Zahir, Z.A.;Munir, A.;Asghar, H.N.;Shaharoona, B.;Arshad, M.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권5호
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pp.958-963
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2008
A series of experiments were conducted to assess the effectiveness of rhizobacteria containing 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) deaminase for growth promotion of peas under drought conditions. Ten rhizobacteria isolated from the rhizosphere of different crops (peas, wheat, and maize) were screened for their growth promoting ability in peas under axenic condition. Three rhizobacterial isolates, Pseudomonas fluorescens biotype G (ACC-5), P. fluorescens (ACC-14), and P. putida biotype A (Q-7), were selected for pot trial on the basis of their source, ACC deaminase activity, root colonization, and growth promoting activity under axenic conditions. Inoculated and uninoculated (control) seeds of pea cultivar 2000 were sown in pots (4 seeds/pot) at different soil moisture levels (25, 50, 75, and 100% of field capacity). Results revealed that decreasing the soil moisture levels from 100 to 25% of field capacity significantly decreased the growth of peas. However, inoculation of peas with rhizobacteria containing ACC deaminase significantly decreased the "drought stress imposed effects" on growth of peas, although with variable efficacy at different moisture levels. At the lowest soil moisture level (25% field capacity), rhizobacterial isolate Pseudomonas fluorescens biotype G (ACC-5) was found to be more promising compared with the other isolates, as it caused maximum increases in fresh weight, dry weight, root length, shoot length, number of leaves per plant, and water use efficiency on fresh and dry weight basis (45, 150, 92, 45, 140, 46, and 147%, respectively) compared with respective uninoculated controls. It is highly likely that rhizobacteria containing ACC deaminase might have decreased the drought-stress induced ethylene in inoculated plants, which resulted in better growth of plants even at low moisture levels. Therefore, inoculation with rhizobacteria containing ACC deaminase could be helpful in eliminating the inhibitory effects of drought stress on the growth of peas.
Isolation and identification of mesophilic and psychrotrophic bacteria distributed in Korean refrigerated beef were attempted. Total isolated colonies were 192, and identified as 5 genera and 10 species. Among them, mesophilic bacteria were Enterobacter aerogenes, E. agglomerans, Serratia liquefaciens, Proteus mirabilis, and "psychrotrophic" bacteria were Pseudomons fluorescens, P. putida, P. pickettii, P. mendocina, P. stutzeri, Alcaligenes faecalis. Dominant species was Serratia liquefaciens as mesophiles, and Pseudomonas putida as psychrotroph.chrotroph.
진주근교와 금산, 남지 등의 17개 오이연작재배지역에서 건전식물의 근권토양으로부터 Triple Layer Agar(TLA)법을 변형개량하여, 오이덩굴쪼김병균에 대한 길항균을 효과적으로 분리하였고, 예비실험(in vitro, in vivo)결과에서 길항력이 우수한 세균(15 isolates)과 곰팡이(9 isolates)를 선별하여 동정하였다. 이들 중 Serratia sp., Pseudomaonas fluorescens, P. putida등 세균 3균주와 Gliocladium sp., Trichoderma harzianum, T. viride 등 곰팡이 3균주를 공시하여 얻은 실내실험의 결과는 다음과 같다. Water Agar(WA) 상에서 길하세균에 의한 오이덩굴쪼김병원균의 소형분생포자의 발아율은 $26\~45\%$ 억제 되었으며, 발아관의 길이도 $41\~56\%$ 억제되었는데, P. fluorescens가 그 중 가장 우수한 길항력을 나타내었다. WA상의 대치배양에서 길항곰팡이의 균사가 본병원균의 균사를 Coiling, Penetration, Overgrowing, Lysis 하는 등의 길항현상을 관찰할 수 있었으며, 그 중 T. harzianum이 가장 강력한 길항력을 나타내었다. 배양기의 pH별 길항곰팡이에 의한 오이덩굴쪼김병균의 Lysis정도는 pH4.6에서 가장 높았으며 다음은 3.6, 5.6, 6.6의 순이었는데 pH 6.6에서는 길항현상이 잘 나타나지 않았으나, 길항곰팡이의 후막포자가 다량 형성되었다.
