The genetic variation of random amplified polymorphic DNA (RAPD) patterns of genomic DNAs was investigated in dioecious plant Rumex acetosa L., which carries different sex chromosome complements in female (2n=12A+XX) and male (2n=12A+XY$_1$Y$_2$). One hundred and twenty random primers consisted of 10-mer were used for PCR amplification. Polymorphic bands were found in 24 primers. Specific bands for female and male were 16 and 18, respectively. Especially, a band of 1,440 bp from the OPC-10 primer was male specific. These sex specific RAPD markers are used to understanding the sex determination mechanism in plants.
Fifty-one extended-spectrum-${\beta}$-lactamase(ESBL) producing Klebsiella pneumoniae strains were isolated from national university hospitals. All K. pneumoniae strains showed resistance to broad-spectrum antibiotic and most of them presented resistance to amikacin, gentamicin and ciprofloxacin. The results of amplified polymorphic DNA (RAPD) pattern for randomly isolated fifty-one strains were as follows; both twenty-one strains from Chungnam National University hospital and ten strains from Chungbuk National University hospital showed RAPD type Ia and Ib. However, twenty strains isolated from Gyeongsang National University hospital belonged to RAPD type IIa and IIb. All isolates were divided into four molecular types and showed high level of genetic diversity. These results suggested that RAPD analysis provided a rapid and simple method for analysing genotypes of ESBL.
Agromonia pilosa Ledeb. has been used as a medicinal plant in traditional folk remedy. There are few reports on classification, physiology, ecology and morphological studies of Agromonia pilosa L. in Korea. Therefore, advanced approaches on study and development with this plant would be done urgently. Present stndy was carried out to gain basic information on genetic resources and variation with collected domestic landraces through RAPD analysis in Agromonia pilosa L. Forty two collections of Agromonia pilosa L. from nation-wide area including USA one were analyzed by RAPD test. Molecular marker size by amplified DNA band pattern ranged from 300 to 2,100bp. Among the collection, two landraces of Hadong and Cheonghak-dong showed close relation in genetic similarity. Minimum and maximum value by matrix of 1-F among 26 collected landraces were figured out as 0.365 and 0.827 showing mean value for 0.624, respectively. Those landraces were classified into two groups with cluster analysis by Nei and Li's formula from RAPD-analyzed values, and considerable genetic differences were recognized between two groups.
Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) assay was used to identify seven typical Lentinula edodes (Berk.) Pegler strains isolated in Korea. Twenty primers from OPA-01 to OPA-20 were applied to generate the recognition of L. edodes strains. Out of 20 primers, nine primers showed efficient RAPD patterns to classify the 7 strains tested, but the rest eleven primers were not useful to be used. Even though there was no single primer that could classify all of the strains, any combination of two primers among the nine primers could identify the strains tested. Thus, RAPD assay turned out to be very precise method for classifying L. edodes strains.
Proceedings of the Korean Aquaculture Society Conference
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2003.10a
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pp.34-34
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2003
한국산 선발계통 및 일본산 양식계통과 이들 두 계통간 잡종 참돔 집단의 유전적 특성을 분석하기 위하여, RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) marker를 탐색하였다. 10개의 염기로 이루어진 200개의 random primer 분석을 통하여 polymorphic pattern을 나타내는 23개의 random primer를 선발하였으며, 각 primer의 재현성을 확인하였다. 이들 중 OPA-11 primer는 크기가 각각 600 bp, 650 bp 및 750 bp 인 3개의 DNA 단편에 의하여 4개의 genotype을 나타냈으며, 각 genotype의 빈도는 집단간차이를 보였고, 한국산 선발계통 집단에서는 4개의 genotype이 모두 발견되는 반면, 일본산 양식계통 및 일본산 양식계통을 포함한 교배집단에서는 특정 genotype만 발견되었다. OPA-11 primer 유래의 polymorphic DNA 단편을 cloning하고 염기서열을 결정하였으며, SCAR (Sequence Characterized Amplified Region) primer를 제작하고 분석하였다. 본 연구는 참돔집단의 유전적 특성 파악 및 집단 구별에 RAPD marker를 활용하였으며, 참돔 육종시 형질 및 기능관련 DNA marker 탐색에 적용하기 위하여, 이후의 연구에서는 SCAR과 RFLP 분석에 RAPD marker를 이용하여 100% 정확도를 갖는 RFLP maker를 찾고, MAS (Marker-Assisted Selection)에 적용하고자 한다.
