• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권4호
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• pp.303-309
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• 1988

Cellulose를 이용할 수 있는 Cellulomonas속 균주의 종간 세포의 융합방법을 확립하기 위해 원형질체 재생 및 융합조건에 대해 검토하였다. Cellulomonas속 균주의 원형질체는 osmotic stabilizer를 포함하는 재생배지에서 유동성 한천배지로 중층하여 재생시켰고 재생 확인은 주사전자현미경으로 하였다. 원형질체 융합은 항생물질 내성과 영양요구성 돌연변이주의 유전자 표지에 확인하였다. Lysozyme을 처리하여 형성된 C. flavigena 원형 질체의 세포벽 재생은 osmotic stabilizer로 0.4M sorbitol을 포함하는 재생배지에서 약 15% 수준이었으며 여기에 Polyvinyl Pyrrolidone(PVP) 3% 첨가로 재생율을 약 3배정도 증가시킬 수 있었다. Cellulomonas속 균주의 변이주간의 원형질체 융합은 융합유도제로 PEG 6000을 취하여 최적농도 40% (w/v), 치적 처리시간 15분, Ca농도 25mM에서 약 2.0$\times$$10^{-4}$ - 4.0$\times$$10^{-4}$의 융합빈도를 얻을 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권2호
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• pp.101-106
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• 1993

The optimal conditions for the production and regeneration of L. helveticus protoplasts were examined. The protoplast formation of L. helveticus was most efficient obtained when the cells grown to mid and late logarithmic phase in MRS medium were used. The maximum number of protoplasts was obtained when lysozyme and mutanolysin were used to lysis the cell wall in 20mM HEPES buffer (pH 7.0) containing 1M sucrose. Regeneration was accomplished with a complex medium containing 10% sucrose, 10mM MaCl2, 20mM CaCl2, 5% gelatin and 0.5% bovine serum albumin. The regeneration frequency of the protoplasts was 10-20% after 5 days of incubation at 30C.

• 한국식품과학회지
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• 제16권3호
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• pp.363-367
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• 1984

Streptococcus lactis ATCC 11454 의 protoplast 생성 및 재생에 관하여 조사하였다. Protoplast의 생성은 용균효소로써 리소짐 단독처리 만으로 충분히 가능하였으며 균체의 배양은 20mM DL-트레오닌을 첨가한 배지를 사용하는 것이 좋았으며 생육시기와 리소짐 농도등이 중요한 영양인자였다. 배지조성의 최적화 및 protoplast를 배지에 접종하는 방법을 변형시킴으로써 약 20%정도의 재생효율을 얻을 수 있었다.

• 미생물학회지
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• 제22권1호
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• pp.35-40
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• 1984

Streptomyces속 균주개발의 수단으로서 이용할 목적으로 원형질체 융합방법의 확립을 시도하였다. 특히 융합빈도를 높이고 실험을 간편화하는데 역점을 두었다. 원형질체의 형성 및 재생빈도는 균의 배양시간에 따라 변하였는데 대수기에서 수확한 균체로부터 가장 높은 빈도의 수율을 얻었다. 원형질체의 형성은 다른 용균효소를 사용하지 않고 Lysozyme 단독처리 만으로도 충분히 가능하였고 원형질체의 세포막 재생은 Monolay법 보다는 Overlay법이 훨씬 좋은 결과를 주었다. Monolay법은 1.8%, Overly법은 14%의 재생빈도를 나타냈다. 본 실험에서 PEG1000 (50% W/V)를 사용한 원형질체 융합방법으로 얻은 S. coelicolor의 재조합체의 빈도는 $1.8 {\times} 10^{-2}$이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제22권2호
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• pp.143-151
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• 1994

In the course of the study on strain inprovement by protoplast fusion, Lactobacillus acidophilus 88 protoplasts production and regeneration conditions were investigated. This strain produced a bacteriocin that revealed strong inhibitory activity against various indicator strains, especially L. helveticus CNRZ 1096. Protoplasts of L. acidophilus 88 strains were very efficiently obtained by treatment with 125 $\mu $g/ml lysozyme in a protoplast forming buffer containing 20 mM N-2 hydroxy-ethtl-piperazine-N'-2-ethane-sulfonic acid(HEPES, pH 7.0) and 1M sucrose at 37$\circ $C for 30 min. Hovever, treatment with mutanolysin was not effective for the production of L. acidophilus 88 protoplasts under the same conditions. High protoplast yield was obtained form the cells at the middle to late logarithmic growth phase in the de Man, Rogosa and Sharpe(MRS) medium. Regeneration was efficiently accomplished with the MRS medium containing 10% sucrose.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제20권3호
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• pp.206-211
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• 1997

