Double-stranded RNA (dsRNA) viruses and single-stranded RNA(ssRNA) viruses were detected in a strain of Pleurotus mushroom cultivated in a farm. Those fungal virsus were purified in the pH 6.0 or pH 7.2 using CsCI or Cs$_{2}$SO$_{4}$ buoyant density centrifugation. Each viral particles were not completely separated at any trials. However, mushroom bacili-form virus contains a single major nucleic acid with 0.7 Kb ssRNA, which might code for 20 Kd viral capsid protein. The dsRNAs are encapsidatred into spherical-form viruses, whereas ssRNA viral genomes are encapsidated into two different sizes of bacili-form particles. A healthy-looking mushroom also contained some spherical-form viruses with dsRNAs. Laboratory strains of Pleurotus ostreatus and a cultivated strain of P. sajor-caju did not show any viral particles. Mushrooms with specific disease symptoms. however, contained at least four different sizes of spherical-form viruses. Thus, we concluded that a bacilli-form virus case a severe disease symptoms of adnormal on mushroom development.
Ligninolytic enzymes were produced by Pleurotus ostreatus No.42, cultivated in a new kind of bioreactor that has a rotating draft tube with a helical ribbon. Maximum laccase (Lac) production (about 8,200 U/bioreactor) was reached after 3 days of incubation, then production decreased. Production of manganese peroxidase (MnP) in this fermenter reached a maximum level of about 8,400 U/bioreactor after 6 days of incubation. Lignin peroxidase (LiP) was not detected under these growth conditions. These results indicate that the rotary draft tube bioreactor (RTB) is compatible with large scale production of ligninolytic enzymes. MnP produced under these fermentation conditions was purified via a multistep process that included chromatography on Sepharose CL-6B, prep grade Superdex 75, and Mono-Q. This major isoenzyme was confirmed to have an apparent molecular weight of 36,400 by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), and its isoelectric point (IEF) was determined to be 3.95. N-terminal sequencing of the major isoenzyme from this fermentation was identical to that reported for an MnP3 isoenzyme isolated under different cultivation conditions, including stationary and shaking culture.
Jo, Woo-Sik;Yun, Yeong-Seok;Park, Sun-Do;Choi, Boo-Sull
The Korean Journal of Mycology
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v.23
no.3
s.74
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pp.197-201
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1995
For 2 years $(1993{\sim}1994)$, study on development of cheap medium for Pleurotus ostreatus revealed that paper sludge contain more CaO and similar T-C, T-N, $P_2O_5$, MgO but less $K_2O$ than any other medium material in chemical property. Mixed treatment (rice straw + paper sludge 10, 30, 50%, cotton waste + paper sludge 10, 30, 50%, cotton waste + rice hull 20 + paper sludge 10, 30, 50, 70%) is similar or fast a little in mycelial growth and is similar or fast $1{\sim}2$ day in period of primordia formation than cotton waste medium, and in the yield to each medium type also increased but excepted in rice hull 20% + paper sludge 70%, especially mixed medium at 7:3 ratio of cotton waste and paper sludge is best treatment because it is increased to 21%. In economical analysis, mixed medium at 7:3 ratio of cotton waste and paper sludge is increased to 50% compared to cotton waste medium in relative income.
In this study, we attempted to find substitute materials, distillers residue of cassava, alfalfa pellet, and distillers residue of corn, for cotton seed meal in bottle cultivation of Pleurotus ostreatus. In all treatments, the total carbon content was comparable with the exception of T4, and the total nitrogen content of T3 was similar to the control group, and C/N ratio of T4 was higher than other treatments. The diameter of plieus was the largest in T2, and the diameter of stipe was the largest in T2 and T4. And the length of stipe was largest in T1 and T2, and the most number of available stipes was in T1 and T3. The yield and bio-efficiency of fruit-body by residue of corn with soluble treatment(T3), were similar to the control of P. ostreatus. Therefore, it was suggested that residue of corn was substituted for cotton seed meal for cultivation of P. ostreatus.
A fibrinolytic enzyme was produced by an edible mushroom of Pleurotus ostreatus using submerged culture fermentation. The enzyme was purified from the culture supernatant by applying a combination of freeze-thaw treatment, ammonium sulfate precipitation, hydrophobic interaction, and gel filtration chromatographies. The enzyme was purified by a 147-fold, with a yield of 7.54%. The molecular masses of the enzyme an determined by gel filtration and SDS-PAGE were 13.6 and 18.2 kDa, respectively. The isoelectric point of the enzyme was 8.52. It hydrolyzed fibrinogen by cleaving the ${\alpha}$ and ${\beta}$ chains of fibrinogen followed by the ${\gamma}$ chains, and also activated plasminogen into plasmin. The enzyme was optimally active at $45^{\circ}C$ and pH 7.4. The enzyme activity was completely inhibited by EDTA, whereas protease inhibitors of TPCK, SBTI, PMSF, aprotinin and pepstatin showed no inhibition on its activity. The partial amino acid sequences of the enzyme as determined by Q-TOF2 were ATFVGCSATR, GGTLIHESSHFTR, and YTTWFGTFVTSR. These sequences showed a high degree of homology with those of metallo-endopeptidases from P. ostreatus and Armillaria mellea. The purified enzyme can also be applied as a natural agent for oral fibrinolytic therapy or prevention of thrombosis.
