수산물 폐기물을 이용하기 위하여 대롱 새우껍질에서 추출하여 만든 키토산을 마우스에 이식한 sarcoma 180을 이용하여 in vivo와 in vitro에서 항암 효과 및 면역기능에 미치는 영향에 대하여 실험하였다. 키토산의 sarcoma-180에 대한 고형암 성장 저지율을 40mg/kg투여시 63.84%의 저지율을 나타내었다. 수명 연장효과는 대조군에 비하여 키토산을 40mg/kg 투여하였을 때 26.84%로 그다지 높지 않았다. In vivo에서의 항암효과를 근거로 하여 in vitro에서는 sarco-ma-180에 대한 직접적인 세포의 독성 작용은 거의 없었다. 키토산은 30mg/kg과 40mg/kg을 투여시 혈중 백혈구수와 총복강세포수가 대조군에 비하여 다소 증가 하였고 장기인 간, 비장 및 흉선의 무게도 투여한 용량에 따라 증가하는 용량 의존성 반응을 보였다. 항체 유도염증 반응인 항체매개형 과민반응과 지연형 과민반응은 족척의 두께가 키토산에 의해 거의 정상 수준까지 회복되었다. Macrophage의 식작용에 미치는 영향은 phagocytic index 와 corrected phagocytic index에서 거의 차이가 없었고, 용혈성 반응 세포수(plaque forming cell, PFC)는 대조군에 비하여 PFC/$10^{7}$ spleen의 경우 18.88%와 31.83%로 다소 증가하였다.
This research was designed to study the effect of Korean dietary lipids on the lipid metabolism and the immune function in young rats . The three different lipid sources were compared lard, perilla oil and fish oil. Three different levels of lipid in the diet, 2%, 15% and 30%,on the weight basis, were included. After four weeks feeding, the rats were sacrified and blood sample was collected to analyze for the total lipid, TG and cholesterol contents in serum. The HDL fraction in serum was seperated by the electrophoresis of lipoproteins. The immune responses were measured by the blastogenesis of spleen lymphocyte stimulated by PHA and in serum were measured. The following results were obtained. Lower body weight gain was shown in 30% lipid diet fed group on the isocaloric basis. In concerning the different dietary lipid sources, there were significantly lower boyd weight gain in fish oil than in perilla seed oil and lard group in 30% lipid groups. Deposition of body fat expressed by epididymal fat pad in serum were significantly different among perilla seed oil, lard and fish oil groups. Perilla seed oil group showed lowest level of total lipid and TG in serum regardless of dietary fat level. The feeding perilla seed oil to rats was resulted in lower serum cholesterol levels than lard in all three levels of fats tested. The HDL fraction was elevated in perilla seed oil group at the high fat level. The stimulating responses of lymphycotes by PHA did not seem to be influenced by different dietary fat sources. However, conA mitogenic responses was significantly increased in perilla seed oil group. The lower level of perilla seed oil (2%, 15%) showed slightly higher responses of ConA, indicating that lower level of perilla seed oil might have stimulatory response on the immune response. The number of antibody forming cells of spleen against SRBC was increased in 30% fat level for all the three kind of fats. However, no effect has been found in plaque forming cell response by the differences in dietary fat sources. There were no significant differences in serum IgG and IgA levels in all dietary groups.
염색체 유전자를 전달시키기 위한 기초작업으로 RP4 :: Mu cts와 RP4 :: mini-Mu 잡종 플라스미드를 접합에 의하여 E.. coli로 부터 Pseudomonas로 전달시켰다. RP4::Mu cts와 RP4:: mini-Mu의 수용세포는 플라스미드를 가지지 아니하는 Pseudomonas 균주들의 항생세 내성, 탄화수소 자화능 등의 유전적 지표를 조사하여 사용하였다. RP4::mini-Mu는 1$10^{-2}$ - $10^{-4}$의 빈도로 전달되었으며 RP4:: Mu cts는 Pseµdomonas aeruginosa KU557로는 $10^{-2}$의 빈도로, 그 이외의 수용세포로는 10?7의 빈도로 천달되었다. 접합체에 전달된 플라스미드의 존재는 암피실린, 카나마이신, 테트라싸이클린에 대한 내성과 전기영돔에 의해 확인하였으며 특히 RP4::Mu cts는 $43^{\circ}C$에서의 플라크 행성으로도 확인하였다. 접합체들로 부터 생성된 Mu 파아지는 약 $10^{5}$의 P.F.U.를 나타냈으며 전달된 RP4:: Mu cts와 RP4:: mini-Mu는 접합체들에서 비교적 안장한 것으로 밝혀졌다.
