This study evaluated the effect of freezing rate on the quality characteristics of pork loin to establish an objective standard for rapid freezing. To generate various freezing rates, three air flow rates (0, 1.5, and 3.0 m/s) were applied under three freezing temperatures (-20℃, -30℃, and -40℃). Based on the results, freezing rates ranged from 0.26-1.42 cm/h and were graded by three categories, i.e, slow (category I, >0.4 cm/h), intermediate (category II, 0.6-0.7 cm/h) and rapid freezing (category III, >0.96 cm/h). Both temperature and the air flow rate influenced the freezing rate, and the freezing rate affected the ice crystal size and shear force in pork loin. However, the air flow rate did not affect thawing loss, drip loss or the color of pork loins. In the comparison of freezing rates, pork belonging to category II did not show a clear difference in quality parameters from pork in category I. Furthermore, pork in category III showed fresh meat-like qualities, and the quality characteristics were clearly distinct from those of category I. Although the current standard for rapid freezing rate is 0.5 cm/h, this study suggested that 0.96 cm/h is the lowest freezing rate for achieving meat quality distinguishable from that achieved with conventional freezing, and further increasing the freezing rate did not provide advantages from an energy consumption perspective.
In concrete incorporating high volume ground granulated blast-furnace slag that has frozen at early age, to evaluated the results of resistance to freezing and thawing is very difficult because the hydration of the concrete increases over the duration of rapid freezing and thawing test. Hence, the dynamic modulus of elasticity of specimens after freezing and thawing will be favorable results unless the hydration effect is taken into consideration. In this study, a method of evaluating to the resistance to freezing and thawing of concrete subjected freezing at early age, in which the effect of hydration is modified for its increase during rapid freezing and thawing test, is investigated.
BACKGROUND: In korea, sweet persimmon(Diospyros kaki) cultivation is front to abiotic stresses such as frost damage at fruit maturing stage. The cold and rapid freezing stresses are most damaging to fruit production which is most actively progressed in late fall. This study was performed to evaluate the validity of chlorophyll fluorescence imaging(CFI) technology to determine the degree of frost damage in sweet persimmon fruits. METHODS AND RESULTS: The sweet persimmon fruits were measured separately for each treatment(15, 30, 60 minutes) at 24 hours after treatment(HAT) rapid freezing. A CFI FluorCam (FC 1000-H, PSI, Czech Republic) was used to measure the fluorescence images of the fruits. In rapid freezing for 15 minutes, photochemical parameters were not changed. However, in rapid freezing for 30 and 60 minutes, photochemical parameters were lowered. Especially, $F_m$, $F_v$, $F_v/F_m$ and ${\Phi}PSII$ values were declined under rapid freezing. CONCLUSION: In our study, it was clearly indicated that the rapid freezing could be a stress in sweet persimmon fruits. The CFI analysis and its related parameters are applicable as a rapid assessing technique for the determination of frost damage.
The effects of seeding method and optimum time for freezing embryos according to the developmental stages on embryo survival rates after rapid freezing were determined using the FDA-test. The summarized results are as follows : 1. In the rapid freezing of embryos, the sucrose added medium together with Co-seeding or non-seeding showed the FDA scores of 4.67 and 4.20, respectively, but, raffinose addition obtained FDA scores of 4.27 and 3.97. 2. The developmental stage of embryos at freezing was most critical on the survival of embryos after thawing. Higher FDA scores were obtained in the order of blastocyst stage(4.94), morula stage(3.82) and ealy stage(2.65) in sucrose added medium. The same trend was observed in the raffinose added medium with an order or 4.91, 4.47 and 2.32. 3. Microscopic study of embryo before freezing and post-thawing indicated that the embryo showed shrinkage within 5 minutes after the embryo was transfer to the freezing medium. When thawed embryo was tranfered to the dilution medium, swelling of the embryo was observed and there after it reshrank indicating the removal of cryoprotectant from the embryo. The size of the embryo recovered to the original state when it was moved into a PBS-solution.
