The purpose of this study were to determine that dexamethasone(Dex) induces differentiation of periodontal ligament(PDL) cells to osteoblastic cells and to investigate expression of matrix Gla protein(MGP), which is one of bone matrix protein. The isolated human PDL cells and gingival fibroblasts were prepared and cultured. The fourth or sixth sub-passage cells were used in this experiments. control group, ascorbic acid and ${\beta}$-glycerophosphate treated group, ascorbic acid, ${\beta}$-glycerophosphate and l00nM Dex treated group, ascorbic acid, ${\beta}$-glycerophosphate, and 5 ${\mu}M$ Dex treated group were made for study. The results were as follows: Cellular morphological change of PDL cells according to time was investigated. At first, the cells exhibited confluent monolayer of spindle or polygonal appearance. The multilayer of cells were seen after 7 days of treatment. After 14 days, the cells lost polarity and were densely packed. The mineralized nodule formation was seen at 21 days in the only Dex treated PDL cell groups. In the gingival fibroblast groups and no Dex treated PDL cell groups, the mineralized nodule was not seen. The mineralized nodule formation of 5 ${\mu}M$ Dex treated group was higher than 100 nM Dex treated group. Alkaline phosphatase(ALP) activity was higher in the Dex treated PDL cell groups of 14 and 21 days than 0 and 7 days. MGP was expressed in the control and all experimental groups and the expression was constant at 0,7,14,21 day. The above results confirm that Dex is affected to differentiation of the PDL cells to osteoblastic or cementoblastic cells and has dose-dependent effect for mineralization. And, MGP is expressed in the PDL cells and is not affected to mineralization of PDL cells.
Purpose: Fibronectin(FN), one of the major components of ECM, mediates wide variety of cellular interactions including cell adhesion, migration, proliferation and differentiation. In this study, we used synthetic peptides based on fibrin binding sites of amino-terminal of FN and evaluated their biologic effects on periodontal ligament(PDL) cells. Materials and methods: PDL cells were cultured on synthetic oligopeptides coated dishes and examined for cell adhesion, proliferation via confocal microscope. For detection of ERK1/2, cells were plated and Western blot analysis was performed. Results: PDL cells on synthetic oligopeptide coated dishes showed enhanced cell adhesion and proliferation. Western blot analysis revealed increased level of ERK1/2 phosphorylation in cells plated on FN fragment containing fibrin-binding domain(FF1 and FF5) coated dishes. Conclusion: These results reveals that FN fragment containing fibrin-binding domain possess an enhanced biologic effect of PDL ligament cells.
Kim, Ji-Young;Yang, Daum;Kim, Ha-Neui;Jung, Kyoung-Suk;Chang, Young-Il;Lee, Zang-Hee
International Journal of Oral Biology
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v.34
no.2
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pp.53-59
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2009
Periodontal ligament (PDL) tissue is a connective tissue that is interposed between the roots of the teeth and the inner wall of the alveolar bone socket. PDL is always exposed to physiologic mechanical force such as masticatory force and PDL cells play important roles during orthodontic tooth movement by synthesizing and secreting different mediators involved in bone remodeling. The Wnt/${\beta}$-catenin signaling pathway was recently shown to play a significant role in the control of bone formation. In the present study, we applied cyclic tensile stress of 20% elongation to cultured human PDL cells and assessed its impact after six days upon components of the Wnt/${\beta}$-catenin signaling pathway. RTPCR analysis showed that Wnt1a, Wnt3a, Wnt10b and the Wnt receptor LRP5 were down-regulated, whereas the Wnt inhibitor DKK1 was up-regulated in response to these stress conditions. In contrast, little change was detected in the mRNA expression of Wnt5a, Wnt7b, Fz1, and LRP6. By western blotting we found decreased expression of the ${\beta}$-catenin and p-GSK-3${\beta}$ proteins. Our results thus show that mechanical stress suppresses the canonical Wnt/${\beta}$-catenin signaling pathway in PDL cells.
Objectives: This study was performed to investigate the biocompatibility of newly introduced Bioaggregate on human pulp and PDL cells. Materials and Methods: Cells were collected from human pulp and PDL tissue of extracted premolars. Cell culture plate was coated either with Bioaggregate or white MTA, then the same number of cells were poured to cell culture dishes. Cell attachment and growth was examined under a phase microscope after 1,3 and 7 days of seeding. Cell viability was measured and the data was analyzed using Student t-test and one way ANOVA. Results: Both types of cells used in this study were well attached and grew healthy on Bioaggregate and MTA coated culture dishes. No cell inhibition zone was observed in Bioaggregate group. There was no statistical difference of viable cells between bioaggreagte and MTA groups. Conclusions: Bioaggregate appeared to be biocompatible compared with white MTA on human pulp and PDL cells.
