Phosphosugars are found in all living organisms and are commercially valuable compounds with possible applications in the development of a wide range of specialty chemicals and medicines. In carbohydrate metabolism, fructose 6-phosphate (F6P) is an essential intermediate formed by phosphorylation of 6' position of fructose in glycolysis, gluconeogenesis, pentose phosphate pathway and Calvin cycle. In glycolysis, F6P lies within the glycolysis metabolic pathway and is produced by isomerisation of glucose 6-phosphate. For large-scale production, F6P could be produced from starch using many enzymes such as pullulanase, starch phosphorylase, isomerase and mutase. In enzymatic reactions carried out at high temperatures, the solubility of starch is increased and microbial contamination is minimized. Thus, thermophile-derived enzymes are preferred over mesophile-derived enzymes for industrial applications using starch. Recently, we reported the production of glucose 1-phosphate (G1P) from starch by Thermus caldophilus GK24 enzymes. Here we report the production of F6P from starch through three steps; from starch to glucose 1-phosphate (glucan phosphorylase, GP), then glucose 6-phosphate (phosphoglucomutase, GM) and then F6P (phosphoglucoisomerase, GI). Using 200 L of 1.2% soluble starch solution in potassium phosphate buffer, 1,253 g of G1P were produced. Then, 30% yields of F6P were attained at the optimum reaction conditions of GM : G1 (1 : 2.3), 63.5$^{\circ}C$, and pH 6.85. The optimum conditions were found by response surface methodology and the theoretical values were confirmed by the experiments. The optimum starch concentrations were 20 g/L under the given conditions.
Background: The mammalian target of rapamycin (mTOR) /RPS6KB1 activation has recently been implicated in tumour development, but its role in lung cancer remains unclear. The aim of this study was to explore the role of mTOR/RPS6KB1 signaling pathway in non-small-cell lung cancer (NSCLC). Methods: Immunohistochemistry was performed to assess the expression of phosphorylated mammalian target of rapamycin (p-mTOR) and its downstream ribosomal phosphorylated RPS6KB1 (p-RPS6KB1) in NSCLC patients. We also analyzed p-mTOR/p-RPS6KB1 protein expression in 45 fresh NSCLC tissues using Western blotting. Results: The expression level of p-mTOR and p-RPS6KB1 was significantly higher in NSCLC tumor specimens than that in adjacent noncancerous normal lung tissues (P<0.01). p-mTOR expression correlated with p-RPS6KB1. Furthermore, high expression level of p-mTOR or p-RPS6KB1 in NSCLC was associated with a shorter overall survival (both P<0.01). Multivariate analysis indicated high level of p-mTOR expression was an independent prognostic factor (HR=2.642, 95%CI 1.157-4.904, p=0.002). Conclusions: p-mTOR and p-RPS6KB1 could be useful prognostic markers for NSCLC.
The purpose of this study was to determine whether vitamin B6(B6) deficiency affects fuel utilization and blood cholesterol profile with exercise-training. Twenty-four rats were fed a B6 deficient(-B6) diet or a control (+B6) diet for 5 weeks and either exercised(EX) or nonexercised (NE). EX rats were exercised on treadmill(10$^{\circ}$, 0.5-0.8km/h) for 20 minutes everyday. Glucose(GLU), glycogen (GLY), protein(PRO), trglyceride(TG), free fatty acid(FFA), total cholesterl(TC), HDL-cholesterol(HDL-C) and LDL-choleterol(LDL-C) were compared in plasma(P), liver(L) and skeletal muscle(M) of rats. There was a vitamin effect on the level of P-GLU, P-TG, M-TG, L-GLY, L-PRO and an exercise effect on the level of P-PRO, P-FFA, M-PRO, L-GLY, L-TG, P-TC, P-HDL-C, P-LDL-C. Compared to +B6 rats were lower and there were no differences in P-GLU, P-FFA, P-TG. M-GLY, L-TG, P-TC and P-HDL-C. In EX group, the level of P-TG was higher and M-PRO was lower in -B6 rats. There were no differences in M-GLY, L-TG, P-TC and P-HDL-C. These results suggest that a lowered intake of vitamin B6 may impair the adaptation of animals to fuel metabolism related to a decrease of fatty acid oxidation and attenuates the exercise-traning effect on blood lipid profile.
