국내 콩에서 발생하는 세균병해인 불마름병, 들불병, 세균점무늬병, 세균갈색점무늬병의 다중 진단을 위한 PCR 방법을 요약하면 다음과 같다. 1. 콩에 발생하는 각각의 세균들은 서로 다른 박테리오신(bacteriocin) 이나 파이토톡신(phytotoxin)을 생산하는데 이와 관련한 유전자를 목적으로 하여 진단프라이머를 설계하였다. 2. 불마름병은 glycinecin A, 들불병은 tabtoxin, 세균점무늬병은 coronatine과 세균갈색점무늬병은 syringopeptin을 목적유전자로 하여 다중 진단프라이머 조합을 설계하였다. 3. 1차 선발로 각각의 균주에 대한 단일 진단 프라이머를 선발하였으며, 여기선 선발된 21개의 프라이머들을 조합하여 4종 다중진단프라이머 선발을 위한 2차 선발에 이용하였다. 최종적으로 280 bp의 불마름병, 355 bp의 세균갈색점무늬병, 563 bp의 들불병과 815 bp의 세균점무늬병으로 구성된 다중진단 프라이머 조합이 개발되었다. 4. 선발된 4종 다중 진단 프라이머 조합의 경우 다른 세균들과의 비특이적 반응이 있는지 확인하기 위한 3차 선발을 거쳐 그 특이성을 검증하였다.
한 쌍의 R16-1과 R23-2R primer를 이용한 PCR에 의해 증폭된 16S와 23S rDNA 사이의 rDNA spacer 부위의 다형성들이 Pseudomonas avenae, P. glumae, P. fuscovaginae, P. syringae pv. syrngae, Xanthomonas oryzae pv. oryzae, X. oryzae, Xanthomonas herbicola 등 벼 종자전염성 51개 균주의 구분을 위하여 적용되었다. 증폭산물은 820∼950bp의 크기였으며, 각각의 종에 특이적이었고 구분이 가능하였다. Pseudomonas species의 증폭산물은 P. avenae는 950bp, P. glumae는 850bp, P. fuscovaginae는 770pb 및 P. syringae pv. syringae는 1,240, 1,100 및 820bp로 특이적이었다. P. avenae와 P. glumae의 국내균주들은 다형성에 있어 종내 변이는 없었다. X. oryzae pv. oryzae의 860bp와 X. oryzae pv. oryzicola의 890, 440 및 370bp의 이차산물에서 Xanthomonas species의 종내에서 균주에 관련없이 단일화된 다형성을 보였다. CXO 211을 제외한 모든 국내 균주는 a형에 속한 반면 하나의 국내 균주를 포함하여 4개 균주는 b형이었다. E. herbicola의 spacer 부위 증폭은 여러 개의 band를 보였으며, 증폭상은 각각 동일하였고, strain간의 종내 변이는 없었다. 본 실험 결과에 의하여 16S와 23S rDNAdp R16-1과 R23-2R primer를 이용하여 PCR 증폭된 spacer 다형성의 구별은 종자전염성 세균의 신속한 구별에 이용될 수 있을것이다.
Lee, Young Sun;Kim, Gyoung Hee;Koh, Young Jin;Zhuang, Qiguo;Jung, Jae Sung
The Plant Pathology Journal
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제32권2호
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pp.162-167
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2016
Pseudomonas syringae pv. actinidiae, the causal agent of canker in kiwifruit, can be divided into three biovars (biovars 1, 2, and 3). Strains belonging to biovar 1 produce phaseolotoxin and were isolated in Japan and Italy before 2008. Strains of biovar 2 produce coronatine instead of phaseolotoxin and have been isolated only in Korea. Strains belonging to biovar 3 produce neither phaseolotoxin nor coronatine and are responsible for the global outbreak of bacterial canker of kiwifruit in recent years. The biovar 3-specific primer set was developed in a previous work. In this study, two sets of PCR primers specific to strains of biovars 1 and 2, respectively, were developed based on random amplified polymorphic DNA analyses. Primers PsaJ-F and PsaJ-R produced a 481-bp region with genomic DNA of biovar 1 strains, whereas primers PsaK-F and PsaK-R amplified a 413-bp region present only in the genome of biovar 2 strains.
Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa) causes bacterial canker disease in kiwifruit. Antibacterial activity of plant essential oils (PEOs) originating from 49 plant species were tested against Psa by a vapor diffusion and a liquid culture assays. The five PEOs from Pimenta racemosa, P. dioica, Melaleuca linariifolia, M. cajuputii, and Cinnamomum cassia efficiently inhibited Psa growth by either assays. Among their major components, estragole, eugenol, and methyl eugenol showed significant antibacterial activity by only the liquid culture assay, while cinnamaldehyde exhibited antibacterial activity by both assays. The minimum inhibitory concentrations (MICs) of estragole and cinnamaldehyde by the liquid culture assay were 1,250 and 2,500 ppm, respectively. The MIC of cinnamaldehyde by the vapor diffusion assay was 5,000 ppm. Based on the formation of clear zones or the decrease of optical density caused by these compounds, they might kill the bacterial cells and this feature might be useful for managing the bacterial canker disease in kiwifruit.
Kang, Ji Eun;Jeon, Byeong Jun;Park, Min Young;Kim, Beom Seok
The Plant Pathology Journal
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제36권6호
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pp.608-617
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2020
The type III secretion system (T3SS) is a key virulence determinant in the infection process of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 (Pst DC3000). Pathogen constructs a type III apparatus to translocate effector proteins into host cells, which have various roles in pathogenesis. 4-Hydroxybenozic acid and vanillic acid were identified from root extract of Sedum middendorffianum to have inhibitory effect on promoter activity of hrpA gene encoding the structural protein of the T3SS apparatus. The phenolic acids at 2.5 mM significantly suppressed the expression of hopP1, hrpA, and hrpL in the hrp/hrc gene cluster without growth retardation of Pst DC3000. Auto-agglutination of Pst DC3000 cells, which is induced by T3SS, was impaired by the treatment of 4-hydroxybenzoic acid and vanillic acid. Additionally, 2.5 mM of each two phenolic acids attenuated disease symptoms including chlorosis surrounding bacterial specks on tomato leaves. Our results suggest that 4-hydroxybenzoic acid and vanillic acid are potential anti-virulence agents suppressing T3SS of Pst DC3000 for the control of bacterial diseases.
키위 궤양병균인 Pseudomonas syringae pv. actinidiae는 최근 전세계에서 심각하게 경제적 손실을 초래하고 있다. 궤양병균은 우리나라에서 그린키위와 골드키위 품종들을 각각 1988년과 2006년부터 침해해왔다. 최근에는 오염된 수입꽃가루에 의해 유입된 궤양병균 biovar 3 (Psa3)가 주변 키위 재배 농가로 2차감염에 의해 급속하게 확산되어 골드키위와 레드키위 품종들에 대발생하여 피해를 주고 있다. 이 총설에서는 지난 30년간 수행한 연구 업적과 현장 경험 그리고 세계적인 주요 연구 산물들을 기초로 하여 궤양병 발생 회피, 경종적 방제, 궤양병균의 전파 차단, 조기 진단, 전염원 제거, 침입 차단, 약제 방제, 나무 치료 등 다양한 키위 궤양병 관리방법들을 요약하여 장차 키위나무를 건강하게 재배할 수 있도록 농가에서 실용적으로 사용할 수 있는 매뉴얼을 제시하고자 한다.
키위 세균성 궤양병의 원인균인 Pseudomonas syringae pv. actinidiae는 유전적으로 구별되는 다섯 개의 biovar (1, 2, 3, 5, 6)로 나뉘어 진다. 그 중 biovar 3에 속하는 균주가 2008년 이래 전세계적으로 대유행을 일으키고 있다. 본 연구의 목표는 우리나라에서 분리된 biovar 3균주들의 집단 구조를 밝히고 그들의 기원을 추적하는데 있다. 13개의 우리나라 대표 균주와 2개의 중국 균주를 포함하는 15개 biovar 3 균주의 유전적 다양성을 RAPD-PCR로 평가하였다. RAPD 결과 연구에 사용된 균주들은 8개로 나누어져 이들을 subgroup I - VIII로 명명하였다. Subgroups II와 III은 중국 균주로 우리나라에서 발견되지 않았다. 따라서 우리나라 biovar 3 균주는 유전적으로 구별되는 6개의 subgroup (I, IV, V, VI, VII, VIII)으로 구성되어 있음을 알 수 있었다. New Zealand와 Europe균주에 특이적인 각각의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행했을 때 subgroups V와 VI에 속하는 균주가 예상했던 DNA 절편을 증폭시켜 이들이 각각 두 지역에서 유입된 균주임을 시사하였다. 우리나라에서 처음 발견된 biovar 3 균주인 subgroup VIII에 특이적인 프라이머를 개발하여 조사한 결과 이 subgroup 균주는 처음 출현한 이후 더 이상 발견되지 않았다.
