Objectives : The gnarl of Pinus densiflora, called Songjeol in Korea, has been used as a medicinal herb for the treatment of inflammatory-related diseases such as arthralgia, myalgia and bruise. However, the molecular actions and mechanisms have not been clearly investigated. The aim of this study was to clarify the anti-inflammatory activity of Pinus densiflora gnarl pharmacopuncture (PDGP) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells. Methods : Cytotoxicity was assessed by XTT assay. The amount of nitric oxide (NO) production was determined by nitrite assay. The mRNA expressions of interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$), interleukin-6 (IL-6), cyclooxygenase-2 (COX-2) and heme oxygenase-1 (HO-1) were analyzed by RT-PCR. Reactive oxidative species (ROS) generation was measured using the fluorescence microscopy. In addition, inducible nitric oxide synthase (iNOS) and redox factor-1 (Ref-1) protein expressions were detected by Western blotting. Results : PDGP inhibited NO production and ROS generation in LPS-stimulated RAW264.7 cells. At the mRNA level, PDGP suppressed IL-$1{\beta}$, IL-6 and COX-2 expression. On the other hand, PDGP induced HO-1 mRNA expression. Furthermore, PDGP suppressed iNOS and Ref-1 protein expression. Conclusions : This result suggests that PDGP can act as a suppressor agent on NO and iNOS through induction of HO-1, and play an useful role in blocking inflammatory responses.
Objectives : Pinus densiflora gnarl, called Song-Jeol in Korean medicine, has been used to cure inflammatory diseases such as arthritis. In the present study, we evaluated inhibitory property of Song-Jeol pharmacopuncture(SJ) on C6 glioma cell migration. Methods : To evaluate cell viability on C6 glioma cells of SJ, the viability was assessed by using Ez-cytox assay kit. The cell migration was assessed by wound-healing assay and Boyden chamber assay, respectively. LPS-induced NO productions were determined by using the Griess reagent. The expression of iNOS and protein kinase $C(PKC)-{\alpha}$ were estimated by western blotting assay. Results : In the wound-healing assay and Boyden chamber assay, SJ showed a significant inhibition on serum-induced C6 glioma cell migration. In addition, NO production was decreased by SJ through suppression of iNOS expression in LPS-stimulated C6 glioma cell. Futhermore, LPS-induced protein kinase $C(PKC)-{\alpha}$ expression was effectively inhibited by SJ. Conclusions : These results demonstrated that SJ was useful for the suppression of the C6 glioma cell migration.
목적 : 이 연구는 관절 및 심혈관계 질환 치료에 사용되는 송절(松節)(Pinus densiflora Gnarl)을 약침용 시료로 조제하여 본 약물의 항산화 효능을 규명하고자 하였으며 이를 다양한 시스템에서 검토하였다. 방법 : $FeCl_2$-ascorbic acid system에서 흰쥐 간조직의 지질과산화 반응을 관찰하였고, Fenton reaction system에서 자유기에 의한 plasmid DNA 분절을 유도하였다. 또한 deoxyribose assay를 통해 hydroxyl radical 소거능을 관찰하였고, NBT reduction assay로 superoxide radical 소거능을 검토하였다. 또한 human low-density lipoprotein(LDL)의 산화를 유도하기 위해 $CuSO_4$와 AAPH를 사용하였으며 relative electrophoretic mobility (REM) assay로 LDL 산화 억제 효능을 대조 항산화물질과 비교 검토하였다. 결과 : 송절 약침액은 자유기에 의한 간조직의 지질과산화(p < 0.01)및 DNA 분절을 현저하게 억제하였으며, hydroxyl radical, superoxide radical (p < 0.01), nitric oxide 및 peroxynitrite를 강하게 소거하였다. 또한 $CuSO_4$ ($IC_{50}=9.2{\pm}0.2\;{\mu}g/ml$)와 AAPH ($IC_{50}=34.8{\pm}5.1\;{\mu}g/ml$)에 의해 유도된 human LDL의 산화를 억제하였고, REM assay에서도 산화 억제 효능을 재확인할 수 있었다. 결론 : 송절 약침액은 활성산소종 및 활성질소종를 소거하였고, 지질과산화를 억제하였으며, 특히 human LDL의 산화적 손상을 방어하였다. 이에 본 약물은 자유기에 의한 심혈관의 산화적 손상을 효과적으로 보호할 것으로 판단된다.
본 연구는 소나무 부위별 추출물을 피부염 유발 균주에 적용함으로써 항균 및 항진균 활성을 측정하고 그 결과를 보고하고자 하였다. 먼저 paper disc 법을 이용하여 항균 및 항진균 실험에서 송엽, 송절 및 송화 에탄올 추출물은 대부분의 피부염 균주에 대하여 항균활성을 나타내었으나, 물 추출물은 모든 피부염 균주에 대하여 항균활성을 나타내지 않았다. 송엽 및 송절 70% 에탄올 추출물이 T. rubrum을 제외한 모든 피부염 균주에 대하여 항균활성을 나타내었으며, 송화 70% 에탄올 추출물은 C. tropicalis와 P. acens에 대해서만 항균활성을 보였다. 소나무 essential oil의 항균 및 항진균 활성을 측정한 결과, C. albicans, C. tropicalis, T. rubrum에 대해 1.5~3 mm 정도의 생육저해환을 형성하여 높은 항진균 활성을 나타내었다. 이러한 결과를 바탕으로 소나무 부위별 70% 에탄올 추출물에 활성을 나타내었던 피부염 관련 균주 6종에 대한 최소생육 저해 농도를 측정한 결과, 송엽 70% 에탄올 추출물은 C. tropicalis 및 P. acnes에 대하여 0.002%와 0.0063%의 낮은 농도에서 항균효과가 나타났고 송절 70% 에탄올 추출물은 0.003% 농도에서 P. acnes의 생육을 억제하여 뛰어난 효과를 보였다. 소나무 essential oil의 최소생육 저해 농도를 측정한 결과, 0.025% 농도에서 C. albicans와 C. tropicalis의 생육을 효과적으로 억제하는 것으로 나타났다. 송엽 essential oil은 C. albicans, C. tropicalis, T. rubrum에 대해 항진균 효과가 있는 것으로 확인되었다. 이상의 결과를 통해 소나무 부위 중 송엽과 송절 70% 에탄올 추출물에서 항균 및 항진균 효과가 뛰어났으며, 특히, 송절 70% 에탄올 추출물이 S. aureus, S. epidermidis, P. acnes에 대해 더 높은 항균 효과를 나타내었다. 따라서, 소나무 송절과 송엽 에탄올 추출물과 essential oil은 Candida 속과 P. acnes에 대한 억제효과가 크게 나타나 이와 관련한 피부질환 개선에 효과가 클 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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