Background : Paeonia japonica Miyabe is a medicinal plant which has been widely used as a component of blood-building decoctions (Chinese medicinal concept : Bu-Xie). The immunopharmacological characteristics of the extract of Paeonia japonica (PJ) were investigated. Methods : The effects of fractions of PJ extract on lymphocyte proliferation were measured by $H^3$-thymidine incorporation assay. The proliferated lymphocyte subsets were analyzed in flow cytometry. The subset cell populations of spleen cells were separated by magnetic cell separation system, and their proliferation by the extract were investigated. The effect of the extract on antibody production was determined in mice challenged with sheep red blood cells (SRBC) using hemolytic plaque forming cell assay. Results : Spleen cells were proliferated by water extract of PJ. Polysaccharide fraction (PJ-P) of the extract was most active in the proliferation. It was found in flow cytometry that the lymphocyte subset proliferated by PJ-P was B cell population. Among the separated subset cell populations, T cell-depleted cell population and macrophage-depleted cell population were most proliferated by PJ-P. However, positively selected populations of B cells and T cells were not proliferated by PJ-P. These results indicate that B cell proliferation by PJ-P may require the assistance of macrophages or T cells. These results suggest that firstly PJ-P may stimulate macrophages or T cells, and then B cells are activated. The number of antibody-secreting cells was increased by administration of PJ-P in mice immunized with SRBC as a T-dependent antigen. Conclusion : These results suggest that macrophages and accessory cells are directly activated by PJ-P and then helper T cells and B cells are indirectly activated. As the results, immune responses might be coordinately improved. In conclusion, PJ-P, a polysaccharide of P. japonica, may be a characteristic immunostimulator, which is analogous to polysaccharides such as lentinan, PSK and ginsan.
Effects of methanol extract of Astragali Radix (AR) on the immune responses were studied using ICR mice. Mice were divided into 4 groups (10mice/group), and methanol extracts of AR at doses of 0.05, 0.25 and 1.25g/kg were orally administered to ICR mice once a day for 2 weeks. Mice were immunized and challenged with sheep red blood cells (SRBC). The results of this study were summarized as follows; (1) Methanol extract of AR at 0.05, 0.25 and 1.25g/kg didn't affect the weight ratios of thymus to body, as compared with those in controls, but significantly increased spleen weight ratio. (2)Methanol extract of AR at 0.05 and 0.25g/kg significantly increased hemagglutination titer and splenic plaque forming cells corresponding to humoral immunity, as compared with those in controls, but their enhancements were somewhat lowered at a high dose (1.25g/kg). (3) Methanol extract of AR at 0.05 and 0.25g/kg siginificantly increased delayed-type hypersensitivity reaction resulted from cell-mediated immunity, as compared with those in controls, but not so significant increases were observed at a high dose (1.25g/kg). (4) Methanol extract of AR at 0.05 and 0.25g/kg significantly increased phagocytic activity and the number of circulating leukocyte compared with those in controls, but their enhancements were lowered at a high dose (1.25g/kg). These results suggest that methanol extract of Astragali Radix increased humoral and cell-mediated immune responses, phagocytic activity and the number of circulating leukocyte, dependent upon dose, but inhibited their enhancement effects were decreased at a high dose (1.25g/kg).
본 연구는 마우스를 대상으로 유기게르마늄 강화효모 경구투여에 의한 면역조절작용 효과를 확인하고자 하였다. 마우스를 대상으로 9일간 경구투여한 결과 대조군인 게르마늄 비강화 효모 투여군에 비해 복강대식세포, B세포, NK 세포의 활성이 현저히 증가한 것으로 확인되었으며, 최종 실험결과 대식세포는 게르마늄 강화효모 투여 후 식세포활성, 주화성, 부착성, rosette 형성능 현저히 증가하였다. Superoxide $anion(O_2^-)$ 생성능은 대조군에 비해 유기게르마늄 강화군 투여군에서 3배 활성이 증가하였으며, NO 생성능과 $TNF-{\alpha}$ 생성능도 농도의존적으로 증가하였다. B-세포 활성화에 의한 cytolytic activity 증가에 의한 PFC형성능도 게르마늄 비강화 효모에 비해 현저히 증가하였으며 상업화 유기게르마늄으로 알려지고 있는 Ge-132에 비해 2배 이상 높은 활성이 확인되었다. Cytotoxic acivity에 의한 항 종양활성에서는 양성대조군인 Doxorubicin 투여군에서와 유사한 저해활성을 나타내었으며 고용량 유기게르마늄 효모(2,400 mg/kg) 투여시 60%의 종양활성 억제효과가 확인되었다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 유기게르마늄 강화효모가 실험동물 뿐만 아니라 인체의 유용한 면역조절제로서의 이용성이 기대된다.
