• Journal of Chest Surgery
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• 제28권3호
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• pp.221-227
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• 1995

Malignancy is one of the several exogenous and endogenous factors that increase serum alpha 1-PI. In fact, serum levels of alpha 1-PI were significantly elevated in the patients with the nonresectable bronchogenic cancer. the purpose of this work was to determine if the immediate postoperative change of serum alpha 1-PI level following tumor resection relates to the patient`s postoperative course. Clinical experimental study was carried out to investigate the postoperative changes of serum alpha 1-PI level following operation for 20 cases of bronchogenic cancer and 10 cases of control, nephrectomy patients Alpha 1-PI concentrations in serum was quantitated by use of radial immunodiffusion technique.The results were as follows ; Preoperative serum level of alpha 1-PI was significantly elevated in patients with bronchogenic cancers [p < 0.001 , when compared to normal control levels. Immediate postoperative serum alpha 1-PI level was significantly increased in patients with bronchogenic cancer [p < 0.05 , but slightly decreased at control groups. The peak serum level of alpha 1-PI was the postoperative three days, and then gradually decreased at the 5, 9, 14 days, but slightly elevated comparing to preoperative alpha 1-PI levels. Serum alpha 1-PI level in patients with adenocarcinoma was elevated, when compared to squamous cell carcinoma, but not significantly. According to the stages of the bronchogenic cancer, each levels of the serum alpha 1-PI were slightly different, but the whole postoperative changes were the general similarity. There were no significant difference in changes of the serum alpha 1-PI level, according to the operative procedures. As the alpha 1-PI is acute reactant, that it was required at the reoperative state of the bronchogenic cancer and rapid response, consumption or requirement were occurred, postoperatively. Therefore, alpha 1-PI can be perioperative indicator for the evaluation of the bronchogenic cancer.

• 미생물학회지
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• 제34권3호
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• pp.75-81
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• 1998

자연계로부터 분리한 효모중에서 새우젓으로부터 분리한 효모균주 504D가 alkaline 조건에서 가장 우수한 proteinase 생산성을 보여 분류동정하였다. 분리효모의 형태학적 특성은 주로 영양세포로 출아증식을 하였으나, citric acid가 함유된 MM 배지에서만 위균사를 형성하였고, N-acetylglucosamin과 ${\beta}$-D-glucose가 첨가된 MM 배지에서만 진균사를 형성하였다. 유성적으로 자낭포자를 형성함으로써 반자낭균류이었고, 무성적으로 출아포자 및 분절 포자를 형성하였다. 생리생화학적인 특성으로 대부분의 탄소원과 nitrate 및 nitrate를 이용하지 못하였으나 일부 유기산과 알콜류를 이용하였다. 세포지방산을 분석한 결과, 불포화지방산 53.67%와 포화지방산 14.58%로 나타났으며, 대조균들에는 관찰되지 않는 C17:1이 관찰되었다. 전체적인 실험결과에서 분리균은 균사형성능과 세포지방산의 조성에서 약간의 차이를 제외하면 대조균 Saccharomycopsis lipolytica KCCM 12495 및 KCCM 35426의 모든 특성들과 거의 동일하여 분리효모 504D를 Yarrowia lipolytica로 동정하였다.

• Journal of Microbiology
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• 제35권2호
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• pp.109-116
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• 1997

An extracellular proteinase of Candida albicans was purified by a combination of 0~75% ammonium sulfate precipitation, DEAE Sepharose Fast Flow ion exchange chromatography, and Sephacryl S-200 HR molecular sieve chromatography. Its mlecular weight was approximately 41 kDa on SDS-PAGE and isoelectric point was 4.4. The enzyme was inhibited by pepstain A. Optimum enzyme activity ranged from pH 2.0 to 3.5 with its maximum at pH 2.5 and a temperature of 45$^{\circ}C$. The addition of divalent cations, $Ca^{2+}$, Zn$^{2+}$ and $Mg^{2+}$, resulted in no significant inhibition of enzymatic activity. However, some inhibitory effects were observed by Fe$^{2+}$, Ag$^{2+}$ and Cu$^{2+}$. With BSA as substrate, an apparent $K_m$ was determined to be 7$\times$10$^{-7}$ M and $K_i$, using pepstatin A as an inhibitor, was 8.05$\times$10$^{-8}$ M. N-terminal amino acid sequence was QAVPVTLXNEQ. Degradation of BSA and fibronectin was shown but not collagen, hemoglobin, immunoglobulin G, or lysozyme. The enzyme preferred peptides with Glu and Leu at the P$_1$ position, but the enzyme activity was highly reduced when the P$_2$ position was phe or pro. This enzyme showed antigenicity against sera of patients with candidiasis.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제40권1호
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• pp.17-24
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• 2002

