• 제목/요약/키워드: PCR detection kit

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야채스프의 RAW 264.7 세포에서 항염증 효과 (Anti-Inflammatory Effects of Vegetable Soup in Murine Macrophage RAW 264.7 Cells)

  • 심재근;이재혁;신태용;신혜영;정숙희;김미혜;구호준;박정숙
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제39권8호
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    • pp.1097-1101
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    • 2010
  • 본 연구의 목적은 일상생활에서 쉽게 섭취할 수 있는 당근, 무, 무청, 우엉, 표고버섯을 재료로 한 야채 스프의 항염증성을 검토하기 위한 것으로, RAW264.7 세포에서 LPS에 의해 유도되는 염증물질 중 NO와 염증성 사이토카인 TNF-$\alpha$에 대한 억제력을 관찰하였다. 실험결과 실험에 사용된 야채스프는 세포독성을 나타내지 않았다. 세포독성이 없음을 확인 한 후 LPS로 처리한 RAW264.7 세포에서 야채스프의 NO 생성억제를 평가한 결과 RAW264.7 세포만 배양한 대조군에서 NO의 농도는 매우 낮게 측정되었으며, LPS를 처리한군에서 NO의 농도는 현저히 증가되었다. 또한 야채스프를 처리한 실험군은 NO 생성이 유의성 있게 억제되었으며, RAW264.7 세포를 LPS로 처리 시 iNOS가 발현되어 NO를 생성하게 되므로 iNOS의 발현에 미치는 영향을 평가하였다. LPS 처리 시 iNOS 유전자 발현이 유의하게 증가되었으나, 야채스프를 전 처리한 실험군에서 iNOS의 양이 감소하였다. 야채스프에 의한 iNOS의 발현억제는 NO 생성억제를 유도를 의미한다. Proinflammatory cytokines인 TNF-$\alpha$ 분비 억제를 살펴본 결과 LPS를 처리한 군에서 TNF-$\alpha$의 분비가 현저하게 증가되었으나 야채스프를 처리한 군에서는 유의한 억제를 나타냈다. 이상과 같이 야채스프는 RAW264.7 세포에서 LPS에 의해 유도되는 NO의 생성억제, iNOS의 발현을 억제시켰으며, proinflammatory cytokines인 TNF-$\alpha$의 분비량도 억제시켰다. 이는 야채수프의 항염증성을 입증하기 위한 기초자료로 활용이 가능하다고 사료된다.

Treatment of Atopic Dermatitis Associated with Malassezia sympodialis by Green Tea Extracts Bath Therapy: A Pilot Study

  • Kim, Hyun-Kyu;Chang, Hui-Kyoung;Baek, Seok-Yun;Chung, Jin-Oh;Rha, Chan-Su;Kim, So-Young;Kim, Beom-Joon;Kim, Myeung-Nam
    • Mycobiology
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    • 제40권2호
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    • pp.124-128
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    • 2012
  • Multiple treatment modalities, including topical and systemic corticosteroid and phototherapy, have been used in treatment of patients with atopic dermatitis. However, long-term corticosteroid therapy may have various adverse effects. The purpose of this study was to investigate the therapeutic efficacy and safety of bath therapy using green tea extracts for treatment of patients with atopic dermatitis. A total of four patients with atopic dermatitis were enrolled in this study. A Malassezia multiplex detection kit was used in performance of multiplex PCR on clinical isolates, which confirmed Malassezia sympodialis. Subjects underwent treatment with bath therapy using green tea extracts three times per wk for a period of 4 wk. Assessment using the scoring atopic dermatitis (SCORAD) index, the visual analogue scale for pruritus, and transepidermal water loss was performed weekly. Laboratory tests were performed before and after treatment. All patients showed marked improvement on the mean SCORAD and visual analogue scale, and a significant decrease in the mean values of serum eosinophil counts was observed after treatment. Bath therapy with green tea extract is an effective, safe, and nonsteroidal therapy for treatment of patients with atopic dermatitis associated with Malassezia sympodialis.

