Pseudomonas aeruginosa strain B5 with antagonistic activity against Phytophthora capsici and Magnaporthe grisea, was isolated from pepper-growing soil. From the culture of P. aeruginosa strain B5 grown on King's medium B, antibiotic substances were purified using XAD-2 column chromatography. XAD-2 eluates inhibited not only the mycelial growth of P. capsid and M. grisea, but also the development of Phytophthora blight on pepper plants. The crude antibiotic substances were further purified by using silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, thin layer chromatography on silica gel plates, and high performance liquid chromatography. Silica gel column chromatogrphy gave good separation of the four antibiotic substances. The pure antibiotics P1, P2, and P3 finally purified by preparative HPLC inhibited the mycelial growth of P. capsici, at concentrations from 7 to 10 $\mu g/ml$. Only P1 and P2 had antifungal activity against M. grisea at 8 $\mu g/ml$. P1 and P3 were highly inhibitory to the mycelial growth of Botryosphaeria dothidea and Botrytis cinerea at relatively low concentrations. However, the three antibiotics had no antifungal activity against Rhizoctonia solani. The chemical structures of these antibiotics are being identified.
생물계면활성제 생성균주, Pseudomonas aeruginosa F722를 이용하여 다양한 배양조건과 배지조성에서 생물계면활성제 생산성을 검토하였다. 질소원과 탄소원을 검토하기 전에는 P. aeruginosa F722의 생물계면활성제 생산량은 0.78 g/l이었다. 하지만, 질소원과 탄소원을 검토한 후에는 생물계면활성제 생산량이 2배 증가한 1.66g/l이었다. 무기질소원으로 $_NH4$Cl 또는 $NaNO_2$를 첨가하였을 때 생물계면활성제 활성에 효과적이었으며 유기질소원으로는 yeast extract 또는 tryptone을 첨가하였을 때 생물계면활성제 활성이 높았다. 이중 무기 질소원으로 0.05% $NH_4$Cl , 유기 질소원으로 0.1% yeast extract를 질소원으로 첨가하였을 때 가장 최적이었다. 탄소원으로 소수성 기질(n-alkane) 또는 친수성 기질(glucose, glycol)을 첨가하여 생물계면활성제 생산량을 조사하였는데 소수성 기질보다는 친수성 기질인 3.0% glucose를 첨가하였을 때 생물계면활성제 생산량이 높았다. 이때의 탄소원/질소원 비율은 17~20이었다. P. aeruginosa F722는 배양조건 3.0% glucose, 0.05% $NH_4$Cl, 0.1% yeast extract, $35^{\circ}C$, pH 7.0, C/N ratio 20, 5 days에서 생물계면활성제 생산량은 1.66g/l이였다. 질소원이 결핍 후 탄소원을 첨가하여 배양하였을 때가 질소원과 탄소원을 함께 첨가하여 배양했을 때보다 생물계면활성제 생산속도 및 균체 생장속도가 높았다. 최적 배양조건하에서 얻어진 배양액의 표면장력은 30mN/m이었다.
Purpose: The purpose of this study was to compare the effect on antibacterial activities and wound healing effect of silver containing dressings with which of Betadine against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa. Methods: One full thickness skin defects in rats(n=72) were developed on the back and were given rise to infection with S. aureus(n=36) and P. aeruginosa(n=36). The 72 mice were divided into 6 groups : Acticoat$^{(R)}$, Aquacel$^{(R)}$-Ag, Medifoam silver$^{(R)}$, Polymen silver$^{(R)}$, Ilvadon$^{(R)}$ and Betadine(control group) dressing groups. Five silver containing dressings and Betadine were assesed on infected wound. Measurement of wound size change, bacterial colonies count and histologic findings was applied. Antibacterial activity was analyzed with bacterial restricted zone in Mueller Hinton agar. Results: On S. aureus, wound size was more decreased in all treated groups as compared with betadine, however Ilvadon$^{(R)}$ was less decreased on P. aeruginosa. In histologic findings, experimental group showed more effective findings than others on S. aureus, however on P. aeruginosa, which was showed similar. Acticoat$^{(R)}$ was best effective in wound healing against S. aureus and P. aeruginosa. The bacterial colonies count was increased in all treated groups except Acticoat$^{(R)}$ as compared with the control group on S. aureus, which was decreased in Acticoat$^{(R)}$ and Ilvadon$^{(R)}$ group on P. aeruginosa. There were not statistical differences. The restricted zone was shown in Mueller - Hinton agar of all groups except Medifoam silver$^{(R)}$ group on S. aureus, which was shown of all groups on P. aeruginosa. There were statistical differences. Conclusion: This study suggests that silver containing dressings may have not better potential than Betadine in assisting management of wounds at risk of infection on S. aureus and P. aeruginosa. However, which have better antibacterial activity on S. aureus and P. aeruginosa.
