본 연구에서는 발효식품의 저장기간을 연장하거나 이상발효를 방지하기 위해 미생물 유래의 천연 항균성 물질인 killer toxin 생산 균주인 K3, K5, K11, K12, K15를 전통누룩으로부터 분리하였다. 분리된 killer toxin 생산 균주 중 식중독의 원인균인 Salmonella Typhimurium 및 장염비브리오의 원인균인 Vibrio parahaemolyticus의 생육을 저해하며, killer toxin 활성이 가장 우수한 K15를 최종 선발하고 이를 Biolog사 동정시스템과 ITS영역의 염기서열 homology를 조사하여 동정한 결과, Pichia anomala에 99% 상동성을 나타내어 Pichia anomala K15로 명명하였다. P. anomala K15가 생산하는 killer toxin은 단백질 분해효소에 의해 불활성화 되므로 인체에서 단백질 분해효소에 의해 쉽게 분해가 가능한 안전한 항균물질임을 확인할 수 있었다. 또한 p. anomala K15는 에탄올 내성은 약하나 고농도의 당에서 저항성이 크므로 주조 발효초기 환경에서의 이상발효를 방지할 수 있을 것으로 사료되어진다.
Three strains of yeasts, Pichia farinosa SKM-1, Pichia anomala SKM-T, and Galactomyces geotrichum SJM-59, produced volatile flavor compounds during fermentation. To investigate these volatile flavor compounds, the liquid culture broth of the three yeast strains were extracted with methylene chloride, and then GC and GC-MS analyses were conducted. Flavor analyses revealed that 5, 12, and 15 kinds of volatile compounds were isolated, and 4, 8, and 11 volatile flavor compounds were identified, respectively. Phenylethyl alcohol was identified with the common volatile flavor compound of Pichia farinosa SKM-1, Pichia anomala SKM-T, and Galactomyces geotrichum SJM-59. 1H-indole-3-ethanol, a precursor of plant growth hormone, was identified from Pichia anomala SKM-T.
Livestock industry requires alternatives of antibiotics to prevent environmental pollution and to maintain public health. We herein report on an effective method to reduce ammonia from livestock manure, and confirmed environmentally-friendly livestock production by adding three types of yeast probiotics, Pichia farinosa SKM-1, Pichia anomala SKM-T, and Galactomyces geotrichum SJM-59, into the feed stuff, separately and/or mixed, and these three types of yeasts were administered to the Hy-line brown layers for 8 weeks. Compared with control, the laying performance, the egg quality, and the number of intestinal lactic acid producing bacteria of the treated group were improved and/or increased significantly. Pichia anomala SKM-T potently reduced ammonia production from poultry manure, and the other strains were also able to reduce the ammonia from it. The optimum condition for the reduction of ammonia with Pichia farinosa SKM-1, Pichia anomala SKM-T, and Galactomyces geotrichum SJM-59 was obtained by using the augmented centroid-simplex design. The ratio of optimum condition was Pichia farinosa SKM-1:Pichia anomala SKM-T:Galactomyces geotrichum SJM-59=0.295:0.209:0.080, and the estimate was -123.36 (p=0.0l38). An ability to reduce the ammonia production from livestock manure was maintained at $30^{\circ}C$ for 15 weeks.
본 연구에서는 와인제조에 있어 향미 증진과 같은 품질향상에 도움이 된다고 알려진 Pichia anomala JK04와 일반적으로 와인 양조에 주로 이용되고 있는 Saccharomyces cerevisiae Fermivin을 혼합 발효하여 감와인의 발효 특성을 비교하였다. 감와인의 발효특성 결과 발효 종료 시 대부분의 실험구에서 pH 4.0~4.2, 총산 0.5~0.6%를 나타내었다. 당도와 환원당 함량 변화는 발효가 진행될수록 점차 감소하여 S. cerevisiae Fermivin 단독 발효구와 P. anomala JK04 혼합 첨가 발효구에서 발효 종료시점에서 대부분의 당이 소비되었다. 최종 알코올 함량은 S. cerevisiae Fermivin 단독 발효구와 S. cerevisiae Fermivin과 P. anomala JK04의 혼합첨가 발효구에서 알코올 생성이 빨랐으며 발효 종료 시 모든 구의 알코올 농도는 12~13%를 나타내었다. 각 첨가구의 총 페놀성 화합물 함량은 0.05 mg/mL로 초기 페놀성 화합물 함량과 비슷한 수준을 유지하였다. 감와인의 hue value는 발효 초기에 비해 증가하여 4~5의 값을 나타내었고, intensity value는 발효초기 0.5의 값에서 점차 감소하여 발효 종료 시까지 0.1~0.2의 값을 유지하였으며 휘발성 향기성분의 경우 P. anomala JK04의 첨가 비율이 높을수록 S. cerevisiae Fermivin 단독발효구 보다 다양한 알코올류, 에스테르류가 생성되었다. 관능검사 결과에서 향기와 맛의 평가에서 P. anomala JK04를 첨가한 모든 혼합 발효구에서 S. cerevisiae Fermivin 단독발효구 보다 높은 점수를 얻었다.
