Fifty four strains of pathogenic vibrios were isolated from the Gwangan Beach from May to October, 2002. The isolated vibrios were composed of 7 different species: Vibrio parahaemolyticus, V. cholerae non-O1, V. alginolyticus, V. vulnificus, V. hollisae, V. fluvialis, ane V. mimicus. In the detection rate, V. parahaemolyticus was most predominant as $46\%$(25/54). From the isolated strains, only 25 strains have hemolytic activity or 25 strains only proteolytic activity on agar plates. Eleven strains showed both hemolytic and proteolytic activity. No strains showed urease activity. All strains of V parahaemolyticus did not show hemolytic activity, while V. cholerae non-O1 strains showed $\beta$ hemolytic activity. Kanagawa phenomena of pathogenic vibrios did not accord with hemolytic activity of the culture supernatant at the late log phase. Some strains showed high hemolytic activity despite having proteolytic activity, but some weak hemolytic activities despite having no proteolytic activity.
금강 하구에서 분리한 용혈독소를 생산하는 V. mimicus와 유사하지만 분류되지 않은 기수성 Vibrio속으로 추정되는 균주 Vibrio sp. E10 (V. kunsan)의 세균학적 특징은 다음과 같다. 기본적인 생화학적 시험과 전자현미경 상의 형태에서는 V. mimicus와 유사하였지만 TCBS 배지 상의 colony 형태는 V. vulnifirus와 유사하였으므로 V. mimicus와는 차이를 보였다. Human과 sheep blood agar에서의 뚜렷한 용혈환과 rat에 피부혈관투과항진 작용으로 용혈독성이 있었으며, mouse에 대한 치사독성이 있었으므로 병원성이 확인되었다. 생육 가능한 환경 조건은 염도 0$\~$$4.5\%$, pH 6.2$\~$9.2, 온도 $14\~42^{\circ}C$이 었다. Vibrio sp. E10의 16S rDNA 염기서열은 10여종의 V. cholerae와 1종의 Vibrio mimicus의 염기서열과 $99\%$의 상동성을 보여 유사 종으로 판명되었다. 그러나 세균 자동동정기를 이용한 동정 결과, genus는 Vibrio 속으로 동정되었으나 species는 일치하는 균종이 없었다. 알려진 Vi-brio속 중에서 유사성이 높았던 V. mimicus와 비교해 볼 때 18종류의 항목이, V. cholerae와는 11종류의 항목이 다른 반응을 나타내어 미분류 균종으로 확인되었다.
The aim of this study was to investigate the effects of environmental factors such as temperature, salinity, turbidity and pH on the growth of pathogenic Vibrios. In this study, we was obtained the samples from 2 different sites of the Incheon coastal area between January 2012 and December 2012. The water temperature in August and September was the high. the Incheon port changes the width of a small, wherease in the case of Hanjin harbor of changes of larger width. Salinity and turbidity showed significant differences, whereas temperature and hydrogen ion concentration was not significant. Pathogenic vibrios was determined using the real-time PCR method. Pathogenic vibrios in the Incheon port and Hanjin harbor were detected in 11 samples (91.67%) and 9 samples (75.0%) of Vibrio cholerae, 7 samples (58.3%) and 6 samples (50.0%) of V. vulnificus, 10 samples (83.3%) and 12 samples (100.0%) of V. parahaemolyticus, respectively. Pathogenic Vibrio bacteria were the highest at $26.8^{\circ}C$ of seawater in August. Quantitative results were the following: 102 $cell/m{\ell}$ in Vibrio cholerae, 7.876 $cell/m{\ell}$ in V. vulnificus, and 503.4 $cell/m{\ell}$ in V. parahaemolyticus, respectively. The enumeration of pathogenic vibrios showed a positive correlation with temperature and pH, but was negatively correlated with salinity and turbidity.