본 연구에서는 등$.$경유 혼합물을 Pseudomonas aeruginosa F722를 이용하여 분해시킬 때 생분해율에 미치는 생물계면활성제, 화학계면활성제 및 공기 공급량의 영향을 조사하였다. 그 결과, 탄화수소 분해율은 0.01%와 0.15% 농도의 생물계면활제를 첨가하였을 때가 0.05%, 0.1% 및 0.2%농도의 생물계면활제를 첨가하였을 때보다 최고 6.2% 높은 94.3, 94.2% 제거율을 나타냈다. 하지만, 0.15% 생물계면활제를 첨가하였을 때가 0.01% 생물계면활제를 첨가하였을 때보다 탄화수소 분해율이 더 안정적이었다. 그리고 생물계면활성제 (surface tension; 30mN/m)와 화학계면활성제 (Tween 80;39mN/m, detergent;31mN/m)를 0.15% 농도로 첨가하여 배양하였을때, 탄화수소 분해율은 94.2, 93.5, 93.4%로 비슷하였다. 하지만, P. aeruginosa F722의 개체수는 생물계면활성제를 첨가했을 때가 화학계면활성제를 첨가했을 때보다 2배 이상 증가된 19 ${\times}$$10^{7}$ cfu/$m\ell$로 조사되었다. 0.5vvm으로 공기를 공급하면서 교반을 수행하였을 때, 배양 3일 후, 사용균주를 접종하지 않은 공시험에서 탄화수소 분해율은 68.8%였으며, P. aeruginosa F722를 접종하였을 때는 94.8%이었다. 0.5 vvm으로 공기를 공급하였을 때가 공기를 공급하지 않았을 때보다 배양시간이 1/3로 단축되었다. 그리고 교반배양 (3일)과 정치배양 (10일)에서 탄화수소 분해율은 각각 94.8, 93.7%였다.
Shaaban, Mona I.;Abdelmegeed, Eman;Ali, Youssif M.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권6호
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pp.887-892
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2015
Uricase is an important microbial enzyme that can be used in the clinical treatment of gout, hyperuricemia, and tumor lysis syndrome. A total of 127 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were tested for uricase production. A Pseudomonas strain named Ps43 showed the highest level of native uricase enzyme expression. The open reading frame of the uricase enzyme was amplified from Ps43 and cloned into the expression vector pRSET-B. Uricase was expressed using E. coli BL21 (DE3). The ORF was sequenced and assigned GenBank Accession No. KJ718888. The nucleotide sequence analysis was identical to the coding sequence of uricase gene puuDof P. aeruginosa PAO1. We report the successful expression of P. aeruginosa uricase in Escherichia coli. E. coli showed an induced protein with a molecular mass of about 58 kDa that was confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting. We also established efficient protein purification using the Ni-Sepharose column with activity of the purified enzyme of 2.16 IU and a 2-fold increase in the specific activity of the pure enzyme compared with the crude enzyme.
본 연구에서는 유류로 오염된 토양에서 증식배양을 통해 등유 분해 균주 32개체를 순수 분리하였다. 분리한 개체에 대하여 스크린테스트를 통해 고효율 제거 균주를 선별하였으며, 그 결과 Kl4가 kerosene 1,000 mg/L에서 6일간 가장 높은 제거율을 보였다. Kl4는 형태학적, 생리생화학적 테스트, 16S rDNA 및 지방산 분석을 통하여 Pseudomonas aeruginosa로 동정되었다. 위 균주를 사용하여 다양한 생장조건에서의 등유제거를 측정한 결과, 최적분해조건으로 초기 접종 균농도 1.0 g/L (w/v), 등유 1,000 mg/L, 온도 $30^{\circ}C$, pH 7의 조건이 선정되었다. 이 조건으로 K14에 대한 회분식 실험을 실시하였으며, 위 균주는72시간 동안 등유 1,000 mg/L를 78.3% 이상 제거하였다. 또한, 기질농도에 변화를 주어 실험한 결과 저농도의 등유 200 mg/L에 대하여 48시간 동안 95.8%, 고농도의 등유 5,000 mg/L에서 48시간 동안 42% 이상의 제거능을 보여주었다. 위 결과로 보아, K14에 의한 등유의 생물학적 처리는 유류에 오염된 지하수 및 토양에 적용하였을 시, 뛰어난 제거 효능을 보일 것으로 사료된다.