인진(茵蔯)의 에탄올 추출물이 담도암 세포주 SNU-1196의 apoptosis에 미치는 효과에 관한 연구 (Study on the Pro-apoptotic Effect of Artemisiae Capillaris Herba Extracted with Ethanol on Biliary Tract Cancer Cell Line, SNU-1196)

  • 이경욱;우홍정
    • 대한한방내과학회지
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    • 제33권4호
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    • pp.587-598
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    • 2012
  • Objectives : This study was performed to elucidate the pro-apoptotic effect of Artemisiae capillaris herba extracted with ethanol on biliary tract cancer cells. Materials and Methods : The biliary tract cancer cell line SNU-1196 was used in this study. Cells were treated with different concentrations of Artemisiae capillaris herba for 24, 48 and 72 hours. After the treatment, cell viability, apoptosis, caspase activities and the mRNA expressions of the Bcl-2, Bax, P53, and P21 were measured by using MTT assay, cell cycle analysis, apoptosis assay, and RT-PCR. The cell cycle analysis was done by flow cytometry and apoptosis assay by cell death detection ELISA kit. Results : Artemisiae capillaris herba inhibited proliferation of SNU-1196 in long-time culture group with dose-dependent manner. All cells treated with Artemisiae capillaris herba showed increased apoptosis with dose- and time-dependent manner. Exposure of SNU-1196 to Artemisiae capillaris herba induced caspase-3 activation. However, apeoptosis was blocked when SNU-1196 was treated together with the pan-caspase inhibitor Z-VAD-FMK and the caspase-3 inhibitor Z-DEVE-FMK. After the treatment of Artemisiae capillaris herba, the mRNA expressions of caspase -3, -8, -9, p53, and p21 was increased in all cells. Artemisiae capillaris herba resulted in a significant decrease in Bcl-2 and an increase in Bax mRNA levels. Conclusions : These results suggest that Artemisiae capillaris herba would be beneficial in the treatment of biliary tract cancer.

복분자의 유방암 세포 사멸 및 사멸 유전자 발현 유도 효과 (Inducing Effects of Rubus coreanus on Cell Death and Apoptotic Gene Expressions in Human Breast Cancer Cells)

  • 김희정;강금지
    • 동아시아식생활학회지
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    • 제23권6호
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    • pp.723-732
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    • 2013
  • We investigated the inducing effects of Rubus coreanus extract (RCE) on apoptosis and its related gene expressions in human breast cancer cells. MDA-MB-231 cells were cultured in the presence of 0, 200, 300, and $400{\mu}g/mL$ RCE for 24h. MTT assay demonstrated that relative cell viability measured a decrease in a dose-dependent manner (p<0.05). This dependency was also found in the increasing levels of cell death by a dual staining with Hoechst 33322 and propidium iodide (p<0.05). These close associations was also observed by different stages of apoptotic processes, as shown by an Apoptosis Detection Kit. To determine whether the alterations in such cell activities obtained above cause the induction of apoptotic genes, PT-PCR was performed expressions of both Bcl-2 and Bax mRNAs. The Bcl-2/Bax ratio which is an important indicator of apoptosis, was found to have significantly decreased dose dependence (p<0.05). Western blot analysis also demonstrated that Caspase-3 significantly increases in a dose-dependent manner (p<0.05) in addition to similar alterations of other proteins examined. Taken these results together, the ethanolic RCE used induces a reduction in cell viability along with increased membrane permeability. This leads to a precautious apoptotic process and, subsequently, cell death through the apoptotic pathway involving Bax and Caspase-3 in human breast cancer MDA-MB-231 cells.

The Immunomodulatory Activity of Mori folium, the Leaf of Morus alba L., in RAW 264.7 Macrophages in Vitro

  • Kwon, Da Hye;Cheon, Ji Min;Choi, Eun-Ok;Jeong, Jin Woo;Lee, Ki Won;Kim, Ki Young;Kim, Sung Goo;Kim, Suhkmann;Hong, Su Hyun;Park, Cheol;Hwang, Hye-Jin;Choi, Yung Hyun
    • Journal of Cancer Prevention
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    • 제21권3호
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    • pp.144-151
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    • 2016
  • Background: Immunoregulatory elements have emerged as useful immunotherapeutic agents against cancer. In traditional medicine, Mori folium, the leaf of Morus alba L. (Moraceae), has been used for various medicinal purposes; however, the immunomodulatory effects have not been fully identified. We evaluated the immunoenhancing potential of water extract of Mori folium (WEMF) in murine RAW264.7 macrophages. Methods: RAW264.7 cells were treated with WEMF for 24 hours and cell viability was detected by an MTT method. Nitric oxide (NO) levels in the culture supernatants were assayed using Griess reagent. The productions of prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) and immune-related cytokines was measured using ELISA detection kits. The mRNA and protein expression levels of Inducible NO synthase, COX-2, and cytokines were assayed by reverse transcription-PCR and Western blotting, respectively. The effect of WEMF on phagocytic activity was measured using a Phagocytosis Assay Kit. Results: WEMF significantly stimulated the production of NO and $PGE_2$ as immune response parameters at noncytotoxic concentrations, which was associated with the increased expression of inducible NO synthase and COX-2. The release and expression of cytokines, such as $TNF-{\alpha}$, interleukin $(IL)-1{\beta}$, IL-6, and IL-10, were also significantly increased in response to treatment with WEMF. Moreover, WEMF promoted the macrophagic differentiation of RAW264.7 cells and the resulting phagocytosis activity. Conclusions: WEMF has the potential to modulate the immune function by regulating immunological parameters. Further studies are needed to identify the active compounds and to support the use of WEMF as an immune stimulant.

