Protein methylase inhibitor which is a modulator of biological methylation has been purified and characterized from porcine liver soluble fraction by cell fractionation, Sephadex G25 chromatography, reverse phase HPLC, size exclusion HPLC. The results are summarized as follows. 1) The purified inhibitor shows apparent homogeneity, as judged by HPLC. 2) A molecular weight of the purified inhibitor which is composed of 18 amino acid residues is about 1,400 daltons. 3) A single absorption peak of ultraviolet spectrum was observed at 260nm. 4) The inhibitor was not inactivated by heating at $100^{\circ}C$ until 60min. and its activity was not influenced by treatment with digestive enzymes, such as trypsin, pepsin, pronase, chymotrypin, lysozyme, DNase, and RNase. 5) The purified inhibitor inhibited protein rnethylase I, II, III and phospholipid methyltransferase activities. 6) The purified inhibitor inhibited noncompetitively protein methylase II from porcine liver, spleen, and testis. 7) The $K_{i}$ values for protein methylase II from porcine liver, spleen, and testis were 300nM, 250nM, 297nM, respectively.
Trichosanthes cucumerina Linn. (cucurbitaceae) is widely used in Indian folk medicine for variety of disease conditions. The aim of present study was to evaluate the antiulcer activity of 50% ethanolic extract of fruits of Trichosanthes cucumerina Linn. (TCFE) using various experimental models of gastric and duodenal ulceration in rats. Oral administration of 50% ethanolic extract of fruits of Trichosanthes cucumerina Linn. was evaluated in rats against ethanol, aspirin and pylorus ligated gastric ulcers as well as cysteamine-induced duodenal ulcers. In all the models studied, the antiulcer activity of TCFE compared with that of cimetidine (100 mg/kg, p.o.), an $H_2$ receptor antagonist. TCFE showed significant antiulcer activity in ethanol-induced and aspirin-induced gastric ulcer models. In 19 h pylorus ligated rats, significant reduction in ulcer index, total acidity and pepsin activity was observed with TCFE, when compared with the control group. Mucosal defensive factors such as pH, mucin activity and gastric wall mucous content was found to be increased with TCFE. TCFE was also, afforded remarkable protection in cysteamine-induced duodenal lesions. The antiulcer activity of TCFE was comparable with that of cimetidine. Thus, TCFE possess significant antiulcer activity against both gastric and duodenal ulcers in rats. The antiulcer activity may be attributed to its cytoprotective action and inhibition of acid secretary parameters.
In this study, seven strains isolated from mustard leaf kimchi were screened for their tolerance to simulated gastric and bile juices, the adhesive properties to Caco-2 cells, and the inhibition ability of Salmonella Typhimurium ATCC 29631 adhesion. Lactobacillus acidophilus GK20, Lactobacillus paracasei GK74, and Lactobacillus plantarum GK81, which were resistant to bile as well as gastric juices, possessed high bile-salt hydrolase (BSH) activity towards both sodium glycocholate and sodium taurocholate. The strongest in vitro adherence of $53.96{\pm}4.49%$ was exhibited by L. plantarum GK81 followed by L. acidophilus GK20 with adhesion levels of $40.72{\pm}9.46%$. The adhesion of these strains was significantly (p < 0.05) reduced after exposure to pepsin and heating for 30 min at $80^{\circ}C$. Addition of $Ca^{2+}$ led to a significant (p < 0.05) increase of the adhesion of L. acidophilus GK20, but the adhesion ability of L. plantarum GK81 was not different from the control by the addition of calcium. In the competition and exclusion experiment, the adhesion inhibition of S. Typhimurium by L. plantarum GK81 strain was much higher than the other strains. Moreover, the exclusion inhibition of S. Typhimurium by L. acidophilus GK20 was considerably high, although the inhibition activity of this strain was lower than L. plantarum GK81.
We applied enzymatic hydrolysis and tangential flow filtration (TFF) to purify a novel anticancer peptide from Mytilus coruscus (M. coruscus) and investigated its anticancer properties. To prepare the peptide, eight proteases were employed for enzymatic hydrolysis. Pepsin hydrolysates, which showed clearly superior cytotoxic activity on prostate cancer cells, were further purified using a flow filtration system using a TFF and consecutive chromatographic methods. Finally, a novel anticancer peptide was obtained, and the sequence was identified as Ala-Phe-Asn-Ile-His-Asn-Arg-Asn-Leu-Leu. The peptide from M. coruscus effectively induced cell death on prostate, breast and lung cancer cells but not on normal liver cells. This is the first report of an anticancer peptide derived from the hydrolysates of M. coruscus.
To utilize collagen as an implantable biomateriall the mcct widely used bovine skin origin Type I collagen was investigated Pepsin treated, Type I atelocollagen was extracted and crosslinked by the ultraviolet(W) ray with wavelength of 254nm or by various concentrations of glutaraldehyde to produce collagen membranes. The crosslink rates of the specimens were observed by a polarized light microscope, a scanning electron microscope, and a Fourier transform infrared (FT-lR) spectrometer. The followings are concluded 1. The collagen membranes produced by both 2.5% glutaraldehyde solution and 254nm UV ray irra- diation demonstrated similar morphologies on polarized light microscopic and scanning electron microscopic views. 2. The chemical structures of the crosslinked membranes by glutaraldehyde over 2.5% in concentrations revealed similar intensities to that of the UV ray irradiated one in FT-lR investigation. 3. To obtain optimal croulink in bovine stalin origin Type I atelocollagen, 2.5% glutaraldehyde solution or UV ray irradiation with 254nm wavelength is acceptable.