The optimal conditions for the production and regeneration of the protoplasts from Lentinula edodes were studied. Protoplast formation from the mycelia of L. edodes which were cultured in liquid medium showed a significantly high yield compared with that of the mycelia which were cultured on cellophane covered agar media. A mixture of Novozyme 234 (15 mg/ml) and Cellulase Onozuka R10 (10 mg/ml) in 0.6 M mannitol (pH 4) was optimal lytic enzyme for the protoplast release. The optimal incubation time and mycelia age were 3.5-4 hours at $30^{\circ}C$ and 6-8 days, respectively. Regeneration frequency was 0.18% plated onto a medium containing 0.6 M sucrose, and 0.08% plated onto a medium containing mannitol. But hardly any regeneration was observed in the media containing NaCl, KCl, or $MgSO_{4}$ More than 90% of the protoplasts contained nuclei and the nucleus number per protoplast was 1.1. The DNA content per nucleus was 5.1 pg. The diameter of the protoplast was $3-5{\mu}m$ and it had a well defined cell structure.

• Applied Biological Chemistry
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• 제30권4호
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• pp.300-304
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• 1987

대두(Glycine max var. Acme)의 자엽조직에서 유래된 callus의 부유배양세포로부터 protoplast를 분리하고, 이들 protoplast의 viability, 세포벽재생 및 세포분열에 대한 benzyladenine(BA)의 영향과 protoplast에 의한 BA의 흡수특성을 조사하였다. Protoplast의 viability는 BA처리에 의하여 증가되었고, 세포벽재생과 세포분열 그리고 callue의 생장도 BA처리에 의하여 촉진되었다. Protoplast에 의하여 흡수된 BA의 양은 BA 처리후 약 20시간에 최대에 이르렀고, 이중에서 약 2/3가 6시간 이내에 흡수되었다.

• 미생물학회지
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• 제30권6호
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• pp.514-518
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• 1992

The present study has been perromed to investigate the optimal conditions for protoplast formation and regeneration of oleandomycin-producing Streptomyces antibioticus (S. antibioticus) KCTC 1081. Mycelia were grown in YME medium containing 0.2% (w/v) glycine and converted into the protoplast by incubating at 35.deg.C for 60 minutes in protoplast buffer (P buffer) containing 4 mg/ml lysozyme. The reversion of protoplasts to the normal filamentous state was examined by the growth on various synthetic agar media. A high reversion rate was obtained by incubating the protoplasts on a hypertonic agar medium containing 20 mM $Mg^{++}$, 5 mM $Ca^{++}$ and 0.3 M sucrose at 28.deg.C for 5 days. From these experiments, we established the improved regeneration medium and a protocol which supports higher and more consistent levels of regeneration of S. antibioticus protoplasts. The regenerant showed an increased antimicrobial activity compared with that of the initial strain.n.n.

• 한국균학회지
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• 제23권4호통권75호
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• pp.305-309
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• 1995

Phanerochaete chrysosporium ME446의 원형질체 생성 및 재생을 위한 원형질체 분리에 알맞은 세포벽 분해효소로는 Novozym 234이였으며 삼투압 조절제로서는 0.6M sucrose, 처리시간은 $2.5{\sim}3$시간이었다. 균사체 배양일수는 대수기에 해당하는 42시간이었으며 원형질체 재생에 알맞은 배지로는 0.6M mannitol을 첨가한 poly-R 배지였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권1호
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• pp.6-13
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• 1992

유산균주의 균주개량방법의 일환으로 protoplast fusion 방법을 사용하여 lincomycin에 내성을 나타내는 Lactobacillus casei KCTC 1121과 rifampicin에 내성을 나타내는 Lactobacillus delbruckii JK-414의 protoplast 형성과 재생, 융합에 대한 조건 및 융합주의 생리학적 성질 등을 검토하였다. Lactobacillus case와 Lactobacillus delbrueckii JK-414는 삼투압 안정제로 sucrose가 함유된 protoplast forming buffer에서 5$\mu g$/ml의 mutanolysin 으로 $42^{\circ}C$, 15분간 처리 했을 때 protoplast 형성율이 높게 나타났다.