In comparison of three Pleurotus species and their selfed and crossed isolates using SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of total soluble proteins, Pleurotus ostreatus 201 showed low similarity to selfed or P. ostreatus 201 crossed ones. Pleurotus ostreatus 2042 showed low similarity to selfed or P. ostreatus 2042 crossed ones. However, P. ostreatus $2042{\times}P$. ostreatus 202, P. ostreatus $2042{\times}P$. sajor-caju, and P. ostreatus $2042{\times}P$. ostreatus 900 showed high similarity. Pleurotus ostreatus 202 showed low similarity to selfed or crossed ones. Pleurotus sajorcaju showed low similarity to selfed or crossed ones. Pleurotus ostreatus 900 showed low similarity to selfed or crossed ones. However, selfed P. ostreatus and P. $ostreatus{\times}P$. florida showed high similarity. Pleurotus florida and selfed P. florida showed high similarity, too.
Volatile aroma concentrates of four oyster mushrooms cultivated in Korea were obtained by the simultaneous distillation-extraction method. The volatile components were identified by the combined capillary gas chromatography-mass spectrometry and compared with the of retention data on GC of those authentic compounds. About 54 volatile compounds were identified in each of the four edible oyster mushrooms. The main compounds in Pleurotus ostreatus ASI 201 were 1-octen-3-ol, 3-octanone, 3-octanol, in Pleurotus sajor-caju, 1-octen-3-ol, 3-octanone, 1,5-octadien-3-one, 3-octanol, in Pleurotus florida-ostreatus-ostreatus, 1-octen-3-ol, n-hexanol, 3-octanone, 3-octanol, phenol, and in Pleurotus ostreatus (Ae-Neutari), 1-octen-3-ol, n-pentanal, n-hexanol, n-pentanol, 3-octanone, 3-octanol, 1,5-octadien-3-one, respectively. The mushrooms worked were rich in an alcohols and carbonyl compounds containing $C_8$ compounds. The peak area ratio of $C_8$ compounds in aroma concentrates were 56.60% in Pleurotus ostreatus ASI 201, 72.46% in Pleurotus sajor-caju, 54.84% in Pleurotus florida-ostreatus-ostreatus and 35.85% in Pleurotus ostreatus (Ae-Neutari ), respectively.
Inter-specific hybridization between Pleurotus pulmonarius and P. florida was attempted through PEG-induced protoplast fusion to select a fusant. The protocol for protoplast release, regeneration and fusion in these two Pleurotus species was standardized using the variables controlling the process. The mixture of mycolytic enzymes, i.e. commercial cellulase, crude chitinase and pectinase, KCl (0.6 M) as osmotic stabilizer, pH 6 of the phosphate buffer and an incubation time of 3 hours resulted in the maximum release of protoplasts from 3-day-old mycelia of P. florida ($5.3{\sim}5.75{\times}10^{7}$ protoplasts/g) and P. pulmonarius ($5.6{\sim}6{\times}10^{7}$ protoplasts/g). The isolated protoplasts of P. florida regenerated mycelium with 3.3% regeneration efficiency while P. pulmonarius showed 4.1% efficiency of regeneration. Polyethyleneglycol (PEG)-induced fusion of protoplasts of these two species resulted in 0.28% fusion frequency. The fusant produced fruiting bodies on paddy straw but required a lower temperature of crop running ($24{\pm}2^{\circ}C$) than its parents which could fruit at $28{\pm}2^{\circ}C$. The stable fusant strain was selected by testing for the selected biochemical markers i.e. Carbendazim tolerance and utilization of the lignin degradation product, vanillin.
This study aimed to investigate possible cause of slow and abnormal growth of oyster mushrooms, Pleurotus florida and P. ostreatus collected from bad crop farms. Spherical virus particles of 30 nm in diameter from P. florida, 23 nm particles from P. ostreatus, and both 23 and 30 nm particles were also found from interspecies mated culture between P. florida and P. osreatus. The virus particles might be associated with the bad crop of Pleurotus species.