When phenylation of styrene was carried out in the presence of Pd(OAc)2 and PPh3 in benzene, trans-stilbene was obtained in good yield (566%) with high selectivity (98%) under mild condition (55 ℃, 50 psi O2, 20 h). Since trans-stilbene could be produced not only from benzene but also from phenyl group of PPh3 by migration of its phenyl group to Pd, the competitiveness of benzene and the migratory aptitude of aryl group of triarylphosphine toward styrene has been investigated with various phosphines (PR3: P(p-C6H4CH3)3, P(p-C6H4OCH3)3, P(p-C6H4F)3, P(p-C6H4Cl)3, P(C6H5)3, P(C6H11)3, P(OC4H9n)3, P(CH2C6H5)3 and P(C6F5)3). The yield and selectivity toward trans-stilbene are increased as the basicity of the phosphines increases. The composition of arylated olefin from arylphosphine, in turn, increases as the electronegativity of the substituent on the aryl group of arylphosphines increases.
Lee Hyung Sik;Park Hong Kyu;Moon Chang Woo;Yoon Seon Min;Hur Won Joo;Jeong Su Jin;Jeong Min Ho;Lee Sang Hwa
Radiation Oncology Journal
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v.17
no.1
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pp.70-77
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1999
Purpose : The expression of p53, P211WAF/CIP, Bcl-2, and Bax underlying the radiation-induced apoptosis in different pH environments using SCK mammary adenocarcinoma cell line was investigated. Materials and Methods Mammary adenocarcinoma cells of hi) mice (SCK cells) in exponential growth phase were irradiated with a linear accelerator at room temperature. The cells were irradiated with 12 Gy and one hour later, the media was replaced with fresh media at a different pHs. After Incubation at 37Microbioiogy, College of Medicine Dong A University for 0$\~$48 h, the extort of apoptosis was determined using agarose gel electrophoresis and flow cytometry. The progression of cells through the cell cycle after irradiation in different pHs was also determined with flow cytometry. Western blot analysis was used to monitor p53, p211WAFfCIP, Bcl-2, and Bu protein levels. Results : The induction of apoptosis by irradiation in pH 6.6 medium was markedly less than that in pH 7.5 medium. The radiation-induced G2IM arrest in pH 6.6 medium lasted markedly longer than that in pH 7.5 medium. Considerable amounts of p53 and p21 proteins already existed at pH 7.5 and increased the level of p53 and p21 significantly after 12 Gy X-irradiation. An incubation at pH 6.6 after 12 Gy X-irradiation did not change the level of p53 and p21 protein levels significantly. Bcl-2 proteins were not significantly affected by radiation and showed no correlation with cell susceptibility to radiation-induced apoptosis in different pHs. An exposure to 12 Gy of X-rays increased the level of Bax protein at pH 7.5 but at pH 6.6, it was slight. Conclusions : The molecular mechanism underlying radiation-induced apoptosis in dinerent pH environments using SCK mammary adenocarcinoma cell line was dependent of the expression p53 and P211YVAF/CIP proteins. We may propose following hypothesis that an acidic stress augments the radiation-induced G2iM arrest, which inhibiting the irradiated cells undergo post-mitotic apoptosis. The effects of environmental acidity on anti-apoptotic and pro-apoptotic function of Bcl-2 family was unclear in SCK mammary adenocarcinoma cell line.
P2Y receptors, a type of P2 receptor family, are G-protein coupled receptors and 8 subtypes have been characterized ($P2Y_1$, $P2Y_2$, $P2Y_4$, $P2Y_6$, $P2Y_{11-14}$). Recently, several studies have shed light on the role of P2Y receptors in bone biology. Among them, little is known on the role of $P2Y_6$ receptor on osteoclast differentiation. Thus, we investigated the role of $P2Y_6$ receptor on osteoclastogenesis using $P2Y_6$ receptor selective antagonist, MRS 2578. When osteoblasts and bone marrow cells were co-cultured in the presence of $VitD_3$ and $PGE_2$, $P2Y_6$ antagonist increased the formation of TRAP positive osteoclasts. To elucidate the target cells of $P2Y_6$ antagonist, we first checked the effect of MRS 2578 on osteoblasts. Treatment of MRS 2578 did not affect OPG : RANKL mRNA ratio in osteoblasts. Next, we checked the effects of $P2Y_6$ antagonist on osteoclast precursors using mouse bone marrow macrophages (BMMs). Addition of MRS 2578 increased the number of osteoclasts in RANKL-treated BMMs. Although $P2Y_6$ antagonist had no effect on RANKL-induced NFATc1, c-Fos and MafB expression levels, it significantly stimulated RANKL-induced Blimp1 mRNA expression in BMMs. Taken together, these data indicate that $P2Y_6$ antagonist increases osteoclast formation by upregulation of Blimp1 expression.