식물성 생약재의 항균력과 활성산소(superoxide anion, $O_2^-$)의 생산에 미치는 in vitro 효과를 조사하여 금후 in vivo 실험에 적용할 때, 어류 체내 자연 저항성 증진을 꾀할 수 있는 식물성 생약재를 발굴하기 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 식물성 생약재는 고삼, 귀전우, 구절초, 박하, 방풍, 연교, 약쑥, 지유, 삼백초, 삼지구엽초, 상백피, 소회향, 편축, 팔각 등 14종류로 이들을 열수추출하여 실험에 사용하였다. 항균력 시험에는 어병세균 Listonella anguillarum(Vibrio anguillarum), Vibrio sp., Vibrio alginolyticus, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Lactcoccus garvieae를 대상으로 disk법을 사용하였으며, 활성산소의 생산능은 넙치 신장 대식세포를 이용한 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응으로써 조사하였다. 그 결과,약쑥이 다른 생약재에 비하여 시험에 사용된 어병 세균에 대한 항균활성이 월등히 뛰어났으며, 또한 넙치 대식세포의 활성산소 생산능을 크게 자극하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
The gamma-radiation sensitivity of three kinds of pathogenic bacteria to fish was investigated. $D_{10}$ values (irradiation dose required to inactivate 90% of the population) of Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum and Streptococcus faecalis were 0.08, 0.10 and 0.44 kGy, respectively. The inactivation factors were 4.50 - 24.30 and 6.75 - 36.45 at radiation doses of 2 and 3 kGy. Raw moist pellets were inoculated with Edwardsiella tarda, Vibrio anguillarum or Streptococcus faecalis. Inoculated feed samples were packaged in air and irradiated at 5 kGy. This dose was effective in controlling the inoculated and general bacteria in fish feed. We consider gamma-radiation to be an effective method to sterilize pathogenic bacteria in fish feed.
V. parahaemolyticus 종류들이 gelatin분해 확인 실험에서 큰 clear zone을 형성했고, V. alginolyticus 분리균주도 V. parahaemolyticus와 비슷한 clear zone을 형성했다. V. fluvialis KCTC 2473은 clear zone을 형성하지 못했다. Hemolytic activity측정 실험에서는 V. parahaemolyticus 분리균주(2)가 가장 활성이 크게 나타났고, V. parahaemolyticus ATCC 17802, V. parahaemolyticus 분리균주(1)과 V. mimicus ATCC 33653도 높은 활성을 나타냈으며, 나머지 다른 비브리오균은 활성이 나타나지 않았다. Azocasein분해 활성 실험에서는 V. parahaemolyticus ATCC 17802, 분리균주(1), 분리균주(2)는 200EU/m1전후로 활성이 높게 나타났고, 나머지는 110EU/ml전후로 활성이 상대적으로 낮게 나타났다.
LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification)법은 PCR를 기반으로 등온에서 autocycling 가닥 변위 DNA 합성에 의존하며, Bst polymerase를 사용하여 진단하는 방법이다. 이것은 대상 DNA의 여섯 개의 배열을 인식하는 4개의 특정 primer의 도움을 받아 단시간 안에 병원체를 식별하는 높은 특이성을 지니고 있다. 본 연구에서는 LAMP로 수생에서 위험한 병원체인 Vibrio alginolyticus의 특별한 LAMP primer를 제작하였으며, 신속한 진단을 위해 MgSO4, dNTP, Betaine, Bst polymerase의 최적 반응 조건의 특이성 및 기존의 PCR보다 10배 정도의 민감하다는 것을 확인하였다. 또한, 디자인 되어진 LAMP primer가 다른 Vibrio 종들 중 오직 V. alginolyticus에서만 반응한 것을 확인 할 수 있었다. 본 논문에서는 병원체 세균인 V. alginolyticus의 빠르고 민감한 효과적인 진단으로 양식 질병들을 조기에 발견할 수 있도록 개발하였다.
