Water extracts of Acanthopanax divaricatus var. albeofructus (ADA) fruits were used to treat hPBMC to determine the mechanisms for the immunomodulatory effects. The secretion level of various cytokines including Th-1 type (IL-2, L-12, $IFN-{\gamma}$ and $TNF-{\alpha}$) and Th-2 type (IL-6, IL-8 and IL-10) were measured using ELISA. A significant increase of Th-1 type cytokine secretion was observed in the presence of extract while Th-2 cytokine, IL-6 was suppressed. Our results suggest that ADA fruit extract may influence the anticancer immune responses towards a predominance of Th-1 cytokines in the immune system.
The morphological characteristics of newly isolated Cordyceps hepialidicola were characterized, and the phylogenetic relationships with other Cordyceps species were investigated using a sequence analysis of the internal transcribed spacer (ITS). The PCR product of 592 bp showed a homology of 92 and 91% with C. militaris and C. nutans, respectively, In an in vitro model using mouse peripheral blood mononuclear cells (PBMC), a methanol extract of C. hepialidicola induced multiple cytokines, including IFN-${\gamma}$ IL-4, and IL-18. The extract also enhanced the percentages of the CD4$\^$+/ and CD8$\sub$+/ T cells in the healthy murine PBMCs to 56.1% and 13.0%,respectively. The percentages of CD4$\^$+/ and CD8$\^$+/ in the untreated controls were 28.4 and 7.3%, and concanavalin A-treated positive controls were 62.4 and 18.3%, respectively.
Ida, N.;Ozaki, K.;Suenobu, S.;Takashi, K.;Yamaguchi, D.;Matsuo, T.
대한치과보존학회:학술대회논문집
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대한치과보존학회 2003년도 제120회 추계학술대회 제 5차 한ㆍ일 치과보존학회 공동학술대회
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pp.602-602
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2003
I. Objectives It is reported that there are complements and immunogloblins in serum from dental pulp in dentinal tubules, and it is thought that dental caries bacteria is opsonized by these serum ingredients, and it is presented by dendritic cells(DCs) in dental pulp. So, we examined whether a maturational difference of DCs occured when S. mutans was opsonized. II. Materials and Methods PBMC was divided from normal human peripheral blood and collected CD14 positive cells by magnetic beads system. Adherent cells were incubated in 5% FCS-RPMI medium included GM-CSF, IL-4 for seven days.(omitted)
Cryopreservation and thawing of PBMCs are inevitable processes in expanding the scale of experiments in human immunology. Here, we carried out a fundamental study to investigate the detailed effects of PBMC cryopreservation and thawing on transcriptomes. We sorted Tregs from fresh and cryopreserved/thawed PBMCs from an identical donor and performed single-cell RNA-sequencing (scRNA-seq). We found that the cryopreservation and thawing process minimally affects the key molecular features of Tregs, including FOXP3. However, the cryopreserved and thawed sample had a specific cluster with up-regulation of genes for heat shock proteins. Caution may be warranted in interpreting the character of any cluster of cells with heat shock-related properties when cryopreserved and thawed samples are used for scRNA-seq.