2014년 경기지역 유전자변형 옥수수 모니터링 및 발견현황 (Detection and environmental unintentional release monitoring of living modified maize (Zea mays L.) in Gyeonggi-do of South Korea in 2014)

  • 신수영;문정찬;최원균;김일룡;조범호;이중로
    • Journal of Plant Biotechnology
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    • 제45권1호
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    • pp.77-82
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    • 2018
  • 국내에서 LM 작물의 재배는 승인 된 바 없으나 식품용 및 사료용으로 LM 작물이 수입되고 있으며 LM 작물의 국내 수입량은 꾸준히 증가하고 있는 추세이다. 본 연구는 2014년 경기 지역의 LM 옥수수 유출여부를 모니터링 하기 위해 수행되었으며 채집된 의심시료는 단백질 검정 분석법과 중합효소 연쇄반응을 통해 분석하였다. 경기 지역의 항만, 운송로, 사료공장 및 축산농가 등 총 169개 지점을 조사하였고 총 44개의 LM 옥수수 의심시료를 채집하였다. 단백질 검정 분석법으로 4개의 양성반응 시료를 확인하였고 동일지점의 시료는 혼합하여 총 3개의 시료에 대해 프로모터 스크리닝과 이벤트 특이적 프라이머를 이용한 중합효소 연쇄반응을 실시하여 의심시료 모두 LM 옥수수로 확인하였다. 본 연구의 결과는 국내 자연환경에서 LM 옥수수의 유출 현황 파악과 자연 생태계로 LM 옥수수의 유출을 예방하기 위해 자연생태계 모니터링이 매우 중요하다는 것을 뒷받침한다.

낙농산업에 필요한 미생물 검사방법과 전망: 총설 (Perspective on Rapid and Selective Method for Detecting Microbiology in Dairy Industry: A Review)

  • 천정환;김현숙;김홍석;김동현;송광영;임진혁;최다솜;임종수;정동관;김수기;서건호
    • Journal of Dairy Science and Biotechnology
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    • 제33권2호
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    • pp.119-127
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    • 2015
  • 낙농 미생물학에서 사용하는 주요 분석 방법들에 대한 지속적인 개정이 요구되어지고 있는 것이 사실이다. 현재 이용 가능한 자료들을 바탕으로 균주의 생리 및 대사 특성을 더 깊이 이해할 수 있으며, LAB와 probiotic 생리적 상태를 측정할 수 있는 기술을 개발할 수 있다. 예를 들어, 고유 균주의 생화학 반응으로부터 얻은 생물학적 생리학적 지식을 바탕으로 발색형광배지(chromogenic media)의 개발이 가능하다. 이 기술은 오랫동안 사용되어온 한천 배지보다 사용법이 간단하며, 미생물을 제어할 수 있다. 유망한 유동세포계수법(flow cytometry, FC) 기술은 우유, 요구르트, 그 외 발효 유제품의 혼합 배양의 분석에 뛰어나다. 이 기술은 공정 과정 중에 또는 생산품의 유통 기한 관리에 사용될 수 있지만, 이 기술을 사용하기 위해서는 우유 단백질에 의해서 생성되는 인공 산물을 방지하기 위해 최적화 되어야 한다. 또한 유동세포계수법(flow cytometry, FC)은 정량 한계가 높기 때문에, 현재 사용하고 있는 탐침(probe)은 종 또는 속이 아닌 표적 세포 구성을 분석한다. 따라서 유동세포계수법(flow cytometry, FC)은 특정 물질의 계수보다는 생리적 상태를 측정에 더 적합한 기술이라고 볼 수 있다. Omics 자료를 통해 생리적 상태를 더 신속하게 측정할 수 있는 핵심적인 생체지표 확인이 가능해졌다. PCR은 이미 식품매개 병원균 및 부패균의 검출에 일상적으로 사용되고 있다. 이 기술은 더욱 나아가 발효균 및 probiotic 박테리아 검출에도 사용되어 핵산 추출, PCR 과정, 자료 해석을 표준화 시킬 수 있으며, 또한 다른 기술에 비해 PCR은 표적 발효 균주를 더 신속하게 선택하며, 공정 과정을 최적상태로 유지시킬 수 있을 것이다. LAB와 probiotic의 적응성 및 생리적 상태의 연구에 필요한 기준, 특허품, 상업화된 신속분석장치(kit)는 아직까지 개발되지 않았다. 본 총설 논문에서는 여러 가지 기술을 검토함으로써 이 모든 기술에는 2가지 주요한 요인이 있다. 첫 번째는 낙농업 산업의 특정 요구에 따른 방법의 평가이며, 두 번째는 공식적인 기준에 따른 검증이다. 사실상 식품매개 병원균의 특성 분석에 사용될 수 있는 표준법이 개발되고 검증되었지만, LAB, probiotic 등의 박테리아 분석에 있어서 표준화된 방법과 진단산업과의 연관성이 부족한 것이 사실이다. 낙농 업계에 의해서 수행되어진 품질관리의 양을 고려해 볼 때 이것은 매우 중요하게 인식되어야 할 부분이다.