We have cloned a cDNA encoding a cysteine proteinase of the Acanthamoeba healui OC-3A strain isolated from the brain of a granulomatous amoebic encephalitis patient. A DNA probe for an A. healui cDNA library screening was amplified by PCR using degenerate oligonucleotide primers designed on the basis of conserved amino acids franking the active sites of cysteine and asparagine residues that are conserved in the eukaryotic cysteine proteinases. Cysteine proteinase gene of A. healui (AhCPI) was composed of 330 amino acids with signal sequence, a proposed pro-domain and a predicted active site made up of the catalytic residues, $Cys^{25},{\;}His^{159},{\;}and{\;}Asn^{175}$. Deduced amino acid sequence analysis indicates that AhCPI belong to ERFNIN subfamily of C 1 peptidases. By Northern blot analysis. no direct correlation was observed between AhCPI mRNA expression and virulence of Acanthamoeba, but the gene was expressed at higher level in amoebae isolated from soil than amoeba from clinical samples. These findings raise the possibility that AhCPI protein may play a role in protein metabolism and digestion of phagocytosed bacteria or host tissue debris rather than in invasion of amoebae into host tissue.

• Applied Biological Chemistry
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• 제32권3호
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• pp.222-231
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• 1989

대두에 존재하는 단백질 분해 효소 저해제로는 Kunitz trypsin inhibitor (SKTI), Bowman-Birk proteinase inhibitor, 그리고 그의 isoinhibitor들이 알려져 있다. SKTI는 분자량이 20K이며 181개의 아미노산으로 구성되어 있다. SKTI의 분자 구조 및 발현 특이성을 밝히기 위하여, 콩에서 순수 분리한 SKTI를 항원으로 사용하여 항체를 제조하였다. 이 항체는 항원으로 사용한 SKTI에 대하여 특이적으로 반응할 뿐만 아니라 기내에서 합성된 그의 전구체와도 특이적으로 반응하였다. 기내에서의 단백질 합성은 미성숙 대두 종자에서 mRNA를 분리한 후, wheat germ extract를 이용하여 실시하였다. 합성된 단백질 중에서 대두에 존재하는 SKTI는 검출되지 않는 반면에 면역침전법에 의해 분자량이 24K인 전구체가 존재하고 있음을 확인하였다. 이와 같이 SKTI는 mRNA로부터 전구체가 합성된 후 post-translational modification에 의해 완전한 SKTI로 변환됨을 알 수 있었다. 또한 SKTI는 대두 종자의 성숙과 함께 발현이 되는 것으로 보아 조직 및 분화 특이성 발현형태를 나타내는 것을 알 수 있었다.

• Plant Resources
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• 제6권3호
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• pp.205-210
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• 2003

Ginseng(Panax ginseng C.A. Meyer) is a perennial herbaceous plant which grows very slowly. It takes about 3 to 4 years from seeding to collecting the ripe seeds and the ginseng propagation is very difficult. and so, it is very difficult to breed ginseng plant. Ginseng tissue culture was started from at 1960, and ginseng commercial product by in vitro callus culture was saled, however upto now, regenerants were not planted to soil normally. Recently, plant genetic engineering to produce transgenic plants by introducing useful genes has been advanced greatly. In a present paper, transformation of ginseng plants was achieved by co-cultivation with Agrobacterium harboring the binary vector coding Proteinase-II gene, which confer resistant or tolerant to insect pests, The binary vector for transformation was constructed with disarmed Ti-plasmid and with double 35S promoter. The NPT II gene and introduced genes of the transgenic ginseng plants were successfully identified by the PCR. Especially the transgenic ginseng plants were regenerated using new techniques such as repetitive single somatic embryogenesis.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제31권2호
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• pp.117-128
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• 1993

이 연구는 환자로부터 분리하여 무균 배양된 10개의 질트리코모나스 분리주에 대하여 병원성 여부를 판정하고 단백분해효소 관련 여부를 알아보고자 시도된 것이다. 질트리코모나스 분리주들은 마우스 피내 접종 실험을 통한 병원성 판정에서 약병원성 주, 중등도 병원성 주 및 강 병원성 주 등 3개 그룹으로 나눌 수 있었으며 중성 단백분해효소 및 산성 단백분해효소 활성도는 질트리코모나스 추출물 및 그 배양액에서 약 병원성 주에 비해 강 병원성 주의 활성도가 높게 나타나 피하농양 크기에 따른 병원성과 상기 단백분해효소의 비활성도(specific activi쇼) 사이에 상관관계가 있었음을 알 수 있었다(p < 0.05) 질트리코모나스 단백분해효소는 gelatin을 기질로 하는 SDS-PAGE 전기영동에서 RF치를 달리하는 5가지 분획대가 나타났으며 그 분획양상은 각 분리주 의 병원성에 따라 일정한 양상을 나타내었다. 그리고 여러가지 단백분해효소 억제제를 전기 영동 효소액에 처리했을 경우 antlpaln과 leupeptin 처리군에서는 분획이 전혀 나타나지 않았으며 EUTA 처리군에서는 대조군에 비해 그 활성이 약화된 분획이 관찰되었고, PMSF 처리군에서의 분획들은 대조군과 그 활성의 차이를 볼 수 없어 이들 단백 분해효소는 cystelne 단백분해효소로 추정되었다. 조직 세포에 대한 질트리코모나스 추출물의 세포독성은 병원성에 따라 차이가 있었고 추출물의 단백질 농도 $12.0{\;}\mu\textrm{g}/100{\mu}\ell$ 이상에서 세포 독성에 따른 병원성 구분이 용이하였다. 그리고 질트리코모나스 추출물에 단백분해효소 억제제를 처리한 결과 대조군에 비하여 세포 독성이 낮게 나타났으며, 특히 antipain 처리군에서는 조직 세포에 대한 세포 독성이 현저하게 낮았다. 이상의 결과로 보아 cysteine계로 추정되는 질트리코모나스의 단백분해효소는 특이한 전기영동 활성 분획상을 나타내었는 바 이들은 모두 충체의 병원성 및 세포 독성과 밀접한 관련이 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권3호
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• pp.230-234
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• 2002