From the total 121,294 clinical materials submitted to the Department of Laboratory Medicine of "C" hospital from December 1, 2004 to November 30, 2006, 3,408 Pseudomonas spp. were isolated. The isolation frequencies of Pseudomonas spp. were as follows, P. aeruginosa 95.5%, P. putida 2.5%, P. fluorescens 0.8%, along with low frequencies of P. luteola, P. alcaligenes, P. stutzeri, P. oryzihabitants, P. mendocina and unidentified Pseudomonas species. The isolation rates of Pseudomonas spp. according to season and sex were evenly distributed. The isolated frequency of Pseudomonas spp. in male was two times higher than that of in female showing significantly more male patients in surgical areas and more female patients in internal areas (p<0.001). In monthly analysis, Pseudomonas spp. were the most frequently isolated in July (10.4%), but lowest in February (5.6%). Half of Pseudomonas spp. were isolated from sputum (48.2%). In the susceptibility analysis of Pseudomonas spp. by VITEK II AST cards, the Pseudomonas spp showing higher susceptibility against antimicrobial agents were piperacillin/tazobactam (82.7%) in P. aeruginosa; amikacin (84.7%), colistin (83.3%) in P. putida; and amikacin (96.3%), cefepime (87.5%), ceftazidime (87.5%) ciprofloxacin (92.3%), colistin (88.5%) gentamicin (96.2%), isepamicin (96,1%), meropenem (92.3%), netilmicin (96.0%), piperacillin/ tazobactam (95.4%) and tobramycin (92.6%) in P. fluorescens.
반응표면분석법은 최적화 연구에 자주 사용되는 통계적 분석방법이다. 본 연구는 반응표면분석법에 의해 Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas fluorescens 및 Vibrio parahaemolyticus에 대한 자몽종자 추출물과 젖산 혼합물의 항균활성을 검토하여 최적화하였다. 중심합성계획에 따라 1% 자몽종자 추출물 (GFSE)과 10% 젖산 (LA)의 비율 ($X_1$, 0:100-100:0 v/v)과 1% GFSE와 10% LA 혼합물의 농도 ($X_2$, 20-100%)를 독립변수로 하고 S. aureus ($Y_1$), B. cereus ($Y_2$), E. coli ($Y_3$), S. typhimurium ($Y_4$), P. fluorescens ($Y_5$) 및 V. parahaemolyticus ($Y_6$)에 대한 항균활성을 종속변수로 하여 항균활성을 측정하였다. 미생물에 대한 1% GFSE와 10% LA의 항균활성 처리조건의 최적범위는 다양한 조건하에서 얻어진 반응변수의 항균활성에 관하여 중첩된 등고선도로 예측하였고, 항균활성을 최대화하기위한 최적범위는 1% GFSE와 10% LA의 비율 35.73:64.27-56.58:43.42 (v/v)이었고 혼합물의 농도는 $51.70{\sim}100%$였다. 최적 항균활성 범위내의 주어진 조건 (1% GFSE:10% LA 비율 40:60, 1% GFSE:10% LA 혼합물 70%)에서 S. aureus ($Y_1$), B. cereus ($Y_2$), E. coli ($Y_3$), S. typhimurium ($Y_4$), P. fluorescens ($Y_5$) 및 V. parahaemolyticus ($Y_6$)에 대한 1% GFSE:10% LA 혼합물의 비율 및 농도의 항균활성은 각각 24.55, 25.22, 20.20, 22.49, 23.89 및 28.04 mm로 예측되었다. 최적조건 범위내의 임의의 조건에서 실험한 결과 각 종속변수들의 예측값과 실제값이 유사한 항균활성을 보였다.