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Rifampin 내성 결핵의 진단에서 INNO-LiPA 검사법의 임상적 의미 (Clinical Meaning of INNO-LiPA Test in the Diagnosis of Rifampin Resistant Tuberculosis)

  • 장윤수;김영;이창률;최종락;김형중;안철민;김성규
    • Tuberculosis and Respiratory Diseases
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    • 제55권4호
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    • pp.344-352
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    • 2003
  • 연구배경 : Isoniazid와 rifampin에 내성인 다제내성 결핵의 유병률은 1995년 세계적으로 5.3%이며 이의 지속적인 증가는 공중보건의 중요한 문제로 대두 되고 있다. 결핵 치료의 중요한 약물의 하나인 RFP에 대한 내성은 불량한 예후를 초래한다. 이에 RFP내성을 조기에 정확하게 진단하는 임상적으로 중요하다. 최근 PCR 방법을 이용하여 약제 (RFP) 내성을 초래하는 변이를 신속하게 진단하는 방법이 가능하게 되었다. 본 연구는 결핵 초치료군, 치료 실패군 및 재발군에서 INNO-LiPA 검사법을 이용하여 RFP내성 유병률을 확인하고 기존의 약제 감수성 검사법을 이용하여 얻은 결과를 비교하여 INNO-LiPA검사의 유용성을 연구하였다. 방 법 : 1998년부터 2002년까지 본원에 내원하여 객담 도말 검사상 양성 소견으로 폐결핵으로 진단받은 46명을 대상으로 하였으며 환자는 초치료, 초치료 실패, 및 재발 환자군으로 분류하였다. RPF 내성은 INNO-LiPA Rif.TB kit을 이용하여 검사하였으며 이를 결핵균 배양을 이용한 약제 감수성 결과와 비교 분석하였다. 결 과 : 46명의 환자중에 21명이 결핵으로 처음 진단받은 환자였으며 17명이 초치료 실패한 환자이었으며 8명이 재발한 환자이었다. 배양 검사를 이용한 약제 감수성 검사법을 기준으로 하여 비교시 INNO-LiPA 검사법을 이용한 RFP 저항성의 양성 예측률은 85.7% 이었으여 음성 예측률은 76.0% 이었다. INNO-LiPA 검사 결과 초치료 실패한 및 재발한 환자 25명의 환자중 20예 (80.0%)에서 rpoB gene의 변이를 보였으며 처음 결핵으로 진단받은 21명의 환자중 4예 (19.0%)에서 rpoB gene의 변이를 보였다. 결 론 : INNO-LiPA 검사는 비교적 신속하고 정확하게 RFP 약제 내성 정보를 제공하여 2차 항결핵 약제의 선택에 도움을 준다. 아울러 기존의 배양 검사를 이용한 약제 감수성 검사법과 함께 상호 보완적으로 사용하면 다제 내성결핵의 치료에 있어 그 유용성은 매우 클 것으로 사료된다.

