Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis is based on the amplification of random DNA segment using a single arbitratrary primer. For typing Salmonella spp., polymorphic DNA patterns identified by this method can be used. To select the primers for RAPD typing Salmonella spp., the performances of 20 primers were compared by analyzing 16 Salmonella spp. reference strains. Reproducible electrophoresis patterns were obtained. Among the 20 primers tested, 4 primers (A, OPG04, OPG10, OPL03) showed better differentiation than the others. At the time discrimination index, band clarity, band number and difficulty of band scoring were considered. These primers will be useful for typing Salmonella spp. in the future. Curretly, we are under investigation for the RAPD typing of contaminated Slmonella spp. for the risk analysis of pork processing plant using the primers.
Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) assay was used to identify seven typical Lentinula edodes (Berk.) Pegler strains isolated in Korea. Twenty primers from OPA-01 to OPA-20 were applied to generate the recognition of L. edodes strains. Out of 20 primers, nine primers showed efficient RAPD patterns to classify the 7 strains tested, but the rest eleven primers were not useful to be used. Even though there was no single primer that could classify all of the strains, any combination of two primers among the nine primers could identify the strains tested. Thus, RAPD assay turned out to be very precise method for classifying L. edodes strains.
Abeliophyllum distichum Nakai (O1eaceae) is a monotype of Korea and is distinguished from related genus Forsythia Vahl by the morphological characters such as fruit shape, flower color and etc. Even though several intraspecific taxa were reported according to the color of flowers and shape of fruits, there have been many controversals on the taxonomic indentity and status of rank on those taxa. In the present study, we performed the RAPD analysis to delimit the infraspecific taxa of Abeliophyllum distichum and to investigate the genetic polymorphism and relationships among 12 populations. 212 scorable RAPD markers with 70 common markers were found from the PCR reactions with 16 random oligoprimers and were analyzed by Nei's genetic distance. From 0.108 to 0.321 of genetic variations were showed among the taxa. Some regional groups instead of same taxa were clustered from the phonogram of UPGMA analysis. Also, we could not find distinct lineage among intraspecific taxa. The result from RAPD analysis supported that the infraspecific taxa of Abeliophyllum distichum might be the individual variations and treated as the same taxa. RAPD analysis was very useful to confirm the high gene pool with diverse genetic polymorphism among Abeliophyllum distichum populations.
Phylogenetic relationships were examined for 17 taxa of Lycoris by RAPD analysis. The length of the amplified DNA fragments ranged from 300 bp to 1,700 bp. 57 scorable RAPD markers were observed from PCR reactions with five random oligoprimers. The analysis by UPGMA sepatated the examined taxa of Lycoris into were clusters. First group was comprised of ten taxa of L. chinensis var. sinuolata, L. sanguinea var. koreana, L. uydoensis, L. flavescens, L. radiata var. pumila, L. radiata, L. squamigera, L. chejuensis, L. aurea and L. guangxiensis, second group of L. haywardii, L. sprengeri, L. rosea, L. straminea and L. houdyshii, third group of outgroup of Narcissus tazetta var. chinensis and Crinum asiaticum var. japonicum. From the viewpoint of cytological characters such as polyploidy and karyotype, the RAPD analysis was very useful to show the relationship among the intraspecific taxa of Lycoris.
Fifty-nine accessions of 23 species in genus Rosa were collected, and 15 accessions of Rosa rugosa were collected throughout 10 regions of Korea. Their genetic relationship was investigated by using morphological analysis and RAPD marker. The morphological analysis was measured for 7 quantitative and quantified for 4 qualitative traits. RAPD analysis obtained a total of 959 polymorphic bands by using twenty primers. Morphological analysis classified most according to the rose section system except for several species. The cluster analysis of genus Rosa based on RAPD data could identify the subgenus $Platyrhodon$ and $Eurosa$. The subgenus $Eurosa$ separated five sections; $Gallicanae$, $Cinnamomeae$, $Pimpinellifoliae$, $Synstylae$ and $Caninae$. Correlation analysis between morphological and RAPD analysis showed low significance ($r$ = 0.35). The accessions of R. rugosa belonged to the section $Cinnamomeae$ clustered into three groups at genetic distance ranging from 0.28 on the base of RAPD analysis. In conclusion, the genetic relationship of the genus Rosa was consistent to the previously reported rose section system, and domestic collections of $R.$$rugosa$ were separated from 3 groups on the base of RAPD marker.