Three strains of bacteria utilizing salicylate, KU801(pKU5, pKU8), KU803(pKU6, pKU9), and KU806(pKU7, pKU10), were selected from the isolates and identified as Pseudomonas putida. By agarose gel electrophoresis, it was found that the strains had two plasmids each. All three strains were resistant to antibiotics such as ampicillin, tetracyclin, and chloramphenicol, and did not utilize other aromatic and aliphatic hydrocarbons examined except salicylate. The plasmids (pKU5, pKU6, and pKU7) of larger molecular weight were cured by treatment with mitomycin C and frequencies of curing were 0.4%, 1.67%, and 0.75%, respectively. Cured strains did not degrade salicylate and still had antibiotic resistances, which were identical with wild strains. The genes for salicylate degradation were proved to be enclded on thier plasmids. The molecular weights of pKU5 and pKU6 were estimated as 103.5Md, and that of pKU 7 as 101 Md. The new SAL plasmids, pKU5, pKU6, and pKU7 were transferred to P. putida and P. aeruginosa, but not to E. coli.
Kim, M.S.;Sung, H.G.;Kim, H.J.;Lee, Sang-S.;Chang, J.S.;Ha, J.K.
Journal of Animal Science and Technology
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v.47
no.4
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pp.615-624
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2005
The cPCR technique was used to monitor rumen fermentation and attachment of Fibrobacter succinogenes to cellulose at different pH in the in vitro culture medium. The target fragments of 16S rDNA(445 bp) were amplified from genomic DNA of F. succinogenes with specific primers and internal controls(205 bp) were constructed. Cell counts were estimated from the amounts of genomic DNA, which was calculated from cPCR results. F. succinogenes in pH 6.8 and 6.2 showed apparently higher attachment than in pH 5.8 during all incubation time. There were some difference between pH 6.8 and 6.2 in the degree of attachment, but the different was not significant (P>0.05). Cellulose degradation increased in process of incubation time and the increasing rate was higher when initial pH was higher. The pH in culture medium decreased regardless of initial pH in course of incubation time. After 24 h of incubation, medium pH was dropped by 0.24, 0.58 and 0.16 units from original medium pH 6.8, 6.2 and 5.8, respectively. More gas was produced at higher initial pH in the same manner as in cellulose degradation. In summery, Initial pH of rumen culture in vitro significantly influenced cellulose digestion, gas production, pH change and bacterial attachment. Especially, low pH(5.8) resulted in much lower bacterial attachment and fiber digestion compared to higher medium pH.
Bud6p is a component of a polarisome that controls cell polarity in Saccharomyces cerevisiae. In this study, we investigated the role of the Candide albicans Bud6 protein (CaBud6p) in cell polarity and hyphal development. CaBud6p, which consists of 703 amino acids, had 37% amino-acid sequence identity with the Bud6 protein of S. cerevisiae. The homozygous knock-out of CaBUD6 resulted in several abnormal phenotypes, such as a round and enlarged cells, widened bud necks, and a random budding pattern. In hypha-inducing media, the mutant cells had markedly swollen tips and a reduced ability to switch from yeast to hypha. In addition, a yeast two-Hybrid analysis showed a physical interaction between CaBud6p and CaAct1p, which suggests that CaBud6p may be involved in actin cable organization, like Bud6p in S. cerevisiae. Taken together, these results indicate that CaBud6 plays an important role in the polarized growth of C. albicans.
Small size antibiotic resistance plasmids having molecular weights less than 10 Mdal were isolated and characterized from ten clinically isolated multiple resistant Staphylococcus aureus. Agarose gel electrophoresis profiles and antibiotic resistance patterns divided these strains into four groups. Strain 2-23-6, the representative strain of a group of five strains conferred two plasmids of molecular weights $1.6{\times}10^6\;dal\;and\;2.0{\times}10^6$ dal. The small plasmid (pSBK 112) specified macrolides, lincosamides and streptogramin type B (MLS) resistance gene which are expressed constitutively. Lage plasmid (pSBK 125) specified chloramphenicol resistance gene which is inducible. Strain 10-5 conferred a $3.0{\times}10^6$ dal plasmid (pSBK 141) which carry an inducible ampicillin resistance gene and strain P-H-2 conferred and $1.6{\times}10^6$ dal plasmid (pSBK 190) which carry a constitutive MLS resistance gene. Strain D-H-1 conferred four plasmids of molecular weights $0.8{\times}10^6$ dal (pSBK 201), $1.6{\times}10^6$ dal (pSBK 202), $2.5{\times}10^6$ dal (pSBK 203), and $1.2{\times}10^7$ dal (pDBK 204), respectively. Among those four plasmids, only pSBK 203 specified chloramphenicol resistance gene. Curing of constitutive MLS resistance using acriding orange or ethidium bromide in 2-23-6 and P-H-2 strains produced 'inducible' MLS resistance strains which are less resistant to MLS than the wild type strains, suggesting that there are two resistance genes in both strains; one is constitutive and the other is inducible.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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