Park, Hong-Gyu;Bak, Eun-Jung;Kim, Ji-Hye;Lee, Yang-Sin;Choi, Seong-Ho;Cha, Jeong-Heon;Yoo, Yun-Jung
Journal of Periodontal and Implant Science
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v.41
no.3
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pp.149-156
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2011
Purpose: Globular adiponectin (gAd) is a type of adipocytokine, which is mainly produced by adipose tissue. It has been reported that gAd acts as a pro- as well as an anti-inflammatory factor. Interleukin (IL)-6 and IL-8 are pro-inflammatory cytokines. To investigate the role of gAd on periodontal tissues, the expression of adiponectin receptor 1 (AdipoR1) and the effect of gAd on the expression of IL-6 and IL-8 were investigated in periodontal ligament (PDL) and gingival fibroblasts. Methods: PDL and gingival fibroblasts were cultured from human periodontal tissues. gAd derived from Escherichia coli and murine myeloma cells were used. The expression of AdipoR1 was estimated by reverse transcription-polymerase chain reaction and western blot The expression of cytokines was measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results: PDL and gingival fibroblasts expressed both mRNA and protein of AdipoR1. gAd derived from E. coli increased the production of IL-6 and IL-8, but polymyxin B, an inhibitor of lipopolysaccharide (LPS), inhibited IL-6 and IL-8 production induced by gAd in both types of cells. gAd derived from murine myeloma cells did not induce IL-6 and IL-8 production in those cells. gAd derived from E. coli contained higher levels of LPS than gAd derived from murine myeloma cells. LPS increased production of IL-6 and IL-8 in PDL and gingival fibroblasts, but pretreatment of cells with gAd derived from murine myeloma cells did not inhibit LPS-induced IL-6 and IL-8 expression. Conclusions: Our results suggest that PDL and gingival fibroblasts express AdipoR1 and that gAd does not act as a modulator of IL-6 and IL-8 expression in PDL and gingival fibroblasts.
Nicotine is one of the major components of cigarette smoking which causes various systemic and local diseases to human body. Mitogenic effects of nicotine to systemic disease are interesting factors in the results of cellular Proliferation especially to vascular and pulmonary tissue or cells. The study of local effects concerns with destruction of tissue and delayed healing rate after various surgical treatment. Platelet-Derived Growth factor(PDGF) and Insulin-like growth factor(IGF) are blown as major mitogens to human PDL cells. The purpose of this study was to investgate the mitogenic effects of nicotine to human PDL cells. We studied the expression of PDGF-$\alpha$ receptor, PDGF-$\beta$receptor, and IGF-l receptor mRNA from the nicotine treated human PDL cells by northern analysis. The experimental groups were divided into different serum($1\%,\;10\%$) and nicotine (100ng/m1,1000ng/m1) concentrations and each group was studied by time course. The results of this study showed upregulation of PDGF-${\alpha},\;{\beta}$ receptor and IGF-l receptor mRNA at 100ng/ml nicotine concentration and $10\%$ serum group to the time course. These results suggest that physiologically attainable nicotine concentrations may stimulate the mitogenic gene synthesis to human PDL cells in vitro.
Transglutaminase2 (TGM2) is a multi-functional calcium dependent enzyme that affects angiogenesis, apoptosis, differentiation, attachment, and changes in the extracellular matrix. However, its function in periodontal tissue has not yet been studied. The aim of this study was to investigate the association of the TGM2 expression and the modulation of inflammatory mediators in inflamed periodontal ligament (PDL) cells induced by pro-inflammatory cytokines such as Interleukin-$1{\beta}$ and the Tumor necrosis $factor-{\alpha}$. The expression of TGM2 was increased in the inflamed periodontal tissue and PDL cells. Over-expressed TGM2 in the PDL cells increased expression of MMP1, MMP3, IL-6, CXCL8, and PTGS2. Conversely, inhibition of TGM2 activity using LDN27219, a TGM2 inhibitor, resulted in decreased expression of MMP1, MMP3, IL-6, and CXCL8. The mRNA expression was confirmed by RT-PCR and quantified by qRT-PCR. Protein levels were also confirmed by immunofluoroscence staining. These results suggest that TGM2 plays an important role in the regulation of inflammatory mediators which exacerbate tissue damage in inflamed periodontal tissue.