Pleurotus ostreatus, the oyster mushroom, is one of the most important edible mushrooms. It is especially susceptible to bacterial blotch disease, which is caused by Pseudomonas tolaasii. In order to develop bacterial blotch disease-resistant transgenic mushroom, NUECIN cDNA, a gene for an antibacterial peptide cloned from Bombyx mori, was overexpressed in Pleurotus ostreatus. NUECIN cDNA was fused to the ${\beta}$-TUBULIN promoter of oyster mushroom and co-transformed with the pTRura3-2 vector into the uracil auxotrophic mutant strain. Twelve transformants containing the NUECIN gene were identified by genomic PCR and Southern blot analysis. NUECIN gene expression was confirmed by Northern blot analysis. Three transformants showed the transcriptional expression of the gene. However, we could not detect expression of the protein in the transformants. This study showed the possibility of transgenic mushroom development for disease resistance.
A DNA fragment which is involved in tolassin production was cloned to obtain a molecular marker of Pseudomonas tolaasii, a casual agent of bacterial brown blotch disease of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus). Tolaasin is a lipodepsipeptide toxin and known as a primary disease determinant of the P. tolaasii. It is responsible for formation of white line in agar when P. tolaasii were cultured against white line reacting organisms (WLROs). White line negative mutants (WL-) were generated by conjugation between rifampicin resistant strain of P. tolaasii and E. coli carrying suicidal plasmid pSUP2021 : : Tn5. The ability of tolaasin production of the WL- mutants was examined by hemolysis test, pathogenicity test, and high pressure liquid chromatography (HPLC) analysis of culture filtrate. All of the WL- mutants were lost the ability of tolaasin production (Tol-). Genomic library of the Tol- mutant was constructed in pLAFR3 and the cosmid clone containing Tn5 was selected. DNA fragment fro franking region of Tn5 was cloned from the plasmid and used as a probe in Southern blot. DNA-DNA hybridization with the probe to total DNA from group of bacteria ecologically similar to P. tolaasii including WLORs, fluorescent Pseudomonads isolated from oyster mushroom, P. agarici, P. gingeri, and some of other species of Psedomonas showed that some of the tested bacteria do not have any hybridized band and others have bands sowing RFLP. The cloned DNA fragment or its nucleotide sequence will be useful in detection and identification of the P. tolaasii.
This study was conducted in order to perform efficient extraction of lignocellulolytic enzymes amylase (EC 3.2.1.1), cellulase (EC 3.2.1.4), laccase (EC 1.10.3.2), and xylanase (EC 3.2.1.8) from spent mushroom compost (SMC) of Pleurotus ostreatus, P. eryngii, and P. cornucopiae. Optimal enzyme recovery was achieved when SMCs were extracted with 50 mM sodium citrate (pH 4.5) buffer at $4^{\circ}C$ for 2 hr. Amylase, cellulase, and xylanase activities showed high values in extracts from P. ostreatus SMC, with 2.97 U/g, 1.67 U/g, and 91.56 U/g, respectively, whereas laccase activity and filter paper degradation ability were highest in extracts from P. eryngii SMC, with values of 9.01 U/g and 0.21 U/g, respectively. Enzymatic activities varied according to the SMCs released from different mushroom farms. The synthetic dyes remazol brilliant blue R and Congo red were decolorized completely by the SMC extract of P. eryngii within 120 min, and the decolorization ability of the extract was comparable to that of 0.3 U of commercial laccase. In addition, laccase activity of the SMC extract from P. eryngii was compared to that of commercial enzymes or its industrial application in decolorization.
For the development of a sporeless strain of P. ostreatus we used sporeless strain ASI 2069. We have recovered both nuclear types of strain ASI 2069 as monokaryons of nh9, nh15, nh26 and nh36 (here after referred to as neohaplonts) by protoplasting the mycelium. Crosses between neohaplonts and SSI's(single spore isolates) obtained from a sporulating commercial strain ASI 2180. Five excellent strains are selected from 30 bred strains by quality of fruitbodies and spore number. To development of molecular markers linked to sporeless strain of P. ostreatus, we are screened helicase, recombinase(DMC1) and topoisomerase(Spo11) genes related meiosis by PCR and sequencing. Among three genes, Spo11 gene was identified into molecular marker of sporeless from neohaplonts and bred strains of P. ostreatus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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