• 한국가축번식학회지
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• 제18권3호
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• pp.199-206
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• 1994

본 연구는 생쥐 배 발생과정의 상이한 발현을 RT-PCR법에 의해 무작위 증폭함으로서 새로운 유전자를 손쉽게 크로닝하기 위해 수행되었다. mRNA의 상이한 display법은 Ling 과 Pardee (Science 257, 1992)에 의해 개발되었으며, 최근 Zimermann과 Schultz (PNAS USA 91, 1994)에 의해 재증명되었다. 이 방법은 특정 유전자의 일시적 발현의 변화가 maternal 제어로부터 접합체 제어로의 이행에 따른 발현전이, 다정자 침입과 단일 정자 침입에 의한 배발생의 기능적 차이, 성공적으로 부화한 배반포기 배와 부화에 실패한 배반포기 배에서의 발현의 차이는 물론 세포주기에 따른 유전자 발현 양식의 변화에 따른 새로운 유전자의 크로닝을 가능케 한다. 이 방법에 의해, 2세포기 특이 발현 유전자를 크로닝 하였으며, 이 유전자는 EcoRI제한 효소 처리후 Southern blot을 행한 결과 약 15kb genomic size를 가진 것으로 나타났다. 이 새로운 유전자는 간장 특이적 발현을 나타내었다. 또한, 적어도 2개의 mRNA가 존재하였으며, 이는 RNA splicing에 의한 것으로 추정되었다. (PCR, RT-PCR, cloning, preimplantation, mouse)

• 한국어병학회지
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• 제23권2호
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• pp.145-153
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• 2010

내용은 2009년 하반기, 우리나라 남해안(고흥, 나로도)과 서해안(선재도, 파도리)의 네 지점에서 시료채취 한 바지락에서의 Perkinsus olseni 감염에 대한 모니터링 결과로, 이전에 국제수역사무국(OIE)의 manual에서 지정하던 P. olseni에 대하여 특이적인 primer set으로 사용한 PCR 분석 결과와 2009년에 새로이 지정하는 P. olseni에 대하여 특이적인 primer set을 사용한 분석 결과를 비교하고, 결과를 통한 P. olseni의 검출율을 조사하였다. 특히 2009년에 새로이 지정된 PolsITS-140F와 PolsITS-600R의 primer set을 사용한 결과는 신속한 검출여부 분석에 적합한 것으로 생각되었다. P. olseni의 검출경향은 파도리에서 가장 낮았으며, 고흥에서 가장 높았다. 파도리의 7월, 8월 그리고 12월의 결과를 제외하고는 전 지점에서 7월에서 12월까지 지속적으로 높은 검출율을 나타내었다. PolsITS-140F와 PolsITS-600R의 primer set을 이용한 PCR 산물의 염기서열을 분석한 결과, 선재도의 결과에서 두 군데의 염기차이를 나타내는 것 이외에는 모두 같은 것으로 확인되었다.

• 대한바이러스학회지
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• 제27권1호
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• pp.19-27
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• 1997

본 연구에서는 영장류에서 감염성 면역결핍 증상을 일으키는 type D simian retrovirus (SRV)를 검출하기 위해 SRV env 유전자의 특정 지역을 선정하여 증폭, 검색하는 중합효소 연쇄반응 (PCR)법을 개발하였다. 증폭반응의 대상부위인 SRV env 유전자의 3' 후반부는 서로 다른 3 종류의 SRV subtype 1, 2, 그리고 subtype 3에 걸쳐 높은 보존율을 보이고 있다. 반응 결과, 1차 PCR 만으로 3 종류의 SRV subtypes를 동시에 검출, 증폭하였으며 SRV와 더불어 영장류에서 감염성 면역결핍을 유도하는 주요 바이러스 simian immunodeficiency virus 또는 simian T-Iymphotropic virus type 1에 감염된 영장류의 peripheral blood mononuclear cells (PBMCs)을 비교, 완전한 증폭 특이성이 확인되었고 교차반응으로 인한 위양성반응은 발견되지 않았다. 한편, 위 증폭반응의 검출 민감도 측정을 위해 준정량적 적정 PCR을 수행하였으며 SRV 게놈과 증폭 대상 부위의 분자량을 기준으로 한 본 PCR법의 검출 한계는 단 한번의 증폭과 간단한 ethidium bromide 염색만으로 적어도 $5-7{\times}10^4$ 개의 PBMCs 중 한 개의 감염세포를 검출할 수 있는 것으로 확인되었다. 본 연구에서 확인된 신속성과 반응 특이성, 그리고 높은 민감도의 본 PCR 법은 현재 유일한 AIDS 연구모델인 영장류의 SIV 감염 연구 전후에 반드시 필요한 효과적인 SRV 감염검색에서 ELISA법의 위양성에 의한 약점을 보완하고 보다 높은 검출 민감도를 확보함으로써 연구모델 실험의 오류를 최소화하는 데 중요한 역할을 하게 될 것이다.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제16권6호
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• pp.965-970
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• 2009