토양(土壤) 병원성(病原性) 미생물(微生物)에 대한 길항력(拮抗力)이 강한 PGPR인 P. fluorescens SSL3과 B. subtilis B5를 배양(培養)하여 다양한 담체에 혼합접종(混合接種)하여 제제화(製劑化)한 다음 각 제제에 대한 보관온도에 따른 공시균주(供試菌株)의 생존율(生存率)과 siderophore 생성조건, 전자현미경 사진을 통한 제제내의 균체생육 환경을 조사하고 감자의 수량(收量) 및 원예작물(園藝作物)의 초기생육(初期生育)에 미치는 영향을 조사(調査)한 결과는 다음과 같다. 1. 제제의 저장온도(貯藏溫度)에 따른 공시균주의 생존율(生存率)은 $4^{\circ}C$의 경우 분말형(粉末形) 토탄/석회, 질석, 밀기울 제제에서 경시적으로 서서히 감소하였으며, $4^{\circ}C$ 보다는 $25^{\circ}C$에서 공시균의 감소 경향이 두드러졌으며, 분말형(powder)제제의 경우 5% skim milk를 영양원으로 처리한 경우 보존기간중의 균체 감소정도가 둔화되었다. 2. 병원성(病原性) 사상균(絲狀菌)인 F. oxysporum에 대한 공시균(供試菌) B. subtilis(B5)와 P. fluorescens(SSL3)의 혼합처리효과(混合處理效果)는 F. oxysporum에 대한 생육억제(生育抑制) 효과(效果)를 보이지 않았지만, R. solani에 대해서는 대조구에 비해 78.4%의 생육억제 효과를 보였다. 3. 전자현미경(SEM) 사진을 통한 제제내에서 공시균(供試菌)의 생육환경을 살펴본 결과 분말형 제제가 더 낳은 것으로 보이지만, 제제 자체가 다양한 미생물(微生物)들의 영양원으로 이용될 수 있는 경우 밀기울에서는 장기간(長期間)의 보존기간중(保存期間中) 타균(他菌)에 의한 오염(汚染)의 가능성이 있다. 4. 공시균(供試菌) P. fluorescens SSL3을 MKB 액체배지에서 48시간 생육시켜 원심분리(遠心分離)한 후 상징액을 취해 파장 220~600nm에서 scanning한 결과 Pseudomonas속 균(菌)들중 PGPR적 특징(特徵)을 갖는다고 알려진 pyoverdin과 pyochelin을 400nm와 300nm에서 peak를 확인할 수 있었다. 5. 공시균(供試菌) 혼합제제(混合製劑)의 오이, 토마토, 고추의 초기생육(初期生育)에 미치는 영향을 조사(調査)한 결과 공시작물 모두에서 토양, 밀기울과 구슬형 밀기울 제제가 뛰어난 생육촉진(生育促進) 효과(效果)를 보였다. 특히, 고추의 경우 토양, 질석, perlite에서 지상부(地上部), 지하부(地下部)의 신선중(新鮮重)과 건물중(乾物重) 증가 효과를 보였으며, 오이의 경우에는 CMC 처리구에서 지하부(地下部)를 87%의 생육촉진 효과를 보였다. 6. 감자의 생육(生育)과 수량(收量)에 미치는 영향중 일반종서(一般種薯)에 처리한 제제중에서 구슬형 제제 처리구가 분말형제제 처리구 보다 많은 22~29%의 증수효과(增收效果)를 보였으며, 조직배양(組織培養) 종서의 경우에 분말형(粉末形) 제제(製劑) 처리구가 가장 높은 30%의 증수효과를 보였다. 그리고 CMC제제 처리구에서는 B5 단독처리구가 대조구에 비해 22.9%의 증수효과를 보였다.
Twenty two rhizobacteria were isolated from the roots and rhizosphere of radish, carnation, potato and tomato. There isolates produced a fluorescent pigment in King's B medium and identified as Pseudomonas spp. These isolates colonized roots and rhizosphere of the host plants. In the study of cultural characteristics of the bacteria, the pH of the culture broth was changed from neutral (7.0) to alkali (8.8∼9.41) and the numbers of cells were increased from 106 to 108 after 40 hr of incubation in basal standard succinate medium. The salicylic acid production identified by pink color reaction were observed in 7 bacteria. Out of these 7 salicylic acid producing bacteria, only 2 strains of bacteria such as Pseudomonas fluorescens RS006, and Pseudomonas sp. EN401 were confirmed as salicylic acid producers by optical density measurement. Therefore, for screening of salicylic acid producing bacteria from the roots and rhizosphere, color reaction of the culture medium should be done in the first step, and then optical density measurement of culture extract should be made for the confirmation of salicylic acid production.
