을 위하여 페튜니아 절간을 IAA 0.2㎎/L BA 3㎎/L를 혼용한 BM배지에서 Agrobacterium tumefaciens를 접종하기 전에 절편체를 preculture하였다 형질전환체는 50㎎/L kanamycin과 cefotaxim 300㎎/L을 포함하는 배지에서 선발하였다. PCR과 Southern hybridization분석에 의하여 형질전환체를 검증하였다.

• 폴리머
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• 제38권3호
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• pp.364-370
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• 2014

망막색소상피(RPE)는 건강한 망막을 유지하는데 중요한 역할을 하고 RPE의 퇴화는 많은 망막질병을 유발한다. RPE 이식은 최근 망막 퇴화에 대한 가능성 있는 치료법으로 제시되고 있다. RPE 세포를 안전하게 이식하기 위해서는 지지체가 필요하므로 독특한 기계적 성질과 생체적합성을 갖는 실크를 사용하여 필름을 제조하였다. 실크필름의 FTIR, 접촉각 및 생분해성을 측정한 후, RPE 세포를 실크필름에 파종하여 그 영향을 확인하였다. MTT 분석, SEM, 면역형광염색, RT-PCR을 통해 세포의 부착, 생존도, 형태유지, 특이적 mRNA의 발현을 분석하였다. 본 연구에서는, 실크필름에 배양한 RPE 세포의 부착, 증식 및 표현형 유지가 뛰어남을 확인함으로써 실크필름의 망막 재생을 위한 조직 공학적 지지체로의 응용 가능성을 제시했다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권1호
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• pp.12-19
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• 1999

Biopolymer를 생산하는 Bacillus subtilis K-1과 유당 이용능이 있는 Bacillus coagulans를 융합시켜 획득된 융합주에 의해 생산된 biopolymer의 특성 변화, 생산성 향상의 연구의 일환으로 두균주의 융합을 시도하였고 융합주의 특성을 조사하였다. 원형질체 융합은 33% PEG(Mw. 6,000), 1% PVP, 10 mM $CaCl_2$이 함유된 fusion fluid(FF)에서 5분간 반응하였고, 항생제가 함유된 선별배지에 중층 후, 3일간 배양했을 때 Bacillus subtillus coagulans 변이주 들간의 융합빈도는 $4.6{\times}10^{-5}{\sim}1.8{\times}10^{-7}$이었다. 융합주의 세포특성 검토에서 분리된 모든 융합주의 segregation 비는 $1{\sim}6%$로 나타나 유전적으로 안정하였고, 각 균주가 요구하는 영양 요구성 marker와 항생제의 함유배지에서 생육이 확인되었다. 주요 융합주의 DNA함량은 모균주보다 $1.6{\sim}2.7$배 높게 나타났다. 융합주의 전자현미경 관찰에서두 모균주는 간상체로서 두꺼운 세포벽과 이중막을 확인할 수 있었고 원형질체 형성과정에서 팽융된 세포에서 구형의 원형질체 방출이 이루어지고, 원형질체 융합과정 및 형성된 융합체에서 융합체내 전형적인 vesicle이 확인되었으며 모균주보다는 큰 형태의 세포를 확인할 수 있었다.

• 폴리머
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• 제36권6호
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• pp.768-775
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• 2012

해조류로부터 얻어지는 알지네이트는 캡슐화된 세포의 생존율에 긍정적인 영향을 끼치며 살아있는 세포를 신속하게 포접하여 캡슐화할 수 있어 세포이식을 위한 생체재료 분야에 널리 쓰인다. 탈미네랄화된 골분(DBP)은 천연 뼈조직으로부터 유래되어 조직과의 반응정도가 낮고 항원성 또한 낮아 임상에 적용되어 사용되어 왔다. 알지네이트에 비율별 DBP을 포함시켜 연골세포를 파종한 뒤 미세캡슐을 제조한 후 MTT 분석을 통하여 세포의 부착 및 증식률을 관찰하였고 glycosaminoglycan(sGAG)와 콜라겐 함량 측정과 연골세포의 특정유전자 표현형을 확인하기 위하여 PCR을 실시하였다. 또한 연골세포가 파종된 알지네이트 미세캡슐을 누드마우스의 피하에 이식한 뒤 적출하여 면역화학적 염색을 실시하였다. 실험 결과 1%의 DBP를 함유한 알지네이트 미세캡슐에서 가장 높은 세포 증식률을 보였고 표현형 유지에도 긍정적인 영향을 미치는 것을 확인하였다. 이번 연구 결과를 토대로 알지네이트와 DBP를 이용한 미세캡슐을 제조함으로써 DBP내의 성장인자와 알지네이트의 상호작용으로 인하여 연골세포의 성장에 긍정적인 영향을 미쳐 생체공학적 지지체로 적합할 것으로 예상된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권3호
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• pp.279-283
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• 1985