Fifty-two pathogenic Vibrio parahaemolyticus strains were isolated from the environments of Busan and Yeosu, Korea. Forty-three of these strains showed protease activities, whereas 4 strains showed $\alpha / \beta$ hemolysin activities and 6 strains had urease activities. Their pathogenic factors were not overlapping except one strain, which had both protease and hemolysin activities. The 6 urease-positive strains (V. parahaemolyticus YKB4, YKB14, S25, YFB20, YFO21, and YFO22) showed the same biochemical characteristics as a reference strain [V. parahaemolyticus KCTC 2471 (urease-negative)], except for urease production. The 6 urease-positive strains showed different urease activities in their culture supernatant during the growth. The urease activity of S25 increased sharply at the late exponential phase, and was the highest at the initial stationary phase and was kept until the late stationary phase. The other 5 isolates, except C25, showed urease activities at the mid-stationary phase and increased steadily until the late stationary phase, when the urease activity was maximal. To compare the degree of virulence of V. parahaemolyticus with different pathogenic factors, hemolysin, protease, or urease-positive strains were injected into groups of 10 each of ICR mice (7- to l0-week-old males). The lethal rates of urease-positive V. parahaemolyticus, YKB14, YKB4, and S25, were significantly high, being 50, 70, and 80%, respectively. Protease-positive V. parahaemolyticus strains FM39 and FM50 showed 40% and 60% of lethal rate, respectively. Hemolysin-positive V. parahaemolyticus strains S34 and S72 had no mortality, similar to nonpathogenic V. parahaemolyticus FM12.
양식방어(Seriola quinqueradiata)에 vibrio병이 발생하여 상당한 피해를 입고 있다. 본 연구는 양식방어에 발생한 vibrio병의 원인균에 대한 생화학적 성상, 생물학적 성상, 약제감수성및 병원성을 검토한 것으로 결과는 아래와 같다. 1. 병어의 신장에서 원인균을 분리하였으며 생화학적 성상, 생물학적 성상을 조사하여 Vibrio sp.로 동정하였다. 2. 분리균이 발육할 수 있는 NaCl농도는 $0.5{\sim}7\%$(최적농도; $3\%$), pH의 경우는 $6{\sim}10$(최적; 9)였다. 3. 분리균은 tetracycline, chloramphenicol, gentamycin에 감수성을 나타내었으나, sulfisomezole, sulfisoxazole이는 감수성이 없었다. 4. 수온에 따르는 병원성은 $25^{\circ}C$에서는 모든 접종어에 병원성을 나타냈으나, $15^{\circ}C$에서는 방어만 병원성을 나타냈다.
Objectives : This experimental study was performed in order to investigate the antibacterial effect of bio-fermented Galla Rhois extract. Methods : The Galla Rhois extract was fermented by Streptococcus thermophilus, Saccharomyces cerevisiae and Lactobacillus delbrueckii, and their products was tested for antibacterial activity against six pathogenic microorganisms namely, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Escherichia coli and Salmonella typhimurium by paper disc diffusion method. Results : The Galla Rhois fermented extract by Lactobacillus delbrueckii and Saccharomyces cerevisiae showed more effective antibacterial activity than not fermented extract against Bacillus subtilis and Vibrio parahaemolyticus. Antibacterial activity of fermented extract using especially Lactobacillus delbrueckii and Saccharomyces cerevisiae was proved that it was good with even 2 percents concentration. Antibacterial activity of Galla Rhois extract within pH 3 to pH 7 had been safe regardless of pH but low over pH 9. The growth of Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, and Vibrio parahaemolyticus had a tendency to decrease depend on the increasing concentration of the extract. EtOEt, EtOAc and n-BuOH fractions of the Galla Rhois extract had a high level of antibacterial activity against Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus and Vibrio parahaemolyticus, respectively. Surprisingly, EtOAc fractions of the Galla Rhois extract showed higher antibacterial activity against Vibrio parahaemolyticus alone. And antibacterial activity against six pathogenic microorganisms had a tendency to increase depend on the increasing concentration of the fractions of the Galla Rhois extract. Conclusions : Bio-fermented Galla Rhois extract, efficiently inhibited the growth of Bacillus cereus and Vibrio parahaemolyticus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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