This study was aimed to investigate the prevalence and antimicrobial resistance of Pseudomonas spp. isolated from bovine mastitis milk samples. A total of 50 (4.9%) Pseudomonas spp. was isolated from 1,023 samples, those collected between 2018 and 2021, derived from 110 dairy farms. The prevalence of the identified species of Pseudomonas isolates was as follows; P. aeruginosa (70.0%), P. fluorescens (14.0%), P. putida (10.0%), P. fragi (4.0%), and P. chlororaphis (2.0%). Most of somatic cell counts in the quarter milk carrying Pseudomonas spp. were less than 3,000,000 cell/ml (90.0%). The isolates of Pseudomonas spp. showed high susceptibility to cefepime (98.0%), ciprofloxacin (98.0%), ceftazidime (96.0%), and colistin (96.0%). The rate of antibiotic resistance in the isolates was highest to ceftiofur (92.0%), followed by the resistance rate to chloramphenicol (86.0%) and trimethoprim/sulphamethoxazole (80.0%). In addition, there is a remarkable difference in antimicrobial resistance pattern among Pseudomonas species. P. aeruginosa and P. putida showed a similar resistance pattern, whereas P. fluorescens showed exceptionally lower resistance to trimethoprim/sulphamethoxazole and chloramphenicol than that of the other species. This study showed that prevalence of Pseudomonas spp. other than P. aeruginosa were 30.0% in bovine mastitis milk, and the occurrence rate of antibiotic resistance were similar or higher level, compared with the previous reports on the mastitisderived Pseudomonas spp. isolated in Korea.
Marking biocontrol bacteria is an essential step to monitor bacterial behavior in natural environments before application in agricultural ecosystem. In this study, we presented the simple green fluorescent protein (GFP) reporter system driven by the promoter active in Bacillus species for tagging of the biocontrol bacteria. A constitutive promoter P43 from Bacillus subtilis was fused to an enhanced promoterless gfp gene by overlap extension PCR. The GFP expression was demonstrated by the high fluorescence intensity detected in B. subtilis and Escherichia coli transformed with the P43-gfp fusion construct, respectively. The GFP reporter system was further investigated in two bacterial biocontrol strains B. licheniformis and Pseudomonas fluorescens. When the reconstructed plasmid pWH34G was introduced into B. licheniformis, GFP level measured with the fluorescence intensity in B. licheniformis was almost equivalent to that in B. subtilis. However, GFP expression level was extremely low in other biocontrol bacteria P. fluorescens by transposon based stable insertion of the P43-gfp construct into the bacterial chromosome. This study provides information regarding to the efficient biomarker P43-gfp fusion construct for bio-control Bacillus species.
The majority of soil microorganisms can derive ethylene from L-methionine (L-MET), while some rhizobacteria can hydrolyze 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) due to their ACC-deaminase activity. In this study, three strains having either ACC-deaminase activity (Pseudomonas putida biotype A, $A_7$), or the ability to produce ethylene from L-MET (Acinetobacter calcoaceticus, $M_9$) or both (Pseudomonas fluorescens, $AM_3$) were used for inoculation. The highly ethylene specific bioassay of a classical 'triple' response in pea seedlings was used to investigate the effect of the inoculation with the rhizobacteria in the presence of 10 mM ACC or L-MET. The exogenous application of ACC had a concentration-dependent effect on the etiolated pea seedlings in creating the classical 'triple' response. The inoculation with P. putida diluted the effect of ACC, which was most likely due to its ACC-deaminase activity. Similarly, the application of $Co^{2+}$ reduced the ACC-imposed effect on etiolated pea seedlings. In contrast, the inoculation of A. calcoaceticus or P. fluorescens in the presence of L-MET caused a stronger classical 'triple' response in etiolated pea seedlings; most likely by producing ethylene from L-MET. This is the first study, to our knowledge, reporting on the comparative effect of rhizobacteria capable of utilizing ACC vs L-MET on etiolated pea seedlings.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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