키위에 세균성 궤양병을 일으키는 Pseudomonas syringae pv. actinidiae는 유전적 특성과 생산하는 독소에 따라 5개의 biovar (1, 2, 3, 5, 6)로 나누어진다. 그중 최근 전 세계적으로 유행하고 있는 biovar 3는 2011년부터 국내에서 분리되고 있다. RAPD 분석을 바탕으로 국내에서 분리된 biovar 3 균주는 6개의 subgroup (I, IV, V, VI, VII, VIII)으로 나누어진 바 있다. 본 연구에서는 차등되는 RAPD 밴드의 염기서열로부터 6개 subgroup 각각에 특이적인 SCAR primers를 개발하였다. 각 subgroup에 특이적인 이들 primers를 사용하여 2011-2017에 국내에서 분리한 biovar 3 균주들의 subgroup 분포를 조사하였다. 조사된 54개 균주 중 35개(64.8%)가 subgroup V에, 9개(16.7%) 균주가 subgroup IV, 4개(7.4%)가 subgroup VI, 3개(5.6%) 균주가 subgroup VII, 2개(3.7%)가 subgroup VIII, 그리고 1개(1.9%) 균주가 subgroup I에 속하였다. Subgroups IV, V 및 VI에 속하는 균주들은 각각 중국, 뉴질랜드, 칠레 균주와 연관이 있었다. 이 연구에 따르면 우리나라의 biovar 3 균주들은 유전적으로 다양하며 꽃가루를 통해 외국으로부터 유입된 것으로 추정된다.
Park, Yong-Soon;Jeon, Myeong-Hoon;Lee, Sung-Hee;Moon, Jee-Sook;Cha, Jae-Soon;Kim, Hak-Yong;Cho, Tae-Ju
BMB Reports
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제38권6호
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pp.748-754
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2005
Pseudomonas syringae pv. tomato (Pst) causes a bacterial speck disease in tomato and Arabidopsis. In Chinese cabbage, in which host-pathogen interactions are not well understood, Pst does not cause disease but rather elicits a hypersensitive response. Pst induces localized cell death and $H_2O_2$ accumulation, a typical hypersensitive response, in infiltrated cabbage leaves. Pre-inoculation with Pst was found to induce resistance to Erwinia carotovora subsp. carotovora, a pathogen that causes soft rot disease in Chinese cabbage. An examination of the expression profiles of 12 previously identified Pst-inducible genes revealed that the majority of these genes were activated by salicylic acid or BTH; however, expressions of the genes encoding PR4 and a class IV chitinase were induced by ethephon, an ethylene-releasing compound, but not by salicylic acid, BTH, or methyl jasmonate. This implies that Pst activates both salicylate-dependent and salicylate-independent defense responses in Chinese cabbage.
Chemical control of bacterial canker of kiwifruit caused by Pseudomonas syringae pv. actinidiae was attempted by spraying of streptomycin sulfate ·oxytetracycline WP streptomycin WP streptomycin ·copper hydroxide WP kasugamycin SL kasugamycin·copper oxychloride WP and copper hydroxide WP. The control efficacies of the bactericides were variable depending upon the spraying schedule,. Application of streptomycin WP and streptomycin sulfate·oxytetracycline WP from middle April to early May was found to be the most effective in controlling the bacterial canker. For copper hydroxide WP the spraying from middle January to early February showed the highest control efficacy. Kasugamycin SL was the most effective in controlling the disease by spraying from middle April to early May but it was still relatibvely effective during other spray periods. Foliar application of copper hydroxide WP and copper-antibiotic formulaions after middle April caused severe phytotoxicity. Kasgamycil SL streptomycin WP streptomycin·copper hydroxide WP and copper hydroxide WP were potential bactericides which could substitute streptomycin sulfate·oxytetracycline WP. Selective applications of the bactericides according to their optimum spray time can enhance the control efficacies against bacterial canker of kiwifruit and retard the emergency of resistant strains of P. syringae pv. actinidiae to the bactericides. The optimum spray number of streptomycin sulfate·oxytetracycline WP was 3 times with 15-day-intervals or 4 times with 10-day-intervals. The result suggested that the potential bactericides to bacterial canker of kiwifruit should be also used according to their optimum spray schedules in order to get their highest control efficacies.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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