다제내성 P. aeruginosa의 출현과 확산은 전 세계적으로 중요한 문제가 되고 있다. P. aeruginosa에 의한 발병은 일부 몇몇 세포 관련 및 세포외 병독성 인자의 생성에 기인한다. 본 연구에서는 대전지역의 3차 병원에서 분리된 carbapenem 내성 P. aeruginosa를 대상으로 병독성 인자의 분포와 항균제 내성 양상을 조사하였다. 항균제 감수성 시험은 디스크 확산법으로 확인하였고, 병독성 유전자의 분석을 위해 PCR과 염기서열분석을 수행하였다. 또한, 다제내성 P. aeruginosa의 sequence type (ST)은 multilocus sequence typing (MLST)을 통해 확인하였다. 32균주의 carbapenem 내성 P. aeruginosa 중, 14균주(43.8%)가 다제내성이었으며, 주요 ST는 ST235 (10균주, 71.4.%)임을 확인하였다. 병독성 유전자는 32균주 모두에서 확인되었고, 이 중 가장 높은 빈도로 확인된 병독성 유전자는 toxA, plcN, phzM (100.%)이었다. 또한, 32균주는 모두 8개 이상의 병독성 유전자를 가지고 있었으며, 9균주(28.1%)가 15개의 병독성 유전자를 가지고 있었다. exoU 유전자는 다제내성 P. aeruginosa 균주의 71.4%에서 확인되었다. 이러한 결과는 exoU 유전자가 다제내성 P. aeruginosa 균주의 지속성에 대한 예측 표지자가 될 수 있을 것으로 사료된다.
북극 유래 박테리아인 Pseudomonas aeruginosa 균주의 대사산물에 대한 화학적 연구는 벤조산 유도체 6번을 포함하여, 두 개의 diketopiperazine 1과 2, 두 개의 phenazine alkaloid 3과 4, indole carbaldehyde 5번을 분리하였다. 화합물들의 구조는 1D 과 2D NMR, 및 MS 기법들과 기존 보고된 문헌 값 과의 비교에 의하여 동정되었다. 분리된 화합물들 중 5번과 6번은 북극 척지해 해수의 P. aeruginosa로 부터 처음으로 보고 되었다. 대사산물들 1-6의 항균 활성은 Staphylococcus aureus과 and Candida albicans에 대하여 측정하였다.
수산발효식품의 제조, 숙성중에 생성되는 부패성 불휘발성아민의 효과적인 분해방법을 모색하기 위하여 정어리 젓갈에서 아민분해능이 있는 균주를 분리 동정하였고, 이 균주중 가장 아민분해능이 강한 균주를 선별하여 분해최적조건을 실험한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 정어리젓갈에서 amine분해능이 있는 4균주를 분리하였는데 각각 Pseudomonas aeruginosa, 2종의 Pseudomonas fluorescens 그리고 Enterobacter aeruginosa로 동정되었다. 2. 위의 4균주에 의한 histamine, putrescine 그리고 cadaverine의 분해능은 어느 경우이든 Pseudomonas fluorescens가 가장 강하였고, Enterobacter aerogenes가 가장 약하였다. 3. Pseudomonas fluorescens에 의한 histamine, putrescine 그리고 cadaverine의 분해능은 약간의 차이가 있었으나 온도 $35^{\circ}C$, pH 7.5부근에서 가장 좋았고 식염농도의 증가에 따라서 감소하여 $0\~1\%$ 사이에서 가장 분해능이 좋았다.
Producing an extracellular alkaline lipase, this isolate JM123 was identified as a Pseudomonas aeruginosa strain from the results of the analyses of its morphological, biochemical and physiological properties. This strain showed the highest productivity of alkaline lipase when grown at pH 9.0 and 30C for 13-20 hours in the medium of 2% starch, 1% soytone, 0.5% peptone and 1% MgSO4.7H2O. However, this enzyme was greatly repressed when grown in the glucose containing medium. The culture broth was fractionated by the order of the ammonium sulfate precipitation, Sephadex G-200 gel filtration, DEAE-cellulose column chromatography, and Sephadex G-150 gel filtration.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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