연구배경: 산소기의 작용은 과거에는 세포독성이 주로 알려져 있었던 반면, 최근 들어 산소기의 세포내 신호전달체계에서의 역할에 많은 사람의 관심이 모이고 있다. 여러 cytokine의 전사인자(transcription factor)로 작용하는 $NF{\kappa}B$는 기저상태에서는 세포질에 존재하는데 $I{\kappa}B$와 결합되어 핵내로의 이동이 억제되고 있다. 여러 연구에 의해 $NF{\kappa}B$의 $I{\kappa}B$로부터의 분리는 외부자극에 의해 생성된 산소기에 의한 것으로 알려졌는데, 이렇게 하여 분리된 $NF{\kappa}B$가 핵내로 이동하면 핵내에서 전사인자로 작용하여 여러 유전자의 전사를 증가시키는 것이 보고되었다. IL-8 유전자는 5'flanking promotor region에 $NF{\kappa}B$-like motif가 있어 핵내 $NF{\kappa}B$ activity의 증가로 IL-8 유전자의 전사가 증가되는 것으로 알려졌고, 또한 내독소는 핵내의 $NF{\kappa}B$ activity의 증가와 함께 호중구에서의 산소기의 분비를 가져온다. 이러한 사실로부터 내독소에 의한 IL-8 유전자의 발현은 세포내에서 생성된 산소기에 의해 $NF{\kappa}B$가 $I{\kappa}B$로부터 분리되어 핵내로 이동하고 이로 인해 IL-8 유전자의 전사가 증가되는 가설을 생각할 수 있다. 저자들은 이러한 가설 검정의 첫번째 단계로써 체내 염증반응에서 중요한 역할을 하는 말초혈액 단핵구의 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ 유전자 발현에 세포내의 산소기가 관여하는지의 여부를 평가하고자 본 연구를 시행하였다. 방법: Ficoll-Hypaque density gradient 법과 plastic 부착법을 이용하여 말초혈액 단핵구를 분리하였다. 외부에서 투여한 산소기의 농도에 따른 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ mRNA 발현의 유무를 관찰하기 위하여 $H_2O_2$를 0, 10, 100, $300{\mu}M/L$, 1mM/L의 농도로 투여하고 6시간이 경과한후 IL-8 및 IL-$1{\beta}$에 대한 Northern blot analysis를 시행하였다. 시간에 따른 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ mRNA 변화를 관찰하고자 $H_2O_2$를 $100{\mu}M/L$의 농도로 투여하고 0, 2, 4, 6, 8, 24시간이 경과한 후 Northern blot analysis를 시행하였다. 항산화제가 내독소에 의한 IL-8과 IL-$1{\beta}$ mRNA 발현에 미치는 영향을 평가하기 위하여 TMTU(10 mM/L) 1시간; PDTC($100{\mu}M/L$) 1시간, NAC(10 mM/L) 2.5시간, ME(10mM/(L) 2.5시간, Desferrioxamine(100mM/L) 15시간 동안 전처치 한 디음 내독소를 투여허여 4시간이 경과한 후 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ mRNA에 대한 Northern blot analysis를 시행하였다. 결과: $H_2O_2$농도 및 시간에 따른 말초혈액 단핵구에서의 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ mRNA의 발현에는 유의한 차이가 관찰되지 않았지만 항산화제로 전처치하였을 때 내독소에 의한 말초혈액 단핵구에서의 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ mRNA의 발현이 억제되었고 그 억제정도는 TMTU에서 가장 현저하였다. 결론: 이상의 결과에서 말초혈액 단핵구에서의 IL-8 및 IL-$1{\beta}$ mRNA 발현에 $H_2O_2$가 아닌 다른 산소기가 일부 관여할 것으로 생각된다.
The therapeutic potential of phosphodiesterase 4(PDE4) inhibitors in inflammatory diseases including some autoimmune diseases has been explored recently with some hopeful results. These PDE4 inhibitors are thought to show their anti-inflammatory effect by down-regulating tumor necrosis factor-a (TNF-$\alpha$) production in lymphocytes and macrophages. A high concentration of TNF-$\alpha$has been found in rheumatoid arthritis (RA) synovium and reducing TNF-$\alpha$using biological agents was proven to be an effective RA treatment. To test the possibility of using PDE4 inhibitors for RA treatment, the effects of a newly synthesized PDE4 inhibitor, DWP205505, on TNF-$\alpha$ and IL-10 production was tested in cells isolated from normal peripheral blood and rheumatoid arthritis synovial fluid. Cytokine production was assayed at the protein level by sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and at the mRNA expression level by semi-quantitative RT-PCR. Another PDE4 inhibitor, RP73401, was used for comparison. DWP205505 and RP73401 had no harmful effect on cell viability up to 10 $\mu$M concentration during the 24 h culture period. DWP205505 as well as RP73401 significantly reduced TNF-$\alpha$ secretion from lipopolysaccharide (LPS)-stimulated peripheral blood mononuclear cells (pBMC) and synovial fluid mononuclear cells (SFMC). The effect of DWP205505 or RP73401 treatment on the mRNA expression of TNF-$\alpha$ was also studied in LPS-stimulated PBMC and SFMC. TNF-$\alpha$ mRNA expression was increased by LPS stimulation and both of the PDE4 inhibitors suppressed TNF-$\alpha$ mRNA expression. For interleukin-l0 (IL-l0), a little different results were obtained from PBMC and SFMC; IL-l0 secretion was unaffected by LPS stimulation and only minimally affected by both of the PDE4 inhibitors in PBMC. In unstimulated SFMC, DWP205505 and RP73401 slightly enhanced IL-10 secretion, while they reduced IL-l0 secretion from LPS-stimulated SFMC where IL-l0 secretion was a lot higher than unstimulated SFMC. These results suggest that the newly synthesized PDE4 inhibitor DWP205505 may have anti-rheumatoid arthritis activity.