유통중인 계란의병원성균 오염상태를 시판되는 multiplex polymerase chain reaction (mPCR) kit로 검사한 결과, 총 90개의 검사시료 가운데 한 가지 이상의 미생물이 검출된 계란시료는 30개로, 검사시료의 미생물 오염도는 약 33.3% 수준이었다. 미생물별 검출 빈도는 B. cereus가 17개 시료(18.9%)에서 검출되어 가장 높은 빈도를 보였으며 Y. enterocolitica는 16개(17.8%), L. monocytogenes 15개(16.7%), St. aureus 12개(13.3%), E. coli O157:H7 4개(4.4%)의 검출빈도를 보였다. 한편, 선택배지를 이용한 viable cell count 방법에서는 27개의 시료에서 미생물이 검출되어 검사시료의 미생물 오염도는 약 30.0% 수준이였으며, 미생물별 검출 빈도는 B. cereus가 17개 시료(18.9%)에서 14개(15.6%) 시료로, Y. enterocolitica는 16개(17.8%)에서 12개(13.3%)로, L. monocytogenes는 15개(16.7%)에서 13개(14.4%)로, St. aureus는 12개(13.3%)에서 10개(11.1%)로 감소하였으며, E. coli O157:H7은 두 가지 검출방법간의 차이가 나타나지 않았다. 검출 대상 미생물 9종 가운데 Campylobacter jejuni, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella spp., 및 Shigella spp.는 두 방법 모두에서 검출되지 않았다. 이상의 결과에서 살펴본 바와 같이 PCR을 이용한 병원성 미생물의 검출 방법은 viable cell count 방법보다 감도가 높음을 알 수 있었다.

• 식물병연구
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• 제14권3호
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• pp.233-237
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• 2008

국내에서 최근 발견된 Tomato yellow leaf curl virus(TYLCV)가 토마토에 발생하여 큰 피해가 발생하였다. TYLCV의 피해 발생 예방을 위하여 농업현장의 연구지도연구기관에서 쉽고 간편하게 사용할 수 있는 조기 정밀 유전자 진단기술 개발은 매우 중요하다. TYLCV에 대해 특이적 프라이머를 제작하고 특별한 핵산분리 기술이나 도구가 필요 없는 빠르고 정확하며 경제적인 VC/PCR 진단법을 이용한 유전자 진단법을 개발하였다. TYLCV 진단용 프라이머를 22개 제작하여 감염주 및 건전 토마토의 전체 핵산을 이용해 특이성 검정으로 PCR용으로 9점을 선발하였고, VC/PCR 진단법 용으로 9종을 선발하였다. 이러한 두 가지 진단법에 모두 특이적인 프라이머를 6종을 선발한 후 TLCV로 알려진 다른 Geminivirus와의 특이성 검정결과로 총 4종이 최종 선발하였다. 이들 중 Deng(540,541) 프라이머는 Ceminivirus를 진단할 수 있는 degenerate 프라이머로 VC/PCR진단법이 개발 되었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제20권1호
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• pp.7-11
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• 2007

The study was conducted on 162 adult male Haemonchus contortus of sheep collected from Avikanagar, Jaipur and Bikaner regions to diagnose the benzimidazole (BZ) resistance in H. contortus. The BZ resistance is primarily linked with the mutation in ${\beta}$-tubulin isotype 1 gene which substitute phenylalanine (Phe) into tyrosine (Tyr) at the 200 codon of the gene. An allele specific polymerase chain reaction (AS-PCR) technique was used for diagnosis of BZ resistance in H. contortus. In AS-PCR, one reverse primer (TGG 312) was used in two separate reactions with each of 2 forward primers (resistant TGG 331 and susceptible CAW 106 primer) that differed only at 3' nucleotide position. Therefore, the amplified products from resistant and susceptible parasites were produced 267 and 266 bp, respectively. A total of 162 parasites were genotyped, of which 130 parasites found homozygous resistant 'rr', 22 heterozygous 'rS' and 10 homozygous susceptible 'SS' type. The prevalence of 'rr' individuals was higher in Jaipur (98%) followed by Avikanagar (93%) and Bikaner (50%) regions. Overall, the prevalence of BZ resistant allele (r) was higher (87%) as compared to 13% of BZ susceptible allele (S).