L-Lysine생산균주 육종의 한 방법으로, Brevibacterium flavum과 Corynebacterium glutamicum의 이속간 원형질체 융합을 실시하였으며, 이들 균주에 대한 원형질체 형성과 재생의 최적 조건을 조사하였다. 그 결과, Corynebacterium glutamicum ATCC 21514 S의 경우, lysozyme을 300$\mu\textrm{g}$/$m\ell$의 농도로 처리하였을 때 12시간 경과 후 99%의 원형질체 형성과 12%의 재생율을 보였으며, Brevibacterium flavum ATCC 21528R 은 lysozyme을 400$\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 처리했을 때 12시간 경과 후 99%의 원형질체 형성과 10%의 재생율을 보였다. Brevibacterium flavum ATCC 21514 S 의 이속간 원형질체 융합에서 PEG 농도별 실험을 하여본 결과 PEG 6,000, 30% (w/v)를 사용함으로써 재생세포당 1.2$\times$$10^{-5}$의 재조합 빈도를 얻었으며, 여기에서 얻어진 재조합주들 가운데 KR$_{43}$ 주는 L-lysine 생성능이 모균보다 12% 증가를 나타내었으며, as-partokinase 효소 활성 측정치는 모균보다 13% 높은 것으로 나타났다.

• 한국식품과학회지
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• 제23권5호
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• pp.561-567
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• 1991

본 연구는 Brevibacterium flavum ATCC 14067 및 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032간의 protoplast fusion을 행하여 L-methionine의 생산성을 검토하고 발효조건을 개선하기 위하여 연속배양을 행하였다. N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG) $500{\mu}g/ml$로 처리하였으며 B. flavum K-104($Thr\;Met\;Km^{r}\;Et^{r}\;Sm^{r}\;Tm^{r}$)와 C. glutamicum B-70($Thr\;Hos\;Km^{r}\;Et^{r}\;Sm^{r}\;Tm^{r}$)의 변이주를 분리하였다. 이들 변이주에 $500{\mu}g/ml$의 lysozyme을 처리하였을 때 원형질체 형성을 및 재생율은 각각 99% 및 $64{\sim}66%$를 나타내었으며 융합 빈도는 3% PVP를 함유한 35% PEG 용액에서 $3.5{\times}10^{5}$을 나타내었다. Sodium alginate로 고정화시킨 융합주 BFCG 37은 72시간 회분배양에서 0.89g/l의 methionine을 생산하였고 연속배양에서는 $18.75mg/^{1}hr\;^{1}$의 L-methionine를 안정적으로 생산할 수 있었다.

• 한국균학회지
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• 제15권2호
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• pp.80-86
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• 1987

자연계에서 섬유소분해능이 우수한 균을 분리하였고 섬유소분해능을 더욱 증진시키기 위한 기초단계로서 그 분리균주의 원형질체 생성과 융합의 최적조건을 조사하였다. 토양에서 채취한 시료로부터 섬유소분해능력이 우수한 Aspergillus sp., Penicillium sp., Trichoderma sp., 3균주를 분리 동정하였고 산업적으로 유용한 균주이며 cellulase activity가 있는 Aspergillus niger를 비교균주로 선택하여 각각의 효소활성도를 비교 조사한 결과, Aspergillus sp.가 가장 좋은 효소활성도를 보였으며 그 다음 Penicillium sp., Trichoderma sp., 그리고 Aspergillus niger 순이었다. 효소활성도가 가장 좋은 Aspergillus sp.에 자외선$(12erg/sec/mm^2)$을 4 분 30초 동안 조사하여 영양요구성 변이주를 유도, 분리하였다. 세포벽분해효소로는 pH6.0에서 ${\beta}-glucuronidase$가 효과적이었고 그 효소를 농도별로 처리해본 결과 5, 000unit/ml가 최적농도이었다. 재생률은 삼투안정제로 0.6M KCI을 사응하여 pH6.0에서보았을 때 야생형은 7.0%, met. 영양요구주는 7.5%, arg. 영양요구주는 5.2%이있다. 영양요구성변이주간의 원형질체융합에 필요한 PEG는 분자량이 6,000인 것이 좋았으며 최적농도는 $30^{\circ}C$ 이었다. 이때 융합율은 1.2%까지 획득하었다.