Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were used to survey genetic variability among 34 Botrytis cinerea isolates from nine different host plants in Korea. For RAPD analysis, 115 arbitrary decamer primers were initially screened for polymorphic major DNA bands with 11 representative B. cinerea isolates. Eleven primers that initially detected polymorphisms were tested a second time with additional 23 isolates of B. cinerea as well as one isolate of Botrytis squamosa as an outgroup. The RAPD analyses revealed that all isolates except one showed different molecular phenotypes. Dendrograms obtained from dissimilarity matrices using the unweighted paired group method of arithmetic means (UPGMA) showed the 36.4% to 90.0% similarity among all B. cinerea isolates. The B. squamosa isolate showed the least similarity to all B. cinerea isolates. The cluster analyses indicated no correlation among all the characteristics examined including molecular phenotypes, host and geographic origins, year of isolation, or pathogenicity. The RAPD data suggest that a high level of genetic variation exists among Korean populations of B. cinerea and it seems to be caused by heterokaryosis among preexisting molecular phenotypes.
Molecular typing of pathogenic microorganisms is important for epidemiological investigation of infectious disease outbreaks. In this study, we applied Universal Rice Primers (URP) that were originated from repetitive sequences in rice chromosomal DNA to random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis of pathogenic bacteria such as Escherichia coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella sp. Of the twelve URP primers examined to date, seven primers (URP-2, -3, -4, -5, -6, -8, and -9) generated reproducible and polymorphic PCR products ranging from 1 to 13 bands. One of them, URP-6 was very effective in differentiating seven E. coli serotypes, seven L. monocytogenes clinical isolates, and eight Salmonella subspecies (ssp.) serovars. The results thus indicate that RAPD analysis using URP primers might be useful in typing bacterial pathogens including E. coli, L. monocytogenes, and Salmonella strains.
For preliminary molecular typing, PCR-based fingerprinting using random amplified polymorphic DNA (RAPD) is the method of choice. In this study, 14 bacterial strains were isolated from different Korean food sources, identified using 16S rRNA gene sequencing, and characterized through RAPD-PCR. Two PCR primers (239 and KAY3) generated a total of 130 RAPD bands, 14 distinct PCR profiles, 10 polymorphic bands, one monomorphic band, and four unique bands. Dendrogram-based analysis with primer 239 showed that all 14 strains could be divided into seven clades out of which clade VII had the maximum of seven. In contrast, dendrogram analysis with the primer KAY3 divided the 14 L. citreum strains into four clades out of which clade IV consisted of a maximum of 10 strains out of 14. This research identified and characterized bacterial populations associated with different Korean foods. The proposed RAPD-PCR method, based on sequence amplification, could easily identify and discriminate the lactic acid bacteria species at the strain-specific level and could be used as a highly reliable genomic fingerprinting tool.
Genetic analysis was conducted on newly isolated coliphages form soil by using a RAPD assay. From the initial result, the coliphages were turned out to be different form one another but were closely related to .psi..lambda. due to the fact that they shared the samed RAPD maker in which other T phage testings failed to show. By using the primers EC01 or EC02, a fast genetic mutation of .psi.C1 was found by producing specific RAPD markers on the phages from the first filial progeny to the second filial progeny. When we made a RAPD assay with combined primers (EC01, EC05 and EC08), the genetic mutation was again confirmed in .psi.C1. The assay detection showed mutations in other coliphages such as .psi.C2 and .psi.C3 by revealing specific RAPD bands among different progeny phages, where genetic instability of the coliphages in implied.
For identification of genuine and misuse samples of Hu-Bak medicines, an morphological characters, and RAPD (random amplified polymorphic DNA) were performed. In this study, three samples were collected, of which two were genuine and one was misuse sample. Genuine samples of 'Hu-Bak' were Magnolia obovata Thunberg and Magnolia officinalis Rehder et Wilson. Misuse samples was Machilus thunbergii S. et Z. In the morphological characters, M. obovata Thunberg and M. officinalis Rehder et Wilson were similar, but M. thunbergii S. et Z. was different with cortex, cambium, and fibrous layer. The result of RAPD analysis, seven primers can distinguish between genuines and counterfeit samples of Hu-Bak medicines.
황해와 남해산이 각각 50마리씩 총100마리의 조피볼락 (Sebastes schlegeli)의 DNA를 혈액으로부터 추출하여 30개의 무작위 primer를 사용한 RAPD(random amplified polymorphic DNAs)-PCR (polymerase chain reaction) 방법으로 분석하였다 genomic DNA의 독특한 특징들이 그 어종군의 특징을 알아내기 위해서 사용되었다. 30개의 primer 중에서 7개의 primer로 부터 증폭된 전체 산물 (307) 중에서 약 67.4%인 207개의 다형성의 산물 (polymorphic products)이 나타났고, 1개의 primer당 약 2.7개의 다양성의 산물 (polymorphic bands)이 확인되었다. 황해산의 경우 bandsharing analysis를 통해서 볼 때 0.22로부터 0.63까지의 bandsharing value가 확인되었고, 이러한 수치는 0.39$\pm$0.02의 평균값을 나타내었다. 황해산과 남해산 2개체군의 RAPD-PCR산물의 전기영동적 분석을 통해서 볼 때 황해산 조피볼락의 개체들 사이에서 변이가 약간 높게 나타났지만 매우 유사한 특징을 나타내었다. 그러나 일부 개체에서 적은 수이지만 polymorphic bands가 확인되었다. 더 많은 개체군과 다른 연구방법을 통한 연구가 있어야 되겠지만, 이러한 결과는 RAPD 방법을 통하여 2 지역산 조피볼락의 유전적 차이를 어느 정도 확인할 수 있는 가능성을 제시해 주고 있다.
Phylogenetic relationship and DNA polymorphism among local populations of the Asparagus cochinchinensis have been investigated based on nuclear ribosomal DNA ITS sequences and RAPD analysis in Korea. In result, two genetically distinct groups of local populations except Geoje were recognized by the phylogenetic tree both in rDNA-ITS and RAPD. One was called 'western coast group' that includes the Buan 1, 2 and Taean and the other was 'southern coast group' that includes Haenam, Yeosu and Namhae. Thus, the geographical relationship of Asparagus cochinchinensis was two well-typified clades. These results suggest that the geographical genetic variation of Asparagus cochinchinensis is closely connected with the slow and long period of propagation via the coast in Korean Peninsula.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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