• 한국식물병리학회:학술대회논문집
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• 한국식물병리학회 2003년도 정기총회 및 추계학술발표회
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• pp.74.1-74
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• 2003

Differential display (DD) of mRNA is a technique in which mRNA species expressed by a cell population are reverse transcribed and then amplified by many separate polymerase chain reactions (PCR). Using DD-RT-PCR we obtained many genes that expressed differentially in healthy and PVX-infected Nicotiana benthamima, using total RNAs extracted from healthy and PVX-infected N. benthamiana plants. Three hundred and twenty-five DNA fragments isolated from DD-RT-PCR were cloned and sequenced for further characterization. Several host genes including SKPI-like protein, heat shock transcription factor and Avr9/Cf-9 rapidly elicited protein were selected to obtain full-length open reading frame and to characterize their potential involvement in virus disease development and/or host's defense against virus infection employing PVX-based expression vector. Transcrips from wild-type and clones containing each selected gene were inoculated onto N. benthamiana Levels of virus replication were confirmedby RT-PCR and RNA blot analysis, Expression profiles and potential role(s) of selected genes upon PVX infection will be discussed.

• 대한수의학회지
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• 제52권1호
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• pp.39-43
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• 2012

A multiplex PCR was developed for the simultaneous detection and differentiation of Mycoplasma (M.) hyopneumoniae and M. hyorhinis in clinical samples. Improved sensitivity is advantage of this technique over the previously reported multiplex assay. It was capable of detecting as little as 125 fg genomic DNA from M. hyopneumoniae and 62.5 fg genomic DNA from M. hyorhinis. Application of this multiplex PCR method to field isolates showed that M. hyopneumoniae and M. hyorhinis were present in 29% (107 of 370) of lung specimens and no mycoplasmas were detected in 56% (208 of 370) of the slaughtered pigs' lungs. At the farm level, M. hyopneumoniae and M. hyorhinis were detected in 34 of 36 (94.4%) randomly selected farms. We conclude that this assay would prove itself a value tool for monitoring these mycoplasmal infections and both M. hyopneumoniae and M. hyorhinis have been widely spread in swine herds of Korea.

• Molecular & Cellular Toxicology
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• 제3권3호
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• pp.185-189
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• 2007

Gene expression levels of choriogenin, vitellogenin and estrogen receptor were determined using Reverse transcription (RT)-PCR technique after exposure to estrogenic chemical bisphenol A in the Korean wild medaka (Oryzias sinensis). These genes have been known to be induced in male test fish when the fish are exposed to estrogenic chemicals. Therefore they can be suggested as a possible biomarker of endocrine disruption in fish, however, relatively little has been known about these genes expression by estrogenic chemicals in Korean wild fish. Mature male Oryzias sinensis were treated with bisphenol A at nominal concentrations of 0.02, 0.2 and 2 mg/L for 6 days and total RNA was extracted from the livers of treated fish for RT-PCR. When the five biomarker genes were amplified by RT-PCR in the same condition, mRNA induction level of each gene was elevated with different sensitivities. Conclusively, the results of this work indicated that measurement of vitellogenin and choriogenin using RT-PCR is effective as a simple tool for the screening of estrogenic chemicals and suggested that O. sinensis would be a suitable model fish for the environmental risk assessment of potential endocrine disruptors.

• BMB Reports
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• 제36권4호
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• pp.349-353
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• 2003

To explore the application of DNA chip technology for the detection and typing of Human Papillomavirus (HPV), the HPV6, 11, 16 and 18 gene fragments were isolated and printed onto aminosilane-coated glass slides by a PixSys 5500 microarrayer as probes to prepare the HPV gene chips. HPV samples, after being labeled with fluorescent dye by restriction display PCR (RD-PCR) technology, were hybridized with the microarray, which was followed by scanning and analysis. The experimental condition for preparing the HPV gene chips was investigated, and the possibility of HPV genotyping using gene chips was discussed. The technique that was established in this study for preparing HPV gene chips is practical. The results of the present study demonstrated the versatility and inspiring prospect of using this technology to detect and genotype HPV.