모기 살충성 Bacillus thuringiensis subspangiensis 21-2균주의 용혈성 내독소 단백질의 특성을 검토하고자 21-2균주의 용혈성을 가진 유전자를 Escherichia coli HBIO쎄 형질전환시켰다. 이들 중에서 형질전환 균주 47은 독소 단백질을 생산하며 2.5 kb DNA을 함유한다는 것을 효소항체법, immunoblot및 DNA전기영동법으로 확인하였다. 또한, 형질전환 균주 47-5는 2.5 kb DNA를 다시 Hind ll견 절단하여 pUC118 연결시켜서 조제하였다 그 결과형질전환 균주 47-5은 1.Bkb DNA를 함유하며, 23 kD꺼 독소 단백질을 발현하고, 발현된 독소 단백질은 Aedes aegypti모기 유충에 독성을 나타내었다. 또한 23 kDa의 내독소 단백질 그 자체로는 사람의 적혈구를 용해하지 못하였으나, proteinase K로 처리한 후에는 적혈구에 대해 용혈성을 나타내었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제39권4호
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• pp.390-396
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• 2011

김치발효 후기의 우점종으로 알려진 Lactobacillus sakei의 생육을 저해하는 Leuconosotc 속 23균주가 김치로부터 분리되었고, 이들 중 가장 높은 생육저해활성을 나타낸 Leuconostoc mesenteroides CK0122 균주가 생산하는 생육 저해물질의 특성을 검토하였다. CK0122 균주의 배양 상징액을 분자량 3,000 Da을 기준으로 분획하여 동결건조한 분자량 3,000 Da 이하의 조항균물질로부터 Lb. sakei 생육저해가 확인되었고, proteinase K 처리에 의해 항균력이 소실되었기 때문에, CK0122가 생산하는 항균물질은 분자량 3,000 Da 이하의 단백질성 항균물질(bacteriocin)으로 추정된다. 분자량 3,000 Da 이하의 조항균물질은 pH 4에서 7 정도의 영역에서 최적활성을 나타내었고, $121^{\circ}C$, 15분 살균처리에 의해서도 활성이 유지되는 높은 열안정성을 나타내었으며, Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Salmonella typhimurium, Alcaligenes xylosoxydans, Staphylococcus aureus 및 Flavobacterium sp.에 대하여 항균 활성을 나타내어 Gram 양성균 및 음성균의 제어에 적용 가능한 것으로 나타났다.

• Journal of Plant Biology
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• 제38권4호
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• pp.381-388
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• 1995

해녀콩(Canavalia lineata) 뿌리혹으로부터 만들어진 cDNA library를 뿌리의 총 RNA, leghemoglobin 및 uricasell cDNA를 competitor로 사용하여 차등 혼성화반응으로 후기 뿌리혹에서 발현되며 Cno이, Cne2, Cne3, Clb2로 명명된 4개의 cDNA 클론을 얻었다. Cnod1은 벼의 cysteine proteinase를 암호화하는 유전자와 유사한데 1450nt의 전사체외 혼성화 반응을 보였으며 뿌리혹에서만 발현되고 뿌리혹 발달 후기에서 가장 높은 발현을 보였다. Cne2는 벼의 Expressed Sequence Tag의 한 종류와 유사하고 900 nt의 전사체와 혼성화 반응을 보였으며 뿌리혹에서 주로 발현되었다. Cne2는 접종 후 13일째 발현이 증폭된 후 일정하게 유지되었다. Cne2는 완두의 tonoplast 막 내재 단백질 TRG31을 암호화하는 유전자와 유사하며 뿌리에서 가장 많이 발현되었다. Cne3는 1700 nt와 1400 nt의 전사체와 혼성화반응을 보였으며 뿌리혹의 성장, 발달과 일치하는 발현 양상을 보였다. Clb2는 800 nt의 전사체와 혼성화반응을 보였으며 접종 후 8일째부터 발현이 시작되어 13일째 증폭되고 그 이후 일정한 수준을 유지하였다.