세포 외로 단백질분해효소를 생산하는 효모 균주 CO-1을 대나무 부산물에서 분리하였다. CO-1은 원형 또는 타원형($3.1-4.0{\times}3.8-4.4{\mu}m$)으로, 생장을 위한 최적 온도는 $30^{\circ}C$, 초기 pH는 4.0이었다. 그리고 최대 15.0% (w/v)의 NaCl과 9.0%(v/v)의 ethanol 농도에서 생장하였다. 형태적, 생리 생화학적 특성 및 18S rRNA 유전자 염기서열을 통한 계통분석을 이용하여 동정을 실시한 결과 Pichia anomala로 판명되었다. P. anomala CO-1 단백질분해효소를 부분 정제한 결과 수율은 7.2%였으며, 정제 전에 비해 약 14.6배 정제되었다. Zymogram으로 측정한 효소의 분자량은 약 30 kDa으로 확인되었다. 본 균주는 배지 중에 탄소원과 질소원, 무기염으로 1.0%(w/v) CMC와 1.0%(w/v) yeast extract, 0.3%(w/v) $MnSO_4$를 사용하였을 경우 가장 높은 단백질분해효소 활성을 나타내었다. P. anomala CO-1이 생산하는 단백질분해효소의 최적 활성 pH와 온도는 각각 7.0과 $30^{\circ}C$였다. 또한 본 효소는 pH 4.0-10.0에서 75%의 안정성을 나타내었으며, $65^{\circ}C$에서 1시간 가열하여도 60% 전후의 활성을 유지하였다. 균주의 효소 생산은 생육과 비례하였으며 대수증식기 후반에 최대의 효소 생산을 나타내었다.
한국 전통 발효식품에서 분리한 효모로부터 인산 가용화 활성이 우수한 5균주를 선발하였다. 선발한 균주 중 2균주는 Pichia anomala로 동정되었고, 3균주는 각각 Pichia farinosa, Candida versatilis, Pichia subpelliculosa로 동정되었다. 인산 가용화 효모는 $20{\sim}35^{\circ}C$의 온도에서 잘 자라는 중 온성 효모였으며 P. farinosa Y669는 $45^{\circ}C$의 고온에서도 생장하였다. C. versatilis Y907 균주는 pH 5~6의 좁은 pH 범위에서 생장하였고 15%의 NaCl 농도까지 내성을 나타내는 호염성 균주였다. 그 외 4균주는 pH 4.0~8.0에서 생장하였으며 NaCl 10% 농도에서 내성을 나타내었다. 인산 가용화 균주는 토양에서도 8주 동안 $10^7{\sim}10^8$ cfu/g의 밀도를 유지하며 생존하였다. 분리균주 중 인산 가용화 활성은 P. subpelliculosa Y1101가 가장 우수하였으며 배양 11일 후 697.2 ug/mL의 유리인산을 생성하였다.
간장국제조과정중에 생육하는 효모들을 계수 및 분리 동정하고 TTC 정색에 의하여 유발한 결과는 다음과 같다. 1. 간장국 1g 중의 효모수는 3일국에 $97{\times}10^3$, 4일국에 $135{\times}10^3$, 5일국에 $179{\times}10^3$개로서 제국일수의 경과에 따라 효모수가 증가하였다. 2. 이들 효모의 TTC 정색에 었어서 White가 53.6${\sim}$71.9%, Red가 5.6${\sim}$11.1%, Red pink가 6.8${\sim}$1905 pink가 11.1${\sim}$22.6%로서 white 효모가 가장 많았고 Red 효모가 가장 적었다. 3. 30주를 임의 분리하여 동정한 결과 Saccharomyces rouxii 5주, Saccharomyces fermentati 2주, Saccharomyces rosei 1주, Hansenula suaveolens 1주, Hansenula anomala 6주, Pichia polymorpha 6주, Debaryomyces nicotianae 2주, Debaryomyces hansenii 2주, Torulopsis candida 2주, Torulopsis sake 2주, Candida pelliculosa 1주등 6속 11종으로 동정되었다. 4. 등정한 이들 효모를 TTC 정색에 따라 유별한 결과 Hansenula suaveolens, Hansenula anomala, Candida pelliculosa, Debaryomyces nicotianae, Pichia polymorpha 등은 국중에 생육하는 전체 효모의 약 60%를 차지하는 TTC white 효모구에 속하였으며 Saccharomyces rouxii와Saccharomyces rosei는 Red 로 Saccharomyces fermentati와 Debaryomyces hansenii는 Red pink로 Torulopsis candida와 Torulopsis sake는 pink로 나타났다. 5. 분리된 효모의 대부분이 무염 또는 식염10% 합유배지에서 잘 생육하나 15-18% 식염 합유배지에서는 생육이 거이 억제되었다.
Wild yeasts on the surface of various fruits including grapes were surveyed to obtain yeast strains suitable for fermenting a novel wine with higher alcohol content and supplemented with rice starch. We considered selected characteristics, such as tolerance to alcohol and osmotic pressure, capability of utilizing maltose, and starch hydrolysis. Among 637 putative yeast isolates, 115 strains exhibiting better growth in yeast-peptone-dextrose broth containing 30% dextrose, 7% alcohol, or 2% maltose were selected, as well as five ${\alpha}$-amylase producers. Nucleotide sequence analysis of the 26S rDNA gene classified the strains into 13 species belonging to five genera; Pichia anomala was the most prevalent (41.7%), followed by Wickerhamomyces anomalus (19.2%), P. guilliermondii (15%), Candida spp. (5.8%), Kodamaea ohmeri (2.5%), and Metschnikowia spp. (2.5%). All of the ${\alpha}$-amylase producers were Aureobasidium pullulans. Only one isolate (NK28) was identified as Saccharomyces cerevisiae. NK28 had all of the desired properties for the purpose of this study, except ${\alpha}$-amylase production, and fermented alcohol better than commercial wine yeasts.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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