음식물류폐기물의 무항생제 액상사료화를 통한 고급자원화를 이루기 위하여 항생제 대체용 항세균 활성 유산균주 13 종을 돼지 장관 및 분변에서 분리하였다. 분리 유산균은 모두 내염성(Nacl 4%), 내산성 (pH4.0) 및 내담즙성 (oxgall 0.8%)을 보였으며, $37^{\circ}C$에서 생장이 가장 높게 나타났다. 분리 유산균주중 Lactobacillus plantarum CJY-22, Pediococcus sp. CJY-41, Lactobacillus brevis CJY-42 및 Lactobacillus arizonensis CJY-3 균주가 가장 높은 항세균 활성 및 광역의 항세균 활성 스펙트럼을 나타냈으며, Lactobacillus plantarum CJY-22 균주의 경우 $25^{\circ}C$에서도 생장이 원활하여 음식물류폐기물에 적용시 가온없이 발효공정을 수행할 수 있는 유용 균주로 적용할 수 있을 것으로 사료된다.
This work is aimed to increase knowledge of the functional exopolysaccharide (EPS) from lactic acid bacteria (LAB) in makgeolli, a Korean fermented rice wine. Among LAB strains isolated from makgeolli, strain M76 was selected as a functional strain producing a bioactive EPS, based on its antioxidative activity on the DPPH radical. The 16S rRNA gene sequencing analysis showed a high sequence similarity (99.0%) with P. acidilactici, but had different biochemical properties with the already known P. acidilactici type strains in the aspect of carbohydrates utilization. The obtained P. acidilactici M76 produced a soluble EPS above 2 g/l. One-step chromatography using gel filtration after ethanol precipitation from the supernatant of P. acidilactici M76 was enough to obtain purified EPS with a single peak, showing a molecular mass of approximately 67 kDa. Componential and structural analyses of EPS by TLC, HPLC, and FT-IR indicated that the EPS is a glucan, consisting of glucose units. The purified EPS had antioxidant activity on the DPPH radical of 45.8% at a concentration of 1 mg/ml. The purified EPS also showed proliferative effect on the pancreatic RIN-m5F cell line and remarkable protection activity on alloxan-induced cytotoxicity. This potent antioxidant and antidiabetic EPS by LAB in makgeolli may contribute to understanding the functionality of makgeolli.
본 연구는 김치로부터 분리한 젖산균의 다양성과 항균성을 조사하기 위하여 수행되었다. 희석한 김치 국물을 CaCO$_3$가 첨가된 MRS 고체 배지에 도말 한 후, $25^{\circ}C$에서 2일 동안 배양하여 여러 가지 김치로부터 27가지의 젖산균을 분리하였다. 이렇게 분리한 젖산균들을 Bergey 분류법과 BPB 배지를 통한 생화학적인 방법과 16S rDNA PCR을 이용한 분자 생물학적인 방법으로써 분석하였다. 그러나 이들 방법으로 분석한 결과가 일치하지 않은 경우가 많았다. 이들 분리 젖산균은 16S rDNA 부분 염기서열을 결정한 결과 Leuconostoc mesenteriodes(11균주), Leu. carnosum(3균주), Lactobacillus curvatus(8균주), Lac. pentosus(2균주), Weisselia kimchi(1균주), W. cibaria(1균주), Pediococcus pentosaceus(1균주) 등의 것과 각각 매우 유사한 것으로 분석되었다. 이들중 Leu. carnosum은 이전에 김치에서 분리되었다고 보고된 바가 없다. 그리고 이들 김치에서 분리 동정한 균들의 항균작용 활성을 검사 해 본 결과 균주에 따라서 활성의 정도는 다르게 나타났으나 Bacillus subtilis, Escherichia coli, Salmonella enteritidis, S. paratyphica, S. typhi, Staphylococcus aureus, Shigella boydii, S. sonnei 등에 대해 뚜렷한 항균효과를 나타내었다.
토종닭 소장으로부터 가축 소화기 병원성 유해세균의 분리를 위하여 무작위 선별법과 중층-도말법을 사용하여 총130주의 유산균을 1차 분리하였다. 1차 분리한 130주를 paper disc법을 사용하여 최종적으로 살모넬라 균, 포도상구균, 대장균에 대하여 저해능이 우수한 7주를 분리하였다. 분리 균주의 동정을 위하여 1차로 API CHL kit를 사용하였고, 동정의 정확성을 높이기 위하여 2차로 16S rRNA sequencing 방법을 사용하였다. 그 결과 BD14 균주는 Pediococcus pentosaceus로 동정되었으며 나머지 6주는 Lactobacillus sp.로 동정되어 모두 안전성 있는 유산균임을 확인하였다. 여러 병원균에 가장 항균력이 큰 유산균은 L. pentosus K34이었으며, 이 유산균은 염산과 담즙산에 대한 내성에서도 가장 우수한 균주로 나타났다. 10종의 항생제에 대한 감수성을 조사한 결과 ciprofloxacin에 대하여 모든 균주가 내성을 보였고, BL 균주를 제외하고 모든 균주가 colistin, streptomycin에 대하여 내성을 보였다. 또한 BD14, BD16, K34 균주가 gentamicin에 대한 내성을 보였다.