Isozyme band patterns were investigated by isoeletric focusing Esterase and Leucine amino peptidase of Pleurotus spp. in Korea. Esterase patterns of mycelia and fruitbody were distinquished. However, those of primordia, cap and stem were similar. Interspecies differences of Pleurotus ostreatus, P. cornucopiae and P. florida of Esterase zymogram were found. Species identification by electrophoretic zymogram may be a role as an additional taxonomic tool.
Mutagenesis of protoplast could serve a great potential tool for improvement of strains and genetics in higher fungi. For the isolation of auxotrophic mutants from protoplasts of Pleurotus ostreatus and Pleurotus florida, viability levels of ultraviolet lights were determined. Seven auxotrophs were obtained from protoplasts irradiating UV to give $0.83{\sim}15%$ survival. The mutants showed a single requirement for each of Arg, Ribo-l, Ribo-2 or Phen for growth. Some of them showed two or three kinds of requirements, Gly Ser, Ade Hypo or Ala Om Tryp for growth.
The experiment of protoplast regeneration and reversion were undertaken to provide a basic techniques for protoplast manipulation. Protoplasts of Pleurotus florida and Pleurotus ostreatus were reverted to normal hyphal growth and the reversion frequency of both fungal protoplasts were $0.24{\sim}3.19%$. Reversion medium stabilized with 0.6 M potassium chloride and sucrose was better than the other stabilized one. The protoplast reversion frequency was increased when various amino acid and vitamin compounds were added to the hypertonic mushroom complete agar medium.
This experiment was undertaken to investigate proper conditions for protoplast isolation from strains of Agaricus bisporus, Flammulina velutipes, Lentinus edodes, Pleurotus florida, Pleurotus ostreatus, Pleurotus sajor-caju and Volvariella volvacea. Combination of ${\beta}-D-glucanase$, novozym 234 and snail enzyme with 0.6M $MgSO_4$ in 0.05M Na-maleate buffer, pH 5.8 was the most effective for isolation of protoplasts. High yields of protoplasts were obtained from $4{\sim}5$ days old mycelia of P. florida and P. ostreatus on mushroom complete agar medium. Protoplasts were also obtained in good yield from other fungi but A. bisporus and V. volvacea. In the latter two cases protoplast release was observed; however, the yield was much lower than those of the other fungi.
Electrophoretic isozyme patterns from mycelia, primordia, cap and stem of Pleurotus spp. collected in Korea were compared. Primordia, cap and stem of fruitbody showed very similar isozyme patterns but mycelial isozyme patterns were different from those of fruitbody. Isozyme patterns of malate dehydrogenase, acid phosphatase in Pleurotus ostreatus collected from different regions in Korea were similar but those of esterase, peroxidase, leucine amino peptidase and superoxide dismutase were different. Interspecific comparison of esterase isozyme patterns among Pleurotus ostreatus P. cornucopiae and, P. florida was very different and may be valuable subsidiary tool to conventional taxonomic techniques for identifying species of Pleurotus. A dendrogram by similarities of isozyme band pattern was presented.
The internal regions of nuclear small subunit rRNA from 6 plaeurotus species and 5 Pleurotus ostreatus strains were amplified by PCR and sequenced. The DNA sequences of 8 Pleurotus strains (P. ostreatus NFFA2, NFFA4501, NFFA4001, KFFA4001, KFCC11635, P florida, P. florida, P. sajor-cuju, P. pulmonarius, and P. spodoleucus) were idential, but P. cornucopiae differed from them in two bases out of 605 bases. However, p[hylogenetic analysis of the sequences by DNA-distance matrix and UPGMA methods showed that P. ostreatus NFFA2m1 and NFFA2m2, known as mutants of P. ostreatus NFFA2, belonged to anther group of Basidiomycotina, which is close to the genus Auricularia. The difference of the SSU rDNA sequences of P. cornucopiae from other Pleurotus species tested corresponds to the difference of mitochondrial plasmid type present in Pleurotus species as observed by Kim et al. (1993, Korean J. Microbiol. 31, 141-147).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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