본 연구의 목적은 구강상피세포를 배양한후 각기 다른 조건의 냉동 보존법으로 6일간 보존시 각각의 세포의 활성도를 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity의 방법을 이용하여 비교 평가하기 위함이다. 각 실험군당 $1\times10^6$개의 세포를 다음의 방법으로 6일간 냉동 보존한다. Freezing container에 담아 $1^{\circ}C$/min의 냉동속도로 $-70^{\circ}C$까지 냉동 후 $-196^{\circ}C$에 냉동하여 보관한 일반 냉동 보존군, 세포를 바로 $-196^{\circ}C$의 액화질소에 넣어 냉동한 급속 냉동 보존군, $4^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 $-0.5^{\circ}C$/min속도로 서서히 냉동시킨 뒤 $-196^{\circ}C$에 냉동한 저속 냉동 보존군, 2 Mpa, 3 Mpa의 압력을 가하고 $-0.5^{\circ}C$/min속도로 $4^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 서서히 냉동시킨 뒤 $-196^{\circ}C$에 냉동한 2 Mpa, 3 Mpa압력 저속 냉동 보존군으로 나누었다. 6일 후 냉동되었던 세포를 급속 해빙하여 각각의 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity 값을 측정하여 비교하였다. 실험 결과 2 Mpa혹은 3 Mpa의 압력을 이용한 저속 냉동법이 저속 냉동법 및 급속 냉동법 보다 세포 활성도에 있어 우수한 경향을 나타내었다.
This study was carried out to investigate On in vitro fertilization, survival rate and developmental rate of rapidly frozen bovine immature oocytes. Immature oocytes cultured for 1, 12, 24, 48 hours in 20% FCS + TCM-199 medium and thereafter rapidly freezing-thawed oocytes inseminated with capacitated sperm. The immature oocytes following dehydration by 1.5M DMSO + 2.0M glycerol + 0.25M sucrose + TCM 199 media + 20% FGS were directly plunged into liquid nitrogen and thawes in 3$0^{\circ}C$ water. Rapid freezing embryos co-cultured in 20% FCS + TCM-199 media containing hormones(21U/mL PMSG, 21U /mL hGG and 1 $\mu$g /mL 17$\beta$-estradiol) and cumulus cells(1 x 105-6 cells). Survival rate was defined as development rate on in vitro culture or FDA-test. The results are summarized as follows ; 1. The in vitro maturation and fertilization rate of immature bovine oocytes on in vitro maturation period(1, 12, 24, 48 hrs) before rapid freezing4hawed were 57.1%, 45.7%, 37.1%, 25.7% and 40.0%, 31.4%, 20.0%, 11.4%, respectively. 2. The survival rate of immature bovine oocytes on in vitro maturation period(1, 12, 24, 48 hrs) before rapid freezing-thawed were 33.3%, 26.7%, 20.0%, and 10.0%, respectively. The survival rate of rapid freezing4hawed immature oocytes was significantly lower than that of non-freezing oocytes. 3. The survival rate of rapid freezing4hawed excellent and good bovine embryos co-cultured in 20% FCS + TCM-199 media containing hormones(PMSG, hCG, 17$\beta$-estradiol) and cumulus cells 4 to 5 hrs and 20 to 24 hrs were 35.0%, 15.0% and 25.0%, 15.0% and 40.0%, 20.0% and 30.0%, 15.0%, respectively. The survival rate of embryos co-cultured in TCM-199 media containing hormones and cumulus cells was significantly higher than that of non co-culture.
Objective: This study was carried out to compare the effects of the stepwise exposure treatments on the morphological normality, fertilization and blastocyst formation rate of the frozen-thawed mouse mature oocytes by vitrification or ultra-rapid freezing and to use as a fundamental data for the cryopreservation of human oocytes. Materials and Methods: The morphological normality and fertilization rates of the vitrified and ultra-rapid frozen mouse mature oocytes after three-stepwise exposure treatments (1step, 3step and 5step) were observed. After choosing the 3step exposure treatment groups, we observed the morphological normality and fertilization, blastocyst formation rate of the vitrified and ultra-rapid frozen mouse mature oocytes. Results: The morphological normality and fertilization rates of the vitrified mouse mature oocytes after three-stepwise exposure treatments (1step, 3step and 5step) were 75%, 85%, 88% and 58%, 61 %, 54% respectively. There were no significant differences among treatments(p>0.05). The morphological normality and fertilization rate of the control was 92% and 65%. There were no significant differences in fertilization rate among control and treatments (p>0.05). The morphological normality and fertilization rates of the ultra-rapid frozen mouse mature oocytes after three-stepwise exposure treatments (1step, 3step and 5step) were 83%, 83%, 84% and 75%, 63%, 56% respectively. There were no significant differences among treatments (p>0.05). The morphological normality and fertilization rate of the control was 95% and 67%. There were no significant differences among control and treatments (p>0.05). The morphological normality and fertilization rate of the vitrified or ultra-rapid frozen mouse mature oocytes after 3step exposure treatment were 69% and 75%, respectively. The blastocyst formation rate was 60% and 57%. The results did not differ significantly between vitrification and ultra-rapid freezing (p>0.05). Conclusion: As known in the above results, there were no significant differences in the fertilization and blastocyst formation rate of the frozen-thawed mouse mature oocytes by vitrification or ultra-rapid freezing among the control and treatments. It is suggested that vitrification and ultra-rapid freezing method were effective for the cryopreservation of mouse mature oocytes.