LG AdvansureTM Malaria P.f./P.v. real-time QPCR의 말라리아 진단 유용성 (Evaluation of the LG AdvansureTM Malaria P.f./P.v. real-time QPCR for the Diagnosis of Malaria)

  • 이혜진;김하늬;유병준;김장수;김명한;임채승;이갑노
    • Laboratory Medicine Online
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    • 제1권2호
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    • pp.100-104
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    • 2011
  • 배경: 말라리아는 국내에서 여전히 유행하고 있는 감염질환이다. 현재까지 말라리아의 진단에는 혈액도말검사의 검경법이 표준방법으로 되어 있으나 혈중 원충 농도가 낮을 경우에 예민도가 떨어지고 판독하기까지 많은 시간이 소요된다. 본 연구자들은 최근 개발된 LG AdvansureTM Malaria P.f./P.v. real-time QPCR (LG 생명과학)의 수행능력을 평가하고자 한다. 방법: 고려대학교 안산병원에 내원한 173명의 검체를 사용하였다. 고전적인 검경법으로 말라리아로 진단받았던 73명의 환자와 100명의 건강인을 대상으로 하여 LG AdvansureTM Malaria P.f./P.v. real-time QPCR를 시행하였고 그 결과를 비교하였다. 또한 말라리아 양성 혈액을 정상 혈액으로 10배로 배수 희석하여 검출 한계를 설정하였다. 결과: 총 73명의 환자 중 혈액도말 검사상 70명이 삼일열 말라리아로 진단받았으며 중합효소연쇄반응검사상 69명(98.6%)이 양성률을 보였다. 또한 혈액도말 검사상 열대열 원충이 발견되었던 3명(100%)의 경우 중합효소연쇄반응 검사상 모두 양성 결과였다. 본 중합효소연쇄반응 키트의 경우 μL당 0.1개의 원충까지 검출할 수 있는 높은 예민도를 보였다. 결론: LG AdvansureTM Malaria P.f./P.v. real-time QPCR 검사는 민감도와 특이도가 높았으며 원충의 농도가 매우 낮을 경우에도 검출할 수 있어 말라리아 감염의 진단에 유용할 것으로 생각한다.

유통중인 파프리카, 딸기 및 토마토의 생물학적 위해요소 분포 조사 (Biological Hazard Analysis of Paprikas, Strawberries and Tomatoes in the Markets)

  • 유용만;윤영남;;차광호;이영하
    • 한국식품위생안전성학회지
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    • 제24권2호
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    • pp.174-181
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    • 2009
  • 생활수준의 향상으로 건강과 웰빙에 대한 관심이 늘면서 즉석섭취(ready-to-eat) 농산물의 수요가 증가하고 있다. 이들 농산물중 파프리카, 딸기, 토마토 등은 우리나라의 대표적인 수출 농산물로서 안전성 확보가 중요하다. 본 연구는 대전시내 2개 백화점과 2개 대형할인점에서 유통 중인 파프리카, 딸기 및 토마토를 대상으로 총호기성균, 대장균군, 식중독 유발 세균 및 기생충의 오염 수준을 배지 배양법, multiplex PCR, 상업용키트 및 현미경으로 조사하였으며, 또한 세척방법별 세균 감소율을 평가하였다. 유통중인 파프리카, 딸기 및 토마토의 평균 총호기성균 수는 $1.3{\times}10^4{\sim}1.8{\times}10^5$CFU/g, 평균 대장균군의 수는 $1.4{\times}10^3{\sim}9.6{\times}10^3$CFU/g 범위이었으며, 세균 오염 정도는 매장별로 유의한 차이를 보이지 않았다. 총호기성균 및 대장균군의 오염 정도는 딸기에서 가장 높았으며, 딸기에서 미확인 기생충 충란이 발견되었다. 조사한 농산물에서 가장 흔히 분리되는 세균은 Enterobacter cloacae 이었으며, 식중독 유발 세균중 Staphylococcus aureus가 딸기에서 발견 되었으나 그 외의 식중독 유발 세균은 분리되지 않았다. 딸기를 대상으로 세척방법별 세균 감소율을 조사한 결과 수돗물로 5회이상 세척시 일반세균의 80%이상을 제거할 수 있었으며 야채용 세제를 사용하거나 초음파 세척시 세균 감소율이 증가하였다. 이상의 결과로 보아, 파프리카, 딸기 및 토마토의 세균 및 기생충의 오염 정도를 조사한 결과 딸기에서 가장 많은 생물학적 오염을 보였으며, 이들 농산물들의 생물학적 오염 정도는 구입 매장별로 유의한 차이를 보이지 않았다.