Salmonella infections cause the diseases in poultry and some zoonotic Salmonella can be transmitted to human through poultry products, resulting in food-borne disease. This study was conducted to obtain some useful information for the control of salmonellosis in human. Twenty four Salmonella spp were isolated from poultry carcasses, and they were examined with several methods such as serotyping, antimicrobial resistance test and random amplified polymorphic DNA(RAPD) to identify their characteristics. In serotyping test of 24 strains S enteritidis was 17 (70.8%), followed by S schwarzengrund 3 (12.5%), untyped strain 4 (16.7%). In the results of antimicrobial resistance test, 23 (95.8%) isolates were resistant to at least one antimicrobial agent, generating eight different resistance patterns. In RAPD analysis using URP-6 primer to differentiate Salmonella isolates within a serotype, 4 serogroups were divided into 10 RAPD types: 5 types in S enteritidis, 2 types in S schwarzengrund and 3 types in the remainder.
Rapid detection of foodbome pathogens is becoming increasingly important. The requirement for faster, more reliable tests has lead to the development of a wide range of rapid methods. Among these methods, the use of systems based on nucleic acid based detection has been increasing since they offer advantages of reduction in test time and more reliable detection or identification. Random Amplification Polymorphic DNA(RAPD) method has been used to fingerprint foodbome microorganisms; Listeria monocytogenes. In this study, 10-mer primer OPG-13(5'-CTCTCCGCCA-3') was used to generate RAPD-PCR for detection of pathogenic L. monocytogenes of Listeria spp. Among 20 primers tested, OPG-13 showed on acceptable result for the differentiation of a pathogenic Listeria from non-pathogenic microorganisms. Pathogenic Listeria, L. monocytogenes(ATCC 15313, 19111, 19112, 19113) showed two bands for 700 bp and 1,500 bp while non-pathogenic bacteria, L. ivanovii, L. grayi, L. murrayi, L. innocua, L. welshimeri, and L. seeligeri had only one band sizing from 2,000 to 2,300 bp. This RAPD method proved to be a valuable to gain important information on sources of pathogenic bacteria in food industry.
This experiment was carried out to analyze genetic characteristics and to develop the breed specific DNA marker for Cheju-native horse. If this marker contains high repetitive sequences, it is possible to convert a RAPD marker of interest into a single-locus PCR marker called a sequence characterized amplified region(SCAR). Twenty six Cheju-native horse and Fifty thoroughbred genomic DNA were pooled and PCR. were accomplished using 800 random primers. Comparing the pooled DNA from Cheju-native horse and thoroughbred, we found 9 primers which identified markers present in the pooled DNA from breed but absent in the other breed. Among 9 random primers, 6 primers were thoroughbred specific and 3 primers were Cheju-native horse specific. Testing individual horse revealed that 5 marker showed the similar band pattern between Cheju-native horse and Thoroughbred. However, 4 marker were wholly absent in breed while present in the other breed. UBC $126_{3500bp}$, UBC $162_{500bp}$, and UBC $244_{1200bp}$ was detected only Thoroughbred and UBC $562_{560bp}$was detected Cheju-native horse, respectively. After determining of the cloned breed-specific fragment sequence, we designed the SCAR-primers and carried out PCR. Compared to random primer, RAPD-SCAR primer didn't show significantly higher specific band. However, RAPD analysis is useful for genetic characterization of Cheju-native horse.
To induce the cellulolytic variants of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus), basidiospores were irradiated at the dose of $1kGy{\sim}20kGy$ of gamma-ray. After irradiation, activities of extracellular enzymes were determined by the method of MUF residue and genetic similarity was observed by RAPD analysis of variants. Three variants of 2KG-1, 2KG-2 and 20KG-1 were clarified as highly cellulolytic isolates. It seemed that the difference of genetic similarity among variants have derived from gamma-ray radiation. It is suggested that 3 cellulolytic variants induced by gamma-ray in this experiment could play a useful role to reuse cellulosic bioresources.
A portion of ribosomal internal transcribed spacer (ITS) 2 was sequenced from the samples of Pseudo nitzschia (P. deticatissima, P. multiseries, P. pungens and P. subfraudulenta) to investigate the genetic characteristics by measuring tile magnitude of genetic diversity and the degree of similarity coefficient using random amplified polymorphic DNAs (RAPD)-PCR patterns. The phylogenetic trees inferred from the genetic distance analyses showed the placement of P. delicatissima formed a quite long distance from p. P. multiseries, P. pungens, and even P. subfraudulenta. The phylogenetic tree from RAPD patterns showed that P. multiseries and P. pungens had dissimilarity coefficient of 0.31, while P. delicatissima and three species of Pseudo-nitzschia had that of 0.81. It is likely thought that the genetic position of P. delicatissima formed far from P. multiseries, P. punges, and P. subfraudulenta. These results imply that ITS2 region is expected to support a useful molecular characters for recognizing at the species level and for even discriminating P. multiseries from P. pungens. RAPD method also will be used to differentiate the species of Pseudo-nitzschia in a short time.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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