In order to investigate the effect of Houttuynia cordata Thunb and Sanggukeum on immune function, the author performed this experimental study. Delayed type hypersensitivity (DTH) and rosette forming cells(RFC) for cell-mediated immune response, hemagglutinin (HA) titers, hemolysin (HL) titers and plaque forming cells (PFC) for humoral immune response, immunoglogbulin (Ig G) titer, splenic natural Killer cell activity (NKCA) carbon clearance for phagocytic function of MPS(mononuclear phagocyte system) and change of weight were measured in ICR mice. The results were summarized as follows ; 1. DTH was increased with statistical significance in all of the treated group as compared with the control group. 2. RFC was increased with statistical significance in case of Houttuynia cordata Thunb but in case of sanggukeum and gamisanggukeum valuable increase of RFC was not recognized as compared with the control group. 3. HA titers were increased with statistical significance in case of Houttuynia cordata Thunb but in cases of Sanggukeum and Gamisanggukeum HA titers were not recognized as compared with the control group. 4. HL titers were increased with statistical significance in case of Houttuynia cordata Thunb but in cases of Sanggukeum and Gamisanggukeum valuable increase of HL titer was not recognized as compared with the control group. 5. PFC was increased in all of the treated group but valuable increase of PFC was not recognized as compared with the controal group. 6. Ig G titers were increased in all of the treated group but valuable increase of Ig G titer was not recognized as compared with the control group. 7. NKCA was increased with statistical significance in case of Houttuynia cordate Thunb but in case of Sanggukeum and Gamisanggukeum valuable increase of NKCA was not recognized as compared with the control group. 8. Carbon clearance was increased with statistical significance in case of Sanggukeum but in case of Houttuynia cordata Thunb and Gamisanggukeum valuable increase of carbon clearance was not recognized as compared with the control group. 9. Change of weight was increased with statistical significance in all of the treated group. Through in vivo experimental study in ICR mice, Houttuynia cordata Thunb enhances the cell-mediated immune responce, the humoral immune responce and natural killer cell activity. And Houttuynia cordata Thunb enhances immune responce as compared with that plused Sanggukeum. Sanggukeum enhances carbon clearance and enhances a little cell-mediated immune responce, the humoral immune response and natural killer cell activity. According to the above results it seems Houttuynia cordata Thunb and Sanggukeum was able to use Infection, Inflammation and Tumor.
로타바이러스는 선진국과 개발도상국의 영 유아에게 급성위장염을 일으키는 주요원인이다. 위장질환의 치료를 위한 유산균의 사용은 안전하며 간단하게 이용할 수 있다. 본 연구는 Sprague-Dawley 랫드에서 유산균혼합물의 로타바이러스에 대한 항 바이러스 효능을 조사하였다. 24마리의 새끼와 그들의 어미를 무작위로 네 그룹으로 나누었다; placebo, phosphate buffered saline (PBS)와 유산균 혼합물-1, 유산균 혼합물-2 그룹. 5일령인 모든 랫드에게 8 log plaque forming units의 농도로 로타바이러스를 접종하고 유산균혼합물-1, 유산균 혼합물-2 그룹은 4일 동안 하루에 한번 각각 8 log colony forming units의 농도로 유산균 혼합물을 경구 투여하였다. 대조군인 placebo와 PBS 그룹은 4일 동안 하루에 한번 각각 동일한 양의 placebo (말토오스, 폴리덱스트로스 포함)와 PBS를 경구 투여하였다. 항 바이러스 효능분석을 위해 Real-time quantitative PCR (RT-qPCR)과 소장융모관찰을 수행하였으며, 그 결과 유산균 혼합물-1, 유산균 혼합물-2 그룹의 소장무게는 대조군 보다 무거웠다. 대조군의 융모는 길이가 짧아지고 융모상피세포의 괴사가 일어났지만 유산균 혼합물-1과 유산균 혼합물-2 그룹에서는 이러한 형태학적 변화를 관찰할 수 없었다. RT-qPCR 분석에서는 유산균 혼합물-1과 유산균 혼합물-2 그룹의 분변샘플과 소장상피세포에서 로타바이러스의 VP7 유전자 레벨이 낮았다. 이러한 연구결과는 유산균혼합물이 로타바이러스 위장염에 대한 대체요법이나 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 시사한다.