Phylogenetic relationships among species in Araliaceae were analyzed using PCR-RAPD and sequence of ITS region of nuclear ribosomal DNA based on samples collected in Korea. RAPD analysis showed various polymorphic bands which were able to differentiate species and genus, and specific bands showing variations among individuals within species. Cluster analysis using gel images revealed high molecular variability within species of Aralia eleta. No significant variation was found among cultivated species of Panax ginseng, but they showed high genetic differences with wild type of the species. In ITS analysis, specific sequences for each genus and species were observed and these were allowed to differentiate species and genus. Phylogenetic analysis using ITS sequences showed that Acanthopanax and Kalopanax had a close relationship, and Aralia and Panax are monophyletic, but genus Hedera is different species from other species in family Araliaceae in this study. The results showing close relationship between genera Aralia and Panax were also observed in RAPD analysis. Contrary to the results of RAPD analysis of Panax ginseng, sequence analysis of ITS showed no significant difference between wild mountain ginseng and cultivated species of P. ginseng. Also, both RAPD and ITS analysis of P. ginseng showed no significant genetic variability among cultivation sites. Results indicate that P. ginseng cultivating in Korea is monophyletic. The molecular analysis used in this study agreed on classification using morphological feature. These results suggest that molecular techniques used in this study could be useful for phylogenetic analysis of Araliaceae.
Natural products used for oriental medicine often come from various geographical sources, after several different distribution channels. Therefore some form of quality control procedure is required to safeguard naturl products for prescriptions purposes. To achieve this, systematic apprroaches such as morphological examination, microscopic analysis of powdered herbs and chemical analysis can be carried out. However, to ensure absolute criteria for quality assurance of natural products, DNA fingerprinting method such as RAPD(Random amplified polymorphism DNA) analysis can be used for authentication of natural products for authenticatin of natural products. In this study, warious oligonucleotide primers will be synthesized for the detection of RAPD markers and also parameters of affecting PCR(Polymerase Chain Reaction) in the detection of RAPD markers of rare and high-priced natural products will be studied with genomic DNA of chosen samples.
KIM Woo-Jin;KIM Kyung-Kil;LEE Jeong-Ho;PARK Doo-Won
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
/
v.36
no.3
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pp.317-320
/
2003
Morphologically similar fish species were subjected to the random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis using universal rice primer (URP). The fish species tested were sea basses (Lateolabrax japonicus and L. maculatus), eels (Anguilla japonica, A. bicolor bicolor, A. rostrata, and A. anguilla), and flounders (Limanda yokohamae and L. herzensteinin). Highly reproducible RAPD patterns were observed with several potential species-specific markers. The results indicate that RAPD technique using URP is useful for distinguishing fish psecies in a rapid manner.
Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) was performed to define the genetic variation and relationships of Artemisia capillaris. Fifteen populations by the distributions and habitat were collected to conduct RAPD analysis. RAPD markers were observed mainly between 300bp and 1600bp. Total 72 scorable markers from 7 primers were applied to generate the genetic matrix, and 69 bands were polymorphic and only 3 bands were monomorphic. The genetic dissimilarity matrix by Nei's genetic distance (1972) and UPGMA phenogram were produced from the data matrix. Populations of Artemisia capillaris were clustered with high genetic affinities and cluster patterns were correlated with distributional patterns. Two big groups were clustered as southern area group and middle area group. The closest OTUs were GW2 and GG1 in middle area group, and GB1 from southern area group was clustered with OTUs in middle area group. RAPD data was useful to define the genetic variations and relationships of A. capillaris.
RAPD analysis was performed from four host-specific toxin (HST) producing Alternaria, i.e., A. kikuchiana, A. mali, a. longipes and A. Longipes and A. alternata f. sp. lycopersici, nonpathogenic A. alternata and A. brassicicola to assess their phylogenetic relationship. DNA polymorphism was detected among species (pathotypes) of HST producing Alternaria by PCR amplification and differentiation of the species was recognized by RAPD analysis. Primer OPA-02 was the most profitable among 7 notificated primers for differentiation of the HST producing Alternaria species. UPGMA analysis of the RAPD bands from alternaria spp. revealed that HST producing Alternaria and nonpathogenic a. alternata are closely related.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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