Organic acid (OA) profiling analysis was performed in culture media from Lactobacillus pentosus K34 (L. pentosus K34) and Pediococcus lolli PL24 (P. lolli PL24) by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) following methoxime/tert-butyldimethylsilyl derivatives. 12 OAs were positively identified in culture media. Most of OA levels from L. pentosus K34 of hetero lactic fermentation were found to be higher when compared with those from P. lolli PL24 of homo lactic fermentation, which may explain different OA metabolism in each strain. In addition, the distorted dodecagonal star patterns were readily distinguishable, and the characteristics of each strain were well represented. The present study demonstrates that the OA metabolic profiling method by GC-MS combined with star pattern recognition is useful for the monitoring study of characteristic OA metabolism in various microorganisms.
Pediococcus pentosaceus JWS 939 (JWS 939) is a nonpathogenic bacteriocin-producing probiotic isolated from the duck intestine. This study assessed the immunomodulatory effects of JWS 939 and compared them with those of Lactobacillus rhamnosus GG (LGG), a well-known immune enhancer. The immune-enhancing effects of JWS 939 were measured by measuring the production of nitric oxide (NO) and cytokines in C57BL/6 mouse peritoneal macrophages. In addition, to assess the immune enhancement abilities of JWS 939, in vivo, a Listeria monocytogenes challenge mice model was used. The results showed that heat-killed JWS 939 induced more NO and interleukin (IL)-$1{\beta}$ production in mouse peritoneal macrophages than in LGG, and that oral administration of viable JWS 939 in mice increased more NO, IL-$1{\beta}$, and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ level than in LGG in serum upon L. monocytogenes challenge. In addition, mice fed with JWS 939 had a longer survival time after lethal challenge with L. monocytogenes, and these effects were stronger than those induced by LGG. Collectively, P. pentosaceus JWS 939 is a remarkable strain that, by releasing bacteriocin and enhancing host immune responses, may have potential as a duck feed additive to suppress pathogens.
KIM, SOO YEON;YOUNG MIN LEE;SUN YOUNG LEE;YEON SOOK LEE;JEONG HWAN KIM;CHEOL AHN;BYUNG CHEOL KANG;GEUN-EOG JI
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제11권5호
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pp.831-837
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2001
Pediocin K1, a bacteriocin produced by Pediococcus sp. K1 isolated from Korean traditional fermented flatfish, inhibited certain strains of Lactobacillus, Streptococcus, and Listeria monocytogenes. Pediocin K1 was found to be stable at $90^{\circ}C$ for 30 min. Among the organisms tested, Listeria monocytogenes was the most sensitive to pediocin K1 and was completely killed when the initial inoculum size of L.monocytogenes cells was equal to or less than $10^3 CFU/ml$. The degree of inibition of Listeria monocytogenes by pediocin K1 increased 10-fold on the addition of citric acid ($0.2\%$) to the medium, thereby showing the synergistic effect of citric acid. Listeria monocytogenes cells resistant to pediocin K1 appeared at a frequency of about $10^-4$/cells. Once developed after exposure to pediocin K1, the resistant phenotype still persisted in the absence of pediocin K1 in successive cultures. This infers that resistance may be attributable to genetic change(s) in the resistant cells.
김치 제조시 김치의 발효에 관하여는 유산균을 starter로 첨가하여 발효를 촉진시키고 품질을 갖는 김치 제조의 가능성을 알아보기 위해 starter첨가가 김치의 숙성에 미치는 효과를 검토한 결과 김치 발효의 주 유산균인 Lactobacillus plantarum, Lactobacillus brevis, Pediococcus cerevisiae, Leuconostoc mesenteroides의 4종류의 균주를 사용하여 단독및 혼합하여 첨가한 결과 4균주를 동일 비율로 배추량의 3% 첨가한경우 숙성을 측진시키는 경향을 나타내었으며 부재료중 고추가루는 김치의 숙성을 촉진시켰으며 생강은 starter의 초기성장을 억제시키는 경향을 나타내었다. Starter를 사용하여 김치를 제조한 경우 숙성 기간이 약 24시간 단축되었으며 기호성에 있어서도 무첨가구에 비해 전반적으로 양호하였고 특히 향이 가장 양호 하였다.
항균력을 지닌다고 보고된 겨자유는 김치의 주요 유산균인 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실루스 브레비스(Lactobacillus brevis), 페디오코커스 세레비지에 (Pediococcus cerevisiae), 로이코너스톡 메세테로이데스(Leuconostoc mesenteroides)에 항균력을 지니고 있었으며, 김치제조시 겨자유 및 겨자분을 첨가하였을 때 적숙기에 이르는 시간이 지연되었다. 겨자유의 매운맛은 배추, 무우의 매운맛 성분과 잘 조화되어 풍미에 좋은 영향을 줄 뿐 아니라 신맛을 약화시키는 효과도 지니고 있었다. 저온 열처리+겨자+과산화수소 처리 병용은 숙성이 완만하게 진행되어서 대조군에 비해 김치 적숙기에 이르는 시간이 2.5배 정도 연장되었다. 저온 열처리+겨자+과산화수소+후처리 병용군은 $15^{\circ}C$에서 저장하는 동안 발효가 천천히 진행되어 저장 15일 후에도 pH 4.32, 산도 0.4%로서 숙성 초기단계에 머물러 있었으며 대조군에 비해 김치적숙기에 이르는 시간이 5배 정도 연장되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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