세계보건기구 (WHO)가 백신 생산에 권장하고 있는 표준세포 주인 Vero 세포에 약독화 일본뇌염바이러스인 SA14-14-2 ( (PDK)를 연속 계대배양을 통해 적응(adaptation)시켜, tIter가 $10^7$pfu/mL을 넘는 SA-14-14-2(Vero)을 분리하였다 바이러스 배양 최적온도는 $35^{\circ}C$이며, T -flask에서 배양된 바이러스의 최고 tIter는 감염 후 4일째에 $4\times10^7$ pfu/mL로 관찰되었다. 또한 무혈청배지에서도 바이러스 증식이 활발하여 2% 혈청이 보충된 정우와 거의 비슷한 바이라스 tIter를 보였다. 바이러스 대량 배양을 위해 roller bottle culture와 미 립 담체 플 이용한 spinner flask culture 가능성에 대하여 고찰하였다 바이러스 감염을 위한 미립담체에서의 Vera cell monolayer는 초기 세포 농도 $4\times10$ cells/mL로 접종하여 50 rpm에서 7일간 배양하여 얻을 수 있었다. 바이러스의 roller bottle 배양이 spinner flask 배양보다 바이러스 tIter변에서 2배 내지 3배 높 았고, $10^7$pfu/mL을 넘는 배양 기간도 하루 죄었다. 하지만 두 배양 방법 모두 T -flask 배양에서와 같이 무혈청 배지를 사용 하여도 바이라스 증식이 활발했고, 최고조의 tIter를 보이는 배 양기간은 감염 후 2일째로써 T -flask 배양에서 보다 2일 빨랐다. Roller bottle culture의 경우, 감염 후 3일부터 17일까지 2 일 간격으로 배양액을 무혈청 EMEM으로 100% 교체하면서 매 양을 지속한 결과 3일부터 9일까지 $10^7$pfu/mL을 념는 tIter가 유지되는 것이 확인되어 바이러스의 multi-harvest가 가능한 것 로 고찰되었다. 상기의 결과는 생산성 면에서 매우 유리한 결 과로 제품의 생산 단가플 낮추고 작업 노력을 절감하는 기대 효 과가 클 것으로 예측된다.
The studies were conducted to investigate the combined effects of Tonics and Mitomycin C(MMC). The effects of Tonics and MMC on the proliferation of Molt-4 cells, human leukemic cell line, and activation of human lymphocytes were estimated by MTT colorimetric assays. Selected medicines among 9 kinds of Tonics by results of MTT assays were treated with MMC in mice. The Tonics itself enhanced the proliferation of Molt-4, but the anti-proliferative effect of MMC was not intercalated by the combined treatment of Tonic and MMC. Inhibitory action of MMC was augmented by Sa Kun Ja Tang(SKT). This result was due to the inhibition of DNA synthesis. Among 9 kinds of Tonics, Sip Jean Dae Bo Tang(SDT), Saeng Maek San(SMS) and Kwi Bi Tang(KBT) did not inhibit the action of MMC, but activated lymphocytes. When the mice were treated by MMC, the number of leukocytes was decreased significantly at the 1st day, but recovered at the 7th day. In the groups of MMC treated with SDT or KBT, the number of leukocytes was increased significantly than the group of MMC treated only at the 3rd day. Combined treatment of the Tonics(SDT, SMS) and MMC retained the body weight of mice at the level of normal mice. SDT, SMS and KBT did not change the number of plaque forming cells(PFC), but MMC treated group decreased the number of PFC. The combined treatment of MMC and SDT increased the number of PFC significantly than the MMC treated group. SDT, SMS and KBT did not influence the proliferation of T cells, but MMC treated group decreased the proliferation of T cells. The combined treatment of MMC and those tonics increased the T cell proliferation significantly than the MMC treated group. In conclusion, the results presented in this paper suggest that SDT, SMS and KBT can recover the side effects of MMC, such as weight loss, leukopenia and immunosuppresion, without any intercalating the anti-proliferative action of MMC in vivo.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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