본 연구는 고온 스트레스에 노출된 홀스타인종 젖소와 이후 회복 기간을 가진 홀스타인종 젖소의 혈액을 분석하여 면역세포의 분포와 기능을 확인하여 고온 스트레스에 대한 시간에 따른 면역변화를 규명하고자 하였다. 실험은 HTP(THI: 76 ± 1.2)와 CTP(THI: 66 ± 1.3)의 국립축산과학원 낙농과에서 사육중인 홀스타인종 젖소를 그룹당 5마리를 사용하여 수행되었다. EDTA tube를 사용하여 혈액을 샘플링하여 CBC 분석과 PBMC를 분리되었다. 분리된 PBMC는 유세포 분석을 실시하였다. CBC 결과는 그룹 간 면역세포 수에 변화가 없었다. PBMC의 Flow Cytometry를 사용한 분석에서는 그룹 간 B cell, Helper T cell, cytotoxic T cell, γδ T cell 간에 유의한 차이가 관찰되지 않았다. 그러나 IL-17a를 생산하는 Th17 cell의 증가가 있었던 반면, CTP 중 Th1 cell은 감소하였다. CTP에서 IL-10의 발현 증가와 HSP70과 HSP90의 발현 감소가 관찰되었다. 결론적으로, IL-10의 발현 증가와 HSP 발현의 감소는 고온 스트레스로부터 약한 회복의 가능성을 시사한다. 그러나 B cell, T cell 및 기타 면역세포의 관찰된 변화가 없다는 것은 CTP 중 고온 스트레스로부터 불완전하게 회복되었음을 나타낸다. 본 연구에서는 적온기 정상수준의 젖소 면역세포 분포에 대한 결과가 부재하여 적온기, 고온기, 회복기의 연결성 있는 비교분석이 부족하다는 한계가 있으며 젖소의 생리대사와 유생산량, 고온 스트레스 바이오마커 등에 대한 분석이 함께 이루어진다면 좀 더 명확한 회복기 대사 및 면역반응에 대한 결과 도출이 가능할 것으로 생각된다.
Yun Jong Min;Lee Min Goo;Park Sae Wook;Lee In;Cho Kwang Ho;Moon Byung Soon
동의생리병리학회지
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제18권4호
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pp.1179-1185
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2004
The Korean traditional medicine, Seonghyangjeonggisan (SHJGS) has long been used for acute cerebral infarction (Cl). However, scientific investigation has been carried out a little. Cytokines, involved in the regulation of inflammatory reactions and immune responses, may play an important role in the pathogenesis of Cl. The aim of this study is to investigate the effects of SHJGS on the production of various cytokines in the patients with acute Cl. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from the patients with acute Cl were cultured for 24hr in the presence or absence of lipopolysaccharide (LPS) and phytohaemagglutinin (PHA). The amount of TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-8, in PBMC culture supernatant, was significantly increased in the LPS and PHA treated cells, compared with unstimulated cells (P<0.05). This study showed that increased TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-8 level stimulated by LPS and PHA was inhibited by SHJGS (0.01-1 ㎎/㎖) in a dose-dependent manner but IL-8 level was not inhibited significantly at 1㎎/㎖ (P>0.05). The maximal inhibition rate of TNF-α, IL-1β, IL-6 and IL-8 by SHJGS (1㎎/㎖) was 68% (P<0.05), 53.9% (P<0.05), 45.5% (P<0.05), 46.7% (P>0.05) respectively. These results suggest that SHJGS might have anti-inflammatory effects through cytokine modulation. which might explain its beneficial effects in the treatment of acute Cl.
목적 : 골쇄보(骨碎補) (Drynariae Rhizoma)는 한의학에서 골격계 질환의 치유력을 강화시키는 것으로 알려져 있는데, 항 virus, 항 박테리아, 항 염증 작용이 있는 것으로 보고되고 있다. 질병을 치료하기 위하여 면역 반응을 조절하는 기전에 관하여 오랫 동안 많은 관심을 기울여왔는데, 식물에서 추출한 약재들이 면역기능을 조절할 수 있는 가능성에 대하여 광범위하게 연구되었다. 이에 저자는 골쇄보(骨碎補)의 ethanol 추출물을 가지고 항 세포성과 변역 조절 기능에 대하여 연구하였다. 방법 : 사람의 혈액단핵구 (PBMC)의 배양은 thymidine 법으로 검정하고 nitric oxide (NO) 생성은 mouse macrophage RAW 264.7 세포주를 이용하였으며 IL-2, IFN 와 TNF-a 생성은 ELISA 기술로 검정하였다. 세포 증식은 FACScan으로 측정하고 세포 표면항원 CD16, CD25 및 HLA-DR 은 FITC/PE 항체로 측정하였다. 결과 : 골쇄보(骨碎補)는 mitogen (phytohaemagglutinin; PHA) 과 antigen (purified protein derivative; PPD) 에 의해 자극받은 human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) 의 증식을 억제하였다. 더욱이, 골쇄보(骨碎補)는 mouse 와 인간에 기원한 여러 세포들의 성장을 억제하였다. 또한, nitric oxide (NO), interleukin-2 (IL-2)와 tumor necrosis $factor-{\alpha}\;(TNF-{\alpha})$ 의 생성을 억제하였다. 한편, human PBMCs 에서 intracytoplasmic $interferon-{\gamma}\;(IFN-{\gamma})$와 cell surface markers 인 CD16, HLA-DR 의 expression은 골쇄보(骨碎補)에 의하여 영향을 받지 않았으나, CD25 expression 은 현저히 통제되었다. 결론 : 골쇄보(骨碎補) ethanol 추출물이 in vitro 에서 항 증식성과 변역 억제작용을 가지고 있다는 가능성을 의미하는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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