바실러스 서브틸리스 유전체에서 여러 환경의 적응에 이용할 것으로 보이는 새로운 small RNA를 찾는 시도로 다음과 같은 방식으로 유전체를 검색하였다. 첫째로 유전자들 사이에 존재하는 DNA 서열을 대상으로 전사인자들인 PerR, OhrR, Fur, Zur의 인식서열을 조사하였고, 둘째로 인자 비의존성 전사종결 부위를 조사하였다. 이들 조사에서 전사인자의 위치와 전사종결부위가 300 bp 내외에서 가까이 존재하는 후보 DNA 서열을 대상으로 전사인자 부위에서 전사촉진자의 서열이 발견되는지를 조사하였다. 이 결과 PerR 5개, Fur 2개, OhrR, Zur에서 각각 1개의 새로운 small RNA로 추정되는 부위가 발견되었다.
해산(海産) 패류(貝類) 6종(種)(대합, 모시조개, 피조개, 굴(토화(土花)), 소라, 전복)의 중간선(中腸腺)(간(肝))에 대(對)하여 RNA와 DNA의 함량(含量)을 측정(測定)하고 또한 phenol법(法)으로 RNA를 추출(抽出) 분리(分離)하여 그 nucleotide 조성(組成)을 분석(分析)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1) 각시료(各試料)(모시 조개 제외(除外)) 중장선(中腸腺)의 탈지분말(脫脂粉末) 100mg 중(中) RNA의 함량(含量)은 굴이 8.74mg으로서 가장 많고 순차(順次)로 전복 7.92mg, 대합 6.82mg, 피조개 4.62mg이며, 소라는 2.16mg로서 가장 그 함량(含量)이 낮다. 이와 같이 RNA 함량치(含量値)는 굴, 전복, 대합에 있어서 rat간(肝)의 RNA 함량(含量)(4.0mg)보다 높은 값을 나타 내고 있다. 2) 상기(上記) 시료중(試料中) DNA 함량(含量)은 굴이 1.03mg로서 가장 많고, 대합 0.89mg, 피조개 0.70mg, 소라 0.60mg이며 전복은 0.22mg로서 그 함량(含量)이 가장 낮다. 전복을 제외(除外)하고는 모두 rat간(肝)의 함량(含量)(0.34mg) 보다 $2{\sim}3$배(倍)의 DNA 함량(含量)을 보여주고 특(特)히 굴은 RNA 및 DNA의 함량(含量)이 모두 가장 높다. 한편 소라와 전복에 있어서 RNA/DNA 함량비(含量比)가 3.6과 36.0으로서 큰 차이(差異)를 나타내고 있다. 3) 이들 패류(貝類)의 중장선(中腸腺)(간(肝))의 RNA nucleotide 조성(組成)(mole ratio)은 다음 표(表)와 같다. 즉(卽) 해산(海産) 패류(貝類) 6종(種)에 있어서 중장선(中腸線) RNA의 Pu/Py는 $1.02{\sim}1.31$로서 그 폭(幅)이 넓고 G+C/A+U는 $0.97{\sim}1.51$로서 그 차이(差異)가 심(甚)하다. 그러나 G+U/A+C는 $1.26{\sim}1.46$으로서 1.3에 가까우며 패류(貝類)에 있어서는 G+U/A+C가 종(種)의 특이성(特異性)이 있는 것으로 사료(思料)되는 바이다. 한편 패류(貝類)의 RNA nucleotide 조성(組成)은 고등식물(高等植物), 세균(細菌), 조류(藻類) 및 고등동물(高等動物)의 그것과 경향(傾向)이 다르다.
분열형 효모에서 Rqh1은 Top3과 함께 vegetative growth에 필수적이다. $rqh^-$ 돌연변이는 DNA damaging agent에 민감성을 보이는데 이때, 부적절한 유전자 발현, 세포 신장, 염색체의 불안전성, 비정상적인 다중격막, 발아의 결핍을 포함한 넓은 범위의 표현형을 보인다. rqh1-overexpression cell 역시 rqh1 deletion mutant에서 보이는 DNA damaging agent 민감성을 관찰할 수 있다. 논문은 nmtl promoter를 가지는 PREP vector에 Rqhl이 과발현 할 때 나타나는 DNA damaging agent 민감성를 보상하는 유전자를 찾아 $rqh1^+$의 기능을 알아보는 것이다. 여기서 보상능이 보이는 rqh156, rqh172 두 개의 돌연변이를 골라냈다. rqhl deletion mutant의 DNA damaging agent 민감성은 rqh156, rqh172의 발현에 의해 보상 되어지는 것을 확인하였다.