This study were carried out to investigate the effective concentration of cryoprotectant agents and sucrose by one-step straw method, and to determine the optimum thawing temperature and equilibration time of frozen bovine embryos. The bovine embryos following dehydration by cryoprotective agents and a various concentration of sucrose were directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 3O$^{\circ}C$ water. Survival rate was defined by FDA test. The results are summarized as follows : 1. The survival rate of bovine embryos thawed after rapid freezing in the freezing medium containing a various kinds of cryoprotective agents added 0.25M and O.50M sucrose were 28.6% and 25.0%, 35.1% and 31.6%, 32.4% and 24.4%, 34.2% and 28.2%, 18.9% and 17.6%, 14.7.% and 21.6%, respectively. 2. The survival rate of bovine embryos thawed after rapid freezing in the freezing medium containing a various concentration of sucrose added 1.5M and 2.OM glycerol, i.5M and 2.OM DMSO and 1.5M and 2.OM propanediol were 22.9~37.8%, 2O.7~31. 3%, 19.2~30.0% and 17.2~25.0%, respectively. 3. The temperature thawed at 2$0^{\circ}C$ after rapid freezing of bovine embryos resulted in a significantly higher embryos survival rate than did at 3$0^{\circ}C$ and 35$^{\circ}C$. 4. The equilibration time on the survival rate of bovine embryos was attained after short period of time(2.5~5 min.) in the freezing medium higher than long period of time (1O~20 min.).
The studies on the carried out to investigate the effective concentration of cryoprotectant agents and sucrose by one-step straw method of bovine embryos. The follicular oocytes were cultured in TCM-199 medium containing 10 IU/ml PMSG(Sigma, USA), 10 IU/ml hCG(Sigma, USA), 1$\mu\textrm{g}$/ml $\beta$-estradiol(Sigma, USA) and 10% FCS for 24~48 hrs in incubator with 5% CO2 in air at 38.5$^{\circ}C$ and then matured oocytes were again cultured for 12~18 hrs with motile capacitated sperm by preincubation of heparin. The bovine embryos following dehydration by cryoprotective agents and various concentrations of sucrose were directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 3$0^{\circ}C$ water. Survival and in vitro developmental rate was defined as devellpmental rate on in vitro culture or FDA-test. The results are smmarized as followes : 1. The high in vitro developmental rates of bovine frozen embryos after rapidly thawed in freezing medium was attained 2.0M glycerol, 2.0M DMSO, 1M or 2.0M propanediol. 2. The high in vitro developmental rates of bovine frozen embryos after rapidly thawed in freezing medium was obtained single cryoprotectant(6.7~17.4%) than mixed cryoprotectants(6.7~16.7%). 3. In vitro developmental rate of bovine embryos after rapid frozen-thawing in the freezing medium added 0.25M and 0.50M sucrose were higher cleavage rate than those of sucrose concentration of 0.75M and 1.00M. 4. The freezing methods on in vitro developemental rates of bovine embryos was attained slow freezing method(9.70~15.6%) higher than rapid freezing method(9.4~13.3%).
Studies were conducted to seek reasonable methods of rapid freezing of mouse embryos using liquid nitrogen. The effects of the cryoprotectants concentration and the substitution of raffinose to sucrose in freezing and dilution medium on mouse embryo survival rates were determined using the FDA-test. The summarized results are as follows : 1. When 0.3M of sucrose was added into the freezing and dilution medium, FDA scores of embryos were 1.48(1.5M), 3.81(3.0M) and 4.10(4.5M). Higher FDA scores of embryos were obtained in 3.0M and 4.5M glycerol concentrations (P<0.05). 2. With the addition of 0.3M raffinose to the freezing and dilution medium, FDA scores of embryos did not significantly differ between glycerol levels ; 3.97(1.5M), 4.11(3.0M) and 3.54(4.5M). Higher scores of embryos existed in 3.0M glycerol concentration. 3. Concentration of sucrose or raffinose in freezing and dilution medium affected FDA scores of embryos. When sucrose concerations of 0.3, 0.5 and 1.0M were added to the freezing medium, FDA scores of embryos were 3.12, 2.38 and 0, respectively. However, when the same concentrations of raffinose were added to freezing medium, the FDA scores were 4.21, 2.91 and 0. In both cases, better FDA scores of embryos were attained in 0.3M of sucrose or raffinose (P<0.01).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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