Inhibitory activities of 264 methanol extracts, which were prepared from different parts of 210 kinds of wild and medicinal plants, against human thrombin were evaluated. Based on the anti-coagulation activity determined by thrombin time and activated partial thromboplastin time, the 14 extracts were screened. The fibrinolytic activity, heat stability and inhibition of other proteolytic digestive enzymes, such as pepsin, papain, trypsin and chymotrypsin, of the 14 extracts were further determined, and Ginko biloba (herba), Ephedra sinica (radix), Reynoutria elliptica (herba), Amomum tsao-ko Crevost (fructus), and Magnolia officinalis Rehd. et Wils (bark) were finally selected as possible plant sources for anti-thrombosis agent. These results suggested that medicinal and wild plants could be the potential source of thrombin inhibitor.
This study evaluated the binding abilities of rabbit anti-ovalbumin (OVA) immunoglobulin G (IgG) and egg-allergic patient IgE on gamma-irradiated OVA during proteolysis using pepsin and trypsin. The concentrations of both the intact and the irradiated OVAs decreased during proteolysis when detected with IgG However, when detected by patient IgE the concentration of the intact OVA decreased up to 30 min after the trypsin treatment and increased thereafter. Irradiated OVA detected by patient IgE showed a lower initial concentration (0.16%) than that of the intact OVA, and this reduced concentration was maintained stably. The results indicate that irradiation, rather than enzymatic treatment, could reduce the binding of the irradiated and enzyme-treated OVA. Therefore, gamma irradiation has potential as an effective method to reduce OVA-induced allergy and may enhance the safety of egg-allergic individuals.
Distribution of the proteolytic activities of crude pretense extracted from the viscera of ten kinds of fish was examined. Their proteolytic activities on proteinous substrates (azocasein, hemoglobin, and casein) from the viscera of anchovy, bastard flatfish, mackerel and red sea bream were higher than those of other fishes, and the crude pretenses were further fractoinated with acetone or ammonium sulfate. Optimum concentrations for pretenses fractionation were $0\~55\%$ for acetone and $30\~70\%$ for ammonium sulfate. The fractionated viscera pretense of mackerel showed the highest proteolytic activity among four kinds of fishes. Activities of cathepsin D- and pepsin-like enzymes at pH 3.0, cathepsin L-, B-, H- and G-like enzyme at pH 6,0, and Hypsin- and chymotrypsin- like enzymes (pH 8.0) were detected in the fractionated viscera pretense, whereas activities of cathepsin L- and chymoeypsin-like enzyme were observed in commercial pretenses. Proteolytic activities of Alcalase, Protamex, and Aroase AP-10 for azocasein were slightly higher than the fractionated viscera pretenses, but their amidolytic activities at pH 6.0 and 8.0 toward synthetic substrates were lower than counterpart. The fractionated pretenses from fish viscera would be utilized as commercial pretenses.
Lactobacillus strains were isolated from volunteer's feces, including from newly-born infants and adults in their 20's, by using differential MRS-BPB plates. Total 56 presumptive Lactobacillus strains were isolated and the bacteriocin productions by the isolates were examined by agar diffusion method. Six bacteriocin-producing strains were confirmed. Among them, two isolates, HU-1 and H22-3, showed the most outstanding antimicrobial activities, which were not affected by pH adjustments or catalase treatments of culture. HU-1 was originated from a two-years old boy and H22-3 was originated from a newly-born infant. HU-1 and H22-3 had the same morphology(short rod) when examined by scanning electron microscope, and the same biochemical traits including growth temperature range, salt tolerance and sugar-fermenting abilities. But the growth-inhibition spectrum and plasmid profiles of HU-1 and H22-3 were different. Both strains inhibited the growth of various Gram (+) microorganisms including Listeria monocytogenes. Micrococcus luteus, and Staphylococcus aureus in addition to many species of lactic acid bacteria, indicating the production of broad-spectrum bacteriocins. Bacteriocins produced by HU-1 and H22-3 were stable up to 90℃, 15 min heat treatments. Their activities were not affected by pepsin or trypsin treatments but destroyed by proteinaseK or pronase treatments.
Seahorses have long been used as ornamental and medicinal products. The sea horse Hippocampus abdominalis has a beautiful color and unique shape and is also used for ornamental purposes and as a traditional medicine in China. This study examined the value of H. abdominalis as a health functional food or food additive. H. abdominalis was hydrolyzed using seven proteases: flavourzyme, neutrase, alcalase, trypsin, kojizyme, pepsin and protamex. The yields of all of the enzyme hydrolysates were higher than that of the aqueous extract. Of the enzymatic hydrolysates, seahorse Protamex hydrolysate (SHP) gave the highest yield and had excellent antioxidant and angiotensin-I converting enzyme inhibitory activities. It protected Vero cells against oxidative by 2,2-azobis-(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH) and antihypertension in Spontaneously Hypertensive Rats. This study attempted to demonstrate H. abdominalis as a health functional food or food additive in the future.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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