분만전후 4주동안 Sqraque Dawley 암컷 쥐에게 양적으로 식이를 제한했다. 임의로 먹인 control group의 1일평균성취량의 1/2의 시중사로를 식이제한 group에게 주었다. Deficient I group에서는 분만후부터 이유시까지 식이제한을 했고, deficient II group에서는 임신 15일부터 이유시까지 계속 식이제한을 했다. 식이제한 group의 체중과 뇌무게는 control group의 새끼쥐보다 유의적으로 낮았지만, 체중에 대한 뇌무게의 비는 control group보다 높았다. 이유시에는 두 식이제한 group사이에서 체중과 뇌무게의 유의적인 차가 나타났다. 뇌의 DNA, RNA 및 단백질함량은 control group보다 식이제한 group에서 유의적으로 낮았지만 RNA/DNA, 뇌무게/DNA 및 단백질/DNA은 control group보다 식이제한 group에서 높았다. 이것은 새끼쥐뇌에서 세포분열이 세포의 크기성장보다 이 기간중의 어미쥐의 식이제한에 의해 더욱 심한 영향을 받았음을 시사해준다. 뇌의 DNA와 RNA는 두식이제한 group간에 유의적인 차를 나타내지만, 단백질의 경우는 유의적인 차를 나타내지 않았다.
Bacillus subtilis의 glutamyl-tRNA synthetase(GluRS)는 대장균에서 발현될 때 숙주세포의 $tRNA_1^{Gln}$에 glutamate를 잘못 아실화하여 독성을 나타내는 것으로 추정되고 있다. 이러한 B. subtilis GluRS를 대장균에서 과발현 시키기 위하여 B. subtilis 168 균주의 chromosomal DNA에서 GluRS의 유전자(gltX)를 PCR을 이용하여 증폭하고 T7 promoter에 의해 발현이 조절되는 pET11a expression vector에 클로닝하였다. 이 재조합된 pEBER plasmid DNA로 T7 RNA polymerase를 갖는 대장균 NovaBlue(DE3)에 형질전환하였다. 형질전환된 대장균에 IPTG를 처리하여 과량 생성된 GluRS 단백질은 ammonium sulfate 분별침전 후 EPLC를 이용한 Source Q column anion exchange chromatography, Superdex 200 column gel filtration, Mono Q column anion exchange chromatography로 정제하였다. 정제된 B. subtilis의 GluRS 분자량은 약 55 kDa이었으며 효소의 활성도는 조효소액에 비해 18배로 증가하였다.
RNase Ⅲ, RNase E, 및 RNase P가 각각 홀로 또는 복합적으로 결핍되는 E. coli 돌연변이 균주들 내에서의 박테리오파지 T4 tRNA의 전구 RNA로 부터의 합성을 연구하였다. RNase E$^-$균주에서는 9S RNA로 볼 수 있는 한 RNA 띠가 축적되었으며 RNase$ P^-$균주에서는 6S 이중띠의 하부띠가 축적되었다. RNase Ⅲ$^-$균주에서는 T4 tRNA 유전인자 떼(cluster)에 의하여 코드되는 (coded) tRNA$^{Gln}$의 생성이 심하게 억제되며 T4 DNA에 의하여는 코드되지만 T4 tRNA 유전인자 떼에 의하여 코드 되는 6S 이중 띠의 상부 띠는 RNase Ⅲ$^+$균주의 경우에 비하여 더 크게 축적된다. 그러나 6S 이중 띠의 상부 띠 RNA와 tRNA$^{Gln}$ 사이에는 precursor-product 관계가 없다고 판단되며 RNase Ⅲ이 precursor RNA을 가수분해 절단 한다고 생각하는 개념을 지지할만한 근거가 없음을 지적할 수 있다.