Purpose: Periodontal ligament (PDL) cell differentiation into osteoblasts is important in bone formation. Bone formation is a complex biological process and involves several tightly regulated gene expression patterns of bone-related proteins. The expression patterns of bone related proteins are regulated in a temporal manner both in vivo and in vitro. The aim of this study was to observe the gene expression profile in PDL cell proliferation, differentiation, and mineralization in vitro. Methods: PDL cells were grown until confluence, which were then designated as day 0, and nodule formation was induced by the addition of 50 ${\mu}g$/mL ascorbic acid, 10 mM ${\beta}$-glycerophosphate, and 100 nM dexamethasone to the medium. The dishes were stained with Alizarin Red S on days 1, 7, 14, and 21. Real-time polymerase chain reaction was performed for the detection of various genes on days 0, 1, 7, 14, and 21. Results: On day 0 with a confluent monolayer, in the active proliferative stage, c-myc gene expression was observed at its maximal level. On day 7 with a multilayer, alkaline phosphatase, bone morphogenetic protein (BMP)-2, and BMP-4 gene expression had increased and this was followed by maximal expression of osteocalcin on day 14 with the initiation of nodule mineralization. In relationship to apoptosis, c-fos gene expression peaked on day 21 and was characterized by the post-mineralization stage. Here, various genes were regulated in a temporal manner during PDL fibroblast proliferation, extracellular matrix maturation, and mineralization. The gene expression pattern was similar. Conclusions: We can speculate that the gene expression pattern occurs during PDL cell proliferation, differentiation, and mineralization. On the basis of these results, it might be possible to understand the various factors that influence PDL cell proliferation, extracellular matrix maturation, and mineralization with regard to gene expression patterns.
[$TGF-{\beta}$] is a polypeptide with multiple physiological functions in regulation of cell-to-cell interaction and in growth and development. The active form of vitmain $D_3$, 1,25-dihydroxycholecalciferol $[1,25-(OH)_2D_3]$, is one of the most potent stimulators of osteoclastic acitivity. The purpose of this study was to evaluate the effect of Vitamin $D_3$ and/or $TGF-{\beta}$ on the periodontal ligament(PDL) cells. Human PDL cells were prepared from the first premolars extracted for the orthodontic treatment and were incubated in the environment of , $37^{\circ},\;5\%\;CO_2\;and\;95\%$ humidity. 10, 50 or 100ng/m1 of $1,25-(OH)_2D_3$ and 0.1, 1, 5 or 10ng/ml of $TGF-{\beta}$ were administered to the culture wells, separately or in combination. And the viability of PDL cells was evaluated by MTT assay The obtained results were as follows. 1. The viability of PDL cells in 10ng/ml of vitamin $D_3$ was not significantly differenent from that of the control group at 1, 2 and 3-day of cultivation, but it was significantly increased in 50ng/ml of Vitamin $D_3$ at 3-day and in 100ng/m1 of Vitamin $D_3$ at 2 and 3-day. 2. The viability of PDL cells in 0.1ng/ml of $TGF-{\beta}$ was not significantly differenent from that of the control group at 1, 2 and 3-day of cultivation, but it was significantly increased in 1 and 5ng/ml of $TGF-{\beta}$ at 3-day of cultivation, and in 10ng/ml of $TGF-{\beta}$ at 2 and 3-day of cultivation. 3. In case of admixture of 1ng/ml of $TGF-{\beta}$ and the various concentrations of vitamin $D_3$, the viability of PDL cells was significantly increased in the admixture of 100ng/ml of vitamin $D_3$ at 3-day of cultivation 4. In case of admixture of 5ng/ml of $TGF-{\beta}$ and the various concentrations of vitamin $D_3$, the viability of PDL cells began to be increased from 2-day of cultivation in the admixture of 10 50 and 100ng/ml of vitamin $D_3$, but it was not maintained at 3-day in the admixture of 10ng/m of vitamin $D_3$. 5. In case of admixture of 10ng/ml of $TGF-{\beta}$ and the various concentrations of vitamin $D_3$ the viability of PDL cells was significantly increased in the admixture of 50ng/ml of vitamin $D_3$ at 2 and 3-day of cultivation, and in the admixture of 100ng/ml at 1, 2 and 3-day.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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