casein, soy protein, corn gluten의 세가지 단백질 식이를 임신기 및 수유기 동안 어미쥐에게 섭취시킨후 출생시부터 생후 21 일까지의 새끼쥐의 세포 발달을 관찰한 결과는 다음과 같다. 1) 새끼쥐의 출생시 체중은 corn gluten군이 case군에 비하여 매우 유의적으로 낮았고 수유기 중에도 그 경향은 계속되었다. 2) 출생시 새끼쥐의 기관별 무게는, 뇌와 콩팥은 실험군간 유의적 차이가 없었으며 간의 무게는 corn gluten군이 casein군에 비하여 유의적으로 적었다, 그러나 출생 3일이후 뇌, 간, 콩팥의 무게는 생후 21일까지 corn gluten 군이 casein에 비하여 유의적으로 적었으므로 아미노산 조성의 블균형이 기관의 무게를 감소시킴을 나타내었다. 3) 세포의 수를 짐작할 수 있는 DNA함량은 세 기관에서 일반적으로 casein군, soy protein군, corn gluten군의 순서였으나 뇌의 경우는 출생 14일에 , 간의 경우는 14일과 21일에 casein군에 비하여 corn gluten 군이 유의적으로 적었다. 그러므로 아미노산 조성의 불균형에 따른 영향은 세포 발달과정에서 세포수에 큰 영향은 아니지만 간 세포수를 감소 시킴을 알 수 있었다. 4) 총 단백질과 RNA 함량은 뇌의 경우 생후 3일 이후 corn gluten군이 casein군에 비하여 유의적으로 적었으며 100 mg 젖은 무게당 함량은 유의적 차이는 없었다. 간에서는 총 RNA 함량은 corn gluten 군이 출생시부터 유의적으로 적었고 총단백질 함량은 출생 3일이후 매우 유의적으로 적었다. 그러나 100 mg 젖은 무게당 두 지표의 함량은 21일에 RNA 함량이 유의적으로 적었을 뿐 실험군 간 차이가 없었다. 그러므로 기관별 세포의 크기는 세 실험식이간에 차이가 없었다.
박테리오 파아지 T7 RNA 중합효소는 다른 RNA 중합효소와 비교하여 볼 때 보조인자 없이 전사를 진행하는 하나의 subunit로 구성된 RNA 중합효소이다. 전사 진행 단계 중에서 T7 RNA 중합효소의 전사연장을 연구하기 위해 biotin이 결합된 DNA 주형을 streptavidin bead로 고정시킴으로서 T7 RNA 중합효소의 진행과정을 관찰할 수 있었고, 이러한 기작을 이용하여 일련의 활성을 가지는 가장 안정한 전사연장복합체들을 얻을 수 있었다. 전사 연장체들은 16번 염기 위치로부터 18번 염기의 위치까지 방사선 동위원소가 표지되어 있으며 이들 표지된 전사연장복합체들은 단계별로 합성하여 22-40개 핵산잔기들이 합성된 전사연장복합체들을 얻을 수 있었다. 이와 같은 전사연장복합체들을 PTH 전사종결 부위가 있는 주형으로 사용하여 야생형 및 R173C 돌연변이 RNA 중합효소를 이용하여 전사연장복합체를 제조하여 비교한 결과 PTH 전사종결에 둔감한 R173C 돌연변이 중합효소의 경우 야생형에 비해 PTH 전사종결부위를 지난 위치에서도 전사연장복합체가 생성되었다.
Antisense PG 유전자 형질전판 토마토로부터 자식시켜 얻은 종자를 kanamycin 내성을 이용하여 5세대까지 분리, 육성하여 antisense PG 유전자가 안정적으로 고정된 식물체를 얻었다. 이들 식물체에는 genomic DNA gel blot 분석으로 antisense PG 유전자가 안정적으로 유전되며 northern blot 분석을 통하여 antisense RNA가 발현됨을 확인하였고, 또한 antisense RNA에 의한 endogenous PG 유전자의 발현 저해를 분석하였다. Antisense PG 유전자 형질전환 성숙 토마토내 PG 효소 활성이 비형질전환 성숙 토마토에 비